缺血性心脏病治疗新药探索 杨志健 江苏省人民医院心内科.

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1 缺血性心脏病治疗新药探索 杨志健 江苏省人民医院心内科

2 病例1 病例2 LVEF 35% 广泛前壁心肌梗死经PCI开通前降支，6个月后复查，血流良好，但前壁运动明显减弱，室壁瘤形成

3 A heart with 67 stents 药物 介入治疗 外科搭桥手术 装置治疗

4 基因治疗的概念 导入——遗传物质——干预、治疗疾病
导入遗传物质，在基因水平调控缺陷基因表达或以正常基因矫正替代缺陷基因，以治疗相关的遗传病或基因相关的疾病。

5 基因治疗的方式 “离体” 基因治疗(ex vivo) “体内” 基因治疗(in vivo) 局部注射 体外培养 基因修饰 超声导入
动静脉内注射　 回输 “离体” 基因治疗(ex vivo) “体内” 基因治疗(in vivo)

6 基因治疗被2009年Science杂志评选为 全球十大科学进展之一
始祖种地猿研究 Fermi所探测到的脉冲星 雷帕霉素 石墨烯 植物的ABA受体 世界首个X射线激光 基因疗法的卷土重来（发现基因疗法在治疗帕金森症、遗传性眼疾病及肿瘤等多种疾病取得好的疗效。） 单极子 LCROSS月球探测器在月球上发现了水 对Hubble的修复 

7 基因治疗已在某些难治之症上取得疗效 肿瘤、HIV、遗传病等 Nature Medince 2009;15:258
JNCI, 2008;100:1276 J. Clin Oncol,2009;27:799 N Engl J Med 2008;358:2231 N Engl J Med 2008;358:2240 Nature Medince 2009;15:258

8 全球基因治疗临床试验发展平稳

9 基因治疗临床试验产品主要使用的表达载体

10 基因治疗临床试验

11 基因治疗临床试验适应症

12 基因治疗临床试验项目国家分布情况

13 我国目前进展较好的基因治疗临床试验项目

14 我国上市和进入临床试验阶阶段的基因治疗、免疫细胞治疗产品
产品名称  商品名  研发机构或生产厂家  所处的状态  适应症 APA-BCC镇痛微囊 艾克雷斯 中国人民解放军总医院 上市销售 肿瘤患者的长效镇痛 重组腺病毒-p53抗癌注射液 今又生 深圳赛百诺公司 治疗头颈部肿瘤 H101基因工程腺病毒注射液 安柯瑞 上海三维生物 治疗鼻咽癌、肺癌 重组腺病毒载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因制剂 华中科技大学、深圳市天达康基因工程有限公司 Ⅲ期临床试验 治疗肝癌、头颈部肿瘤等 抗原致敏的人树突状细胞 第二军医大学 Ⅱ期临床已完 治疗大肠癌 重组人内皮抑素腺病毒注射液（E10A） 中山大学、广州达博生物科技 肿瘤选择性溶瘤重组腺病毒（KH901） 成都康弘生物 重组腺病毒-肝细胞生长因子注射液（Ad-HGF） 军事医学科学院、人福医药 Ⅱ期临床试验 治疗重症缺血性心脏病 血管靶向性基因治疗――EDS01 四川大学、成都恩多斯 Ⅰ期临床试验已经完成 溶瘤性重组腺病毒注射液（H103） 治疗肿瘤 重组人IL-2腺病毒抗癌注射液 成都华神集团 重组人γ-干扰素腺病毒（Ad-rhIFNγ） 中山大学、广州达博生物 Ⅰ期临床试验 γδ T细胞治疗制剂 医科院基础研究所 多种肿瘤 NY-ESO-1b多肽疫苗 北京大学 肝癌治疗

15 重组AAV-2/人凝血因子IX注射液 复旦大学 Ⅰ期临床试验 治疗血友病B 重组人EGF-P64K/Mont肿瘤治疗性疫苗） 百泰生物药业公司 多种肿瘤 重组人GM－CSF单纯疱疹病毒注射液（OrienX010） 北京奥源和力生物技术有限公司、中国医学科学院肿瘤研究所 DC细胞与细胞因子共同诱导的杀伤细胞（DC-CIK） 中科院上海细胞与生化研究所 治疗肿瘤 IL-2基因工程胃癌瘤苗 第二军医大学 治疗胃癌 第一代TK基因治疗制剂 上海交通大学、上海市肿瘤研究所 治疗脑胶质瘤 多基因共转导自体骨髓间充质干细胞制剂 北京大学 特殊临床试验 肌萎缩侧索硬化症 LMP2抗原修饰的树突状细胞疫苗 北京工业大学、中国CDC病毒病所、广西自治区人民医院 鼻咽癌 血管内皮生长因子基因治疗注射液 治疗肢体动脉梗塞 NKG-IL15细胞治疗疫苗（基因修饰的NK细胞） 中国科技大学 完成临床前、上药审会 基因－溶瘤腺病毒治疗剂SG600-P53 HER2/neu mRNA致敏树突状细胞疫苗 浙江大学 乳腺癌

