第十三章 精液斑检验. 精斑检验的目的与其他物证检验目的一致： 为案件的侦查和审理提供线索和证据 精斑检验的目的与其他物证检验目的一致： 为案件的侦查和审理提供线索和证据 需解决的问题：斑痕是否为精斑？若是精 斑，确定精斑的个体来源。 需解决的问题：斑痕是否为精斑？若是精 斑，确定精斑的个体来源。

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1 第十三章 精液斑检验

2 精斑检验的目的与其他物证检验目的一致： 为案件的侦查和审理提供线索和证据 精斑检验的目的与其他物证检验目的一致： 为案件的侦查和审理提供线索和证据 需解决的问题：斑痕是否为精斑？若是精 斑，确定精斑的个体来源。 需解决的问题：斑痕是否为精斑？若是精 斑，确定精斑的个体来源。

3 一、 概述 一、 概述 精液性状 精液性状 乳白色半透明的粘稠液体，有特殊的异嗅味。 乳白色半透明的粘稠液体，有特殊的异嗅味。 弱碱性（ Ph72-8.6 ）比重（ 1.021-1.040 ）渗透压 0.55-0.58 弱碱性（ Ph72-8.6 ）比重（ 1.021-1.040 ）渗透压 0.55-0.58 凝固酶（精囊腺） 凝固酶（精囊腺） 5min 内凝固成较冻状 5min 内凝固成较冻状 中性蛋白酶及纤溶酶（前列腺） 中性蛋白酶及纤溶酶（前列腺） 20-30min 内液化成稀薄半流动体状 20-30min 内液化成稀薄半流动体状

4 成分构成 有形成分 精 子 呈蝌蚪状 长约 50-70ul ， 头部 ---- 正面观椭圆形，侧面观呈梨形 头部 ---- 正面观椭圆形，侧面观呈梨形 顶体 ---- 覆盖精子头部前 2/3 帽状结构 顶体 ---- 覆盖精子头部前 2/3 帽状结构 含有多种水解酶，穿透卵子 含有多种水解酶，穿透卵子 精子细胞核 -- 染色质，各种大小空泡 精子细胞核 -- 染色质，各种大小空泡 体部 ---- 呈圆柱状，内有中心原纤维轴丝 体部 ---- 呈圆柱状，内有中心原纤维轴丝 尾部 ---- 动力的来源，线粒体很多 尾部 ---- 动力的来源，线粒体很多 细胞成分 睾丸细胞、白细胞、柱状上皮细胞 细胞成分 睾丸细胞、白细胞、柱状上皮细胞 其他固体 卵磷脂小体 ----- 前列腺 其他固体 卵磷脂小体 ----- 前列腺 精 胺 结晶 ---- 精 胺 结晶 ---- 玻璃小体、色素颗粒、脂肪球 玻璃小体、色素颗粒、脂肪球 精 浆 是由男性各附属性腺分泌物组成，水分 90% ，其他 10% 其中有多种蛋白质（包括酶）、黄素、胆碱、精胺等 其中有多种蛋白质（包括酶）、黄素、胆碱、精胺等 精囊腺 50~80% 呈碱性， 精囊腺 50~80% 呈碱性， 含两种主要：果糖和凝固酶，及磷酸胆碱、黄素 含两种主要：果糖和凝固酶，及磷酸胆碱、黄素 前列腺 15~30% 呈酸性，透明状， 前列腺 15~30% 呈酸性，透明状， 含有酸性磷酸酶、纤溶酶、中性蛋白酶、精胺 含有酸性磷酸酶、纤溶酶、中性蛋白酶、精胺 尿道球腺和尿道旁腺 5% 呈浅灰白色的液体 尿道球腺和尿道旁腺 5% 呈浅灰白色的液体

