实验十四 干化学试带法尿液检查.

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1 实验十四 干化学试带法尿液检查

2 【目的】 掌握尿液检查干化学试带的反应原理和使用注意事项。
【原理】 1．试带构成 在长条形塑料片上每隔一定距离（约2mm）有一正方形试剂模块（5mm×5mm），其中有两块集中在试纸条一端，分别是空白模块尿液颜色参比模块，可作为对照使用；其余模块分别含有相应干式化学试剂（图5-25）。试剂中的碘酸盐可破坏VitC等还原性物质，消除VitC中的碘酸盐可破坏Vit C等还原性物质，消除VitC对其他反应的干扰；若不含碘酸盐，试纸条将增加Vit C检测模块，以便对Vit C干扰项目的质控和校正。

3 2．检测项目 尿液的酸碱度（pH）、比密（SG）、蛋白质（PRO）、葡萄糖（GLU）、酮体（KET）、胆红素（BIL）、尿胆原（URO）、 亚硝酸盐（NIT）、白细胞（LEU/WBC）、红细胞（RBC/ERY）或隐血（Hb）、维生素C（Vit C），一个或多个检测内容可组成不同的组合。 3．试带反应原理 ⑴酸碱度（pH）：采用pH指示剂法。用甲基红（pH4.6～6.2）和溴麝香草酚蓝（pH6.0～7.8）两种指示剂适量组合成为复合pH试剂模块，其呈色范围为pH4.5～9.0，颜色发生橙红、黄绿及蓝色变化。

4 ⑵比密（SG）：采用离子交换pH指示剂法。尿液中电解质释放出的阳离子与试带中的离子交换体中的H＋交换，释放出的H＋与酸碱指示剂反应，根据指示剂显示的颜色（蓝、绿及黄）可换算尿液中的电解质浓度，以电解质浓度来代表密度，从而得出比密值。 ⑶尿蛋白（PRO）：采用 pH指示剂蛋白误差法。试剂模块中主要含有酸碱指示剂溴酚蓝、枸橼酸缓冲系统和表面活性剂。在pH3.2时，溴酚蓝电离、带负电荷并释放H＋，带负电荷的溴酚蓝与此时带正电荷的蛋白质（白蛋白）生成复合物，导致溴酚蓝进一步电离产生更多的H＋，当超过缓冲范围时，指示剂发生颜色改变（黄、绿及蓝），变色程度与蛋白质含量成正比。

5 ⑷尿葡萄糖（GLU）：采用葡萄糖氧化酶法。尿液中葡萄糖在试带中葡萄糖氧化酶的催化下，生成葡萄糖酸内酯和过氧化氢。在有过氧化物酶的情况下，以过氧化氢为电子受体使色素原（邻甲联苯胺、碘化钾等）氧化而呈色。色素原不同，呈色可为蓝色、红褐色或红色。 ⑸尿酮体（KET）：采用亚硝基铁氰化钠法。检测尿酮体的模块中主要含有亚硝基铁氰化钠，可与尿液中的乙酰乙酸、丙酮产生紫色反应。其对乙酰乙酸的敏感性为50～100mg/L，对丙酮为400～700mg/L，不与β-羟丁酸起反应。

6 ⑹尿亚硝酸盐（NIT）：采用偶氮法。尿液中含有来自食物或蛋白质代谢产生的硝酸盐，如尿液中含有大肠埃希菌等具硝酸盐还原酶的细菌时，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐与芳香胺的重氮化反应形成重氮盐，随后发生偶联反应，形成红色重氮色素。 ⑺尿胆红素（BIL）：采用偶氮法。在强酸性介质中，胆红素与试带上的二氯苯胺重氮盐起偶联作用，生成红色偶氮化合物。

7 ⑻尿胆原（URO）：采用①醛化反应法：在强酸条件下尿胆原和对-二甲氨基苯甲醛发生醛化反应，生成樱红色缩合物。②偶氮法：在强酸条件下尿胆原和对-四氧基苯重氮四氟化硼发生重氮盐偶联反应，生成胭脂红色化合物。 ⑼尿白细胞（LEU）：采用中性粒细胞酯酶法。中性粒细胞的酯酶能水解吲哚酚酯生成吲哚酚和有机酸，吲哚酚可进一步氧化形成靛蓝，或吲哚酚和重氮盐反应生成紫色重氮色素。

8 ⑽尿红细胞（RBC）或血红蛋白（Hb）：采用过氧化物酶法。血红蛋白中亚铁血红素具有弱的过氧化物酶样作用，以催化H2O2作为电子受体使色原（常用的有邻联甲苯胺、氨基比林、联苯胺等）氧化呈蓝绿色，其颜色的深浅与血红蛋白成正比。 ⑾尿维生素C（VitC）：采用还原法。试剂模块中含有2，6-二氯酚靛酚钠、中性红、亚甲基绿磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，维生素C能还原氧化型染料，而使指示剂发生由绿或深蓝至粉红色的颜色变化，颜色的深浅与VitC含量成正比。也有采用VitC和作为色素原的磷钼酸反应，形成钼蓝的原理。

9 【操作】 1．混匀尿液 2．浸湿试带 3．沥去多余尿液 4．比色与分析 5．报告方式

10 【注意事项】 1．熟悉试带特性 必须了解所用试带各膜块反应原 理、药物干扰以及参考范围等，掌握试带检测每一成分的敏感度和特异性。很多中间环节和干扰因素都可影响颜色变化而导致假阳性或假阴性。同一检测项目，不同厂家所用的色素原可能不同，因此存在显色差别 2．注意试带保存条件 尿试带应根据厂家推荐的条 件（如温度、暗处等）保存，在有效期内使用。不应将试带放在直射光下照射或暴露在潮湿环境中，应保存在厂商提供的容器中，不可更换保存容器。

11 3．规范操作 （1）试带从冷藏冰箱中拿出后，待平衡至室温再打开盛装的筒盖。一次只取所需要量的试带，并应立即将瓶盖盖好。多余试带不得放回原容器中，更不应该合并各瓶的试带。 （2）试带与尿液的反应时间需严格遵循产品说明书的规定，操作中注意切勿触摸试带上的反应检测模块。 （3）试带浸入尿液标本的时间应在1～2s，所有试剂模块，包括空白和参比模块，要全部渗入尿液中，试带上过多的尿液标本应去除干净。

12 4．结果分析 （1）尿液干化学测定结果与传统湿化学法存在差异。 （2）必要时，试带法干化学检测尿液结果应做确证试验。 （3）尿液干化学试带检查仅是一个过筛手段，适用于健康普查和疾病筛选，不能完全替代尿液有形成分显微镜检查，特别是蛋白质、白细胞、红细胞、亚硝酸盐中任一项阳性，必须进行人工镜检。 （4）尿液干化学测试结果应与理学、显微镜检查结果相结合，互相印证才能为临床提供有价值的信息。

13 （5）肾移植病人发生免疫排斥时尿液中出现大量淋巴细胞，但由于其胞质无中性粒细胞酯酶，干化学试带法检测白细胞阴性。
（6）白细胞检测时出现干化学试带法“阳性”而镜检“阴性”的结果，可能与尿液在膀胱贮存时间过长、中性粒细胞中被破坏后其酯酶释放到尿液中有关。红细胞出现此类结果可能是因为红细胞在尿液中被破坏，无完整红细胞（血红蛋白释放），或尿液中含高活性不耐热的触酶。对于后者，可将尿液煮沸冷却后再测试，验证和排除“假阳性”结果。