16 重组腺病毒—肝细胞生长因子注射液进入了Ⅱ期临床试验研究。
II期临床研究批件 II期临床试验 南京医科大学第一附属医院

17 新型经皮心肌注射器 存在的问题：给药途径 解决办法：研发新的新型经皮心肌注射器

18 经皮心肌注射器注射Ad-HGF II期临床试验
国内首次利用自主研发经皮心肌注射器注射细胞因子 手术过程顺利 病人术后无不适感觉

19 EnSite NavX系统功能 导航定位标测技术 诊断定位标测技术 激动时间信息 电压信息

20 NavX: 非透视导航

21 激动及电压标测窗口 电压选项 局部电压

22 septum apex 梗死区域周边移行区-HGF生长因子注射

23 Huang YF （5*109） （一） 64 45.9 39 8 Ⅲ 60 ↓ 51.3 ↑ 40 ↑ 9 Ⅱ ↑ 59 ↓ 49.4 ↓
LVDd EF（2-DE） EF（ECT） SRS 心功能(NYHA) 术前 64 45.9 39 8 Ⅲ 术后4周 60 ↓ 51.3 ↑ 40 ↑ 9 Ⅱ ↑ 术后12周 59 ↓ 49.4 ↓ 11 术后6月 57↓ 50.9↑ 6 ↑ 电标梗死区域： 电压均值及标记点数 （治疗前、后6月） 电标测梗死区域： 总疤痕面积(mm2) 注射点（5个）周围2cm： 均值及标记点数 健康心肌： 电压均值 （治疗前后） （12个点） ↑ （24-81） ↑ 点 ↓(10-14) 点 ↓(12-10) 点 ↓（12-17） 点 ↑（8-15） 点 ↑（14-13） 总点 ↓（56-69）

24 Huang YF （5*109） （二） 血液学指标 术前 术后1月 术后3月 术后6月 WBC（1*109/L） 6.8 7.2 6.1
5.4 RBC（1*1012/L） 3.8 3.2 4.1 3.9 Hb (g/L) 123 127 135 129 ALT (U/L) 22.8 33.9 39.2 28.7 AST (U/L) 34.9 40.1 33.7 GGT (U/L) 44.1 41.5 48.3 43.2 BUN (mmol/L) 6.31 5.22 6.71 6.13 Cr (umol/L) 97.6 77.3 80.1 78.5 AFP (ug/L) 4.12 3.29 4.01 3.88 CEA (ug/L) 1.58 2.13 1.77 2.03

25 Huang YF （三） 注射前 注射后6个月

26 Cai XH （5*109） （一） LVDd EF（2-DE） EF（ECT） SRS 心功能(NYHA) 术前 69 40.4 18 24 Ⅲ 术后4周 67 ↓ 41.5 ↑ 20 ↑ Ⅱ ↑ 术后12周 47.6 ↑ 24 ↑ 20 术后6月 65 ↓ 47.8↑ 19 ↑ 16 ↑ 电标梗死区域： 电压均值及标记点数 （治疗前、后6月） 电标测梗死区域： 总疤痕面积(mm2) 注射点（5个）周围2cm： 均值及标记点数 健康心肌： 电压均值 （治疗前后） （12个点） ↓ （ ） ↑ 点 ↓(17-12) 点 ↓(13-14) 点 ↓（15-14） 点 ↓（14-15） 点 ↓（14-12） 总点 ↓（73-77）

27 血液学指标 Cai XH （5*109） （二） 术前 术后1月 术后3月 术后6月 WBC（1*109/L） 8.2 8.9 7.5
10.3 RBC（1*1012/L） 5.1 4.3 4.9 5.2 Hb (g/L) 133 141 139 147 ALT (U/L) 41.2 39.1 42.5 32.5 AST (U/L) 49.2 42.8 39.2 33.9 GGT (U/L) 32.9 50.3 41.8 39.6 BUN (mmol/L) 4.23 3.14 6..57 5.22 Cr (umol/L) 87.1 99.3 76.3 88.5 AFP (ug/L) 2.11 3.89 4.22 3.21 CEA (ug/L) 0.58 1.12 0.87 2.82

28 Cai XH （三） 注射前 注射后6个月

29 Ad-HGF注射点部位 1.间隔靠二尖瓣环 2.间隔靠心尖 3.心尖靠前壁 4.游离壁靠心尖 5.游离壁靠瓣环

30 主要的关键科学问题 基因治疗载体在体内归巢、分化及安全性等关键性研究； 基因治疗的给药关键技术研究； 基因治疗的临床病例选择
基因治疗有效性研究； 基因治疗产品的规模化生产及质量控制研究；