5 化学组成 化学组成 蛋白质 精浆蛋白浓度约为 35~55mg/ml ， 蛋白质 精浆蛋白浓度约为 35~55mg/ml ， 略低于血清蛋白的平均浓度（ 72mg/ml ） 略低于血清蛋白的平均浓度（ 72mg/ml ） 血清共同蛋白 Tf 、 PI 、 ORM 、 GC 血清共同蛋白 Tf 、 PI 、 ORM 、 GC 精液特有蛋白 1966 γ — 精浆 蛋 白（ γ — Sm ） 精液特有蛋白 1966 γ — 精浆 蛋 白（ γ — Sm ） 1967 β — 精浆 蛋 白（ β — Sm ） 1967 β — 精浆 蛋 白（ β — Sm ） α 2 — 精浆糖蛋白（ α 2 — SGP ） α 2 — 精浆糖蛋白（ α 2 — SGP ） 1978 β — 微精浆蛋白（ β — MSP ） 1978 β — 微精浆蛋白（ β — MSP ） 1978 前列腺特异蛋白（ P30 ） 1978 前列腺特异蛋白（ P30 ） 蛋白酶 水解酶的含量最丰富 蛋白酶 水解酶的含量最丰富 某些酶活性水平很高： 某些酶活性水平很高： 酸性磷酸酶等酶活性较其他组织酶活性高 50~100 酸性磷酸酶等酶活性较其他组织酶活性高 50~100 某些酶活性保持较久： 某些酶活性保持较久： 肌酸磷酸激酶 (CPK) 酸性磷酸酶 (ACP) 一年以上 肌酸磷酸激酶 (CPK) 酸性磷酸酶 (ACP) 一年以上

6 二、精斑的肉眼检验 二、精斑的肉眼检验 目 的：发现可疑精斑、确定所在位置及分布，以便准确取材，提高 阳性检出绿。 目 的：发现可疑精斑、确定所在位置及分布，以便准确取材，提高 阳性检出绿。 记 录：精斑的分布情况、数目、位置、形状、大小、颜色及光泽等 记 录：精斑的分布情况、数目、位置、形状、大小、颜色及光泽等 精斑 部位 人体 --- 犯罪嫌疑人或被害人的外阴或大腿内侧、衣裤 精斑 部位 人体 --- 犯罪嫌疑人或被害人的外阴或大腿内侧、衣裤 现场 --- 被褥、毛巾、手纸、草席 现场 --- 被褥、毛巾、手纸、草席 外观 形状多呈不规则地图状，身体表面可成白色鳞片痂状 外观 形状多呈不规则地图状，身体表面可成白色鳞片痂状 深色布料 --- 浓厚精斑成灰白色状斑迹 深色布料 --- 浓厚精斑成灰白色状斑迹 浅色布料 --- 精斑多呈黄白色地图状。边缘较深 浅色布料 --- 精斑多呈黄白色地图状。边缘较深 软质载体 --- 触之有硬感 软质载体 --- 触之有硬感 辅助检查：陈旧或水洗过的精斑，可疑借助紫外光进行观察 辅助检查：陈旧或水洗过的精斑，可疑借助紫外光进行观察 现象 --- 紫外光下精斑呈银白色荧光，边缘呈浅紫兰色 现象 --- 紫外光下精斑呈银白色荧光，边缘呈浅紫兰色 原因 ---- 精斑中含有黄素，在紫外线下发荧光 原因 ---- 精斑中含有黄素，在紫外线下发荧光 意义 --- 阳性可能是精斑，（阴道分泌物、唾液、鼻涕、乳 意义 --- 阳性可能是精斑，（阴道分泌物、唾液、鼻涕、乳 汁等都可发荧光） 汁等都可发荧光）

7 三、精斑的预备试验 三、精斑的预备试验 酸性磷酸酶检验 酸性磷酸酶检验 实验依据：精斑中的酸性磷酸酶含量高：浓度 540~4000u/ml ，约是于其 他脏器的 100 倍；精斑中酸性磷酸酶稳定性好：抗腐败 --- 常温保存 10 年、 夏季室温 8 周腐败；耐高热 ---125 ℃加热 30min 仍可检出活性 实验依据：精斑中的酸性磷酸酶含量高：浓度 540~4000u/ml ，约是于其 他脏器的 100 倍；精斑中酸性磷酸酶稳定性好：抗腐败 --- 常温保存 10 年、 夏季室温 8 周腐败；耐高热 ---125 ℃加热 30min 仍可检出活性 检验方法： 检验方法： 磷酸苯二钠试验 磷酸苯二钠试验 原理： 原理： 方法：取可以斑痕 0.1*0.1 ，置于试管内，加反应缓冲液 3~4 滴， 方法：取可以斑痕 0.1*0.1 ，置于试管内，加反应缓冲液 3~4 滴， 37 度温箱内 5~30min ，然后加等量的显色缓冲液 37 度温箱内 5~30min ，然后加等量的显色缓冲液 结果：阳性 --- 立即出现红色 ---- 检材可能是精斑 结果：阳性 --- 立即出现红色 ---- 检材可能是精斑 阴性 --- 出现橙色 --- 检材不是精斑或酸性磷酸酶被破坏 阴性 --- 出现橙色 --- 检材不是精斑或酸性磷酸酶被破坏 特点：灵敏度高 ---20 000 倍稀释的精液仍可以出现阳性反应 特点：灵敏度高 ---20 000 倍稀释的精液仍可以出现阳性反应 磷酸萘酚 - 固蓝 B 试验 磷酸萘酚 - 固蓝 B 试验 原理： 原理： 方法：取少量检材置于白瓷板上，滴加试剂 1~2 滴 方法：取少量检材置于白瓷板上，滴加试剂 1~2 滴 结果：阳性 ----1min 以内出现深紫红色反应为 结果：阳性 ----1min 以内出现深紫红色反应为 阴性 ---- 不呈色或呈淡紫红色 阴性 ---- 不呈色或呈淡紫红色 特点：灵敏度不好，阴道液液可能呈阳性反应。 特点：灵敏度不好，阴道液液可能呈阳性反应。

8 其他检验：碘化碘钾结晶试验 方法：卵磷脂析出胆碱 + 碘 ---- 过碘胆碱结晶 方法：卵磷脂析出胆碱 + 碘 ---- 过碘胆碱结晶 特点：灵敏度不高 1 ： 400 ，特异性不好 [ 褐色或褐 红色针状、菱形结晶 ] 特点：灵敏度不高 1 ： 400 ，特异性不好 [ 褐色或褐 红色针状、菱形结晶 ]苦味酸结晶试验 方法：精素 ---- 分解产物 + 苦味酸 --- 精素苦味酸结 晶 方法：精素 ---- 分解产物 + 苦味酸 --- 精素苦味酸结 晶 特点：只有人的精液出现 — 种属鉴别 [ 青黄色有 折光的十字、柱、星结晶 ] 特点：只有人的精液出现 — 种属鉴别 [ 青黄色有 折光的十字、柱、星结晶 ]锌检出法 方法：双硫腙法、吡啶基偶氮萘酚法 方法：双硫腙法、吡啶基偶氮萘酚法 特点：特异性非常高，阳性几乎是精斑 特点：特异性非常高，阳性几乎是精斑

9 四、精斑的确证试验 四、精斑的确证试验 1 精子检出法 1 精子检出法 精子是认定精斑最简便、最可靠的方法。不需要特殊的一起和试剂。 精子是认定精斑最简便、最可靠的方法。不需要特殊的一起和试剂。 直接镜检：精子存活时间受多种因素的影响 直接镜检：精子存活时间受多种因素的影响 男性 前列腺液 — 有利于精子 男性 前列腺液 — 有利于精子 女性 阴道液 — 酸性 — 不利于精子 女性 阴道液 — 酸性 — 不利于精子 精 囊 液 — 有害于精子 精 囊 液 — 有害于精子 宫颈液 — 碱性 --- 保护精子 宫颈液 — 碱性 --- 保护精子 检材处理：浸泡：检材 1.5×1.5, 剪碎，置于试管中，加约 0.5ml 生理盐水， 室温 2 小时，然后 4 度冰箱过夜。可用玻璃棒搅拌或挤压检材。可用 5%~10% 的氨液浸泡检材 ---- 陈旧检材，眼水不易分离精子 检材处理：浸泡：检材 1.5×1.5, 剪碎，置于试管中，加约 0.5ml 生理盐水， 室温 2 小时，然后 4 度冰箱过夜。可用玻璃棒搅拌或挤压检材。可用 5%~10% 的氨液浸泡检材 ---- 陈旧检材，眼水不易分离精子 染色方法：单染 染色方法：单染 复染 苏木素 - 伊红（ HE ） 复染 苏木素 - 伊红（ HE ） 检出时限：活体 检出时限：活体 尸体 尸体 检 出 率： 24h 精子检出率为 50% ， 48h 仅为 10% 。 检 出 率： 24h 精子检出率为 50% ， 48h 仅为 10% 。

10 2. 免疫学检验 制备抗人精液特殊成分的抗血清，做沉淀反应 抗血清 抗 人 精 液 抗 体 --- 具有器官特异和种属 特异性 与其他体液交叉发应 — 吸收消除（乳、唾、血清） 灵敏度： 2000 以上阳性可以肯定精斑，对无精子症 更具价值 抗前列腺特异性抗原抗体 --- 具有高度的种属特异性 和器官特异性 抗前列腺特异性抗原抗体 --- 具有高度的种属特异性 和器官特异性 是目前确证人类精斑常用试剂，最理想的标 记、灵敏度和采用方法有关 是目前确证人类精斑常用试剂，最理想的标 记、灵敏度和采用方法有关 方法：酶联免疫吸附实验，胶体金法

11 3 生化学检验 乳酸脱氢酶 -X ：位于 LDH3 和 4 之间，由精 子产生 亮氨酸氨肽酶：存在于精浆，滴加试剂呈粉 红色

12 五、精斑的个人识别 五、精斑的个人识别 1 精斑的 ABO 血型检测 1 精斑的 ABO 血型检测 中和试验：原理 精斑中的水溶性 ABH 血型物质，能 特异地与相应的抗体结合，使抗体与指示红细胞的 凝集能力减低或消失。 中和试验：原理 精斑中的水溶性 ABH 血型物质，能 特异地与相应的抗体结合，使抗体与指示红细胞的 凝集能力减低或消失。 方法 方法 注意： 1 血清效价 4 倍 注意： 1 血清效价 4 倍 2 中和时间至少 30min 2 中和时间至少 30min 3 检材浑浊 — 煮沸 — 离心 3 检材浑浊 — 煮沸 — 离心 ELISA 法：灵敏度高（ 10 -4 ~10 -5 ） --- 防止交叉污染 ELISA 法：灵敏度高（ 10 -4 ~10 -5 ） --- 防止交叉污染 DNA 分型： DNA 分型：

13 2 精斑的血清型检测 2 精斑的血清型检测 可检出的系统： Gm ， Km ， GC ， ORM 可检出的系统： Gm ， Km ， GC ， ORM 3 精斑的酶型检测 3 精斑的酶型检测 其中 PGM1 和 Fu 较稳定， PGM1 最常用 其中 PGM1 和 Fu 较稳定， PGM1 最常用

14 4 精斑的 DNA 分析 4 精斑的 DNA 分析 适用范围：即使精液中没有精子，由于精液中含有少量 睾丸细胞、上皮细胞等都可应用。 适用范围：即使精液中没有精子，由于精液中含有少量 睾丸细胞、上皮细胞等都可应用。 分析方法： PCR 技术 ----STR 、 VNTR 分析方法： PCR 技术 ----STR 、 VNTR 特殊应用：可以利用父系亲属的血样进行排除推测 特殊应用：可以利用父系亲属的血样进行排除推测 不受女性成分的干扰，并可推测犯罪嫌疑人的数 目 不受女性成分的干扰，并可推测犯罪嫌疑人的数 目 结果评估：用于排除同一性，没有认定同一性的作用。 结果评估：用于排除同一性，没有认定同一性的作用。 统计分析： Y 染色体上的各基因座在遗传时是连锁的， 以单倍型遗传，不可独立计算。 统计分析： Y 染色体上的各基因座在遗传时是连锁的， 以单倍型遗传，不可独立计算。