31 中药单体改善心梗小鼠生存状态及心功能的机制
杨志健 教授 江苏省人民医院心内科副主任 江苏省人民医院老年医学科主任

32 五味子 麝香 人参 ▪ 五味子乙素 ▪ 麝香酮 ▪ 人参皂苷Rg1

33 一、五味子乙素对心梗小鼠心脏保护作用 ▪ 研 究 背 景 ▪ 研 究 目 的 ▪ 研 究 方 法 ▪ 研 究 结 果

34 研究背景 ▪ 五味子乙素 ▪ 在东亚地区，五味子作为中草药广泛的运用 于呼吸困难、咳嗽、失眠、腹泻、慢性中毒等症状。
▪ 在东亚地区，五味子作为中草药广泛的运用 于呼吸困难、咳嗽、失眠、腹泻、慢性中毒等症状。 ▪ 研究发现，五味子主要有12种提纯单体， 五味子乙素（Schisandrin B）是其中含量最高的一种。 联苯环辛二烯

35 ▪ 在心肌细胞实验中被证实能够抗氧化、抗凋亡等作用。
研究背景 ▪ 五味子乙素对心血管系统的益处 ▪ 通过抗炎、抗氧化改善心肌缺血再灌注损伤。 ▪ 减轻某些化疗药物的心脏毒性作用。 ▪ 在心肌细胞实验中被证实能够抗氧化、抗凋亡等作用。 五味子对心梗的治疗机制现有文献很少 ▪ 在动物实验模型中能够降低血液甘油三酯和总胆固醇浓度。

36 研究方法 制作心梗模型小鼠 小鼠分组 给药21天观察生存率测定心功能 处死并解剖观察心脏病理改变 分子水平实验室相关检测 统计学分析

37 研究结果 1、完成小鼠心梗模型 ▪ 小鼠是心血管系统研究的强有力的工具。
▪ 小鼠心梗模型在模拟人体心血管系统疾病的预防、诊断以及治疗起着重要的作用。其中，结扎小鼠冠脉前降支（LAD）是急性心梗模型的制作手段。 现有文献关于五味子乙素对心梗小鼠的实验几乎没有，根据查阅的文献，我们推测五味子乙素对心梗是具有保护作用的。

38 研究结果 假手术 心梗

39 研究结果 ▪ 心梗小鼠心电图ST段抬高 假手术组心电图 心梗小鼠心电图

40 研究结果 2.五味子乙素能提高生存率

41 研究结果 3.五味子乙素能改善心功能 室壁变薄，心腔扩大，收缩能力减弱

42 研究结果 3.五味子乙素能改善心肌重构

43 研究结果 3.五味子乙素能改善心肌重构 心脏体重比 肺脏体重比

44 研究结果 4.五味子乙素能降低梗死面积

45 研究结果 5.五味子乙素使心梗小鼠心肌组织结构紊乱减少

46 研究结果 6.五味子乙素具有抗纤维化作用

47 研究结果 6.五味子乙素具有抗炎、抗纤维化作用

48 研究结果 7.五味子乙素能抗细胞凋亡

49 研究结果 7.五味子乙素能抗细胞凋亡

50 研究结果 8、五味子乙素能促进细胞的增殖

51 研究结果 9、五味子乙素的剂量依赖性在H2c9细胞上的验证

52 二、麝香酮对心梗小鼠心脏保护作用 ▪ 研 究 背 景 ▪ 研 究 目 的 ▪ 研 究 方 法 ▪ 研 究 结 果

53 研究背景 麝香保心丸 研究报道：麝香保心丸可以改善大鼠急性心梗模型的血流动力学指标，缩小心梗面积，减少心肌重构，改善左室形态，提高心功能。
另有研究显示：麝香保心丸不仅有扩血管作用，还可以促进VEGF及其受体的表达，有促进心梗后血管新生的作用。 此外，麝香保心丸还可以降低心梗后炎症因子TNF-a，IL-6，ET等。 麝香是麝香保心丸的主要成分，而麝香酮是麝香的单体有效成分。

54 研究背景 麝香酮（ Muscone，musk ketone）
麝香酮是从鹿科动物林麝或原麝成熟雄体香囊中的干燥分泌物麝香经蒸馏提取得到的活性成分之一，学名为3-甲基环十五烷酮，是麝香的主要香味成分，可人工合成。天然的麝香酮为左旋体，合成的一般为右旋体。 微黄色油状液体，有强烈的麝香香气，极微溶于水，能与乙醇混溶。 具有芳香开窍、通经活络、消肿止痛作用，小剂量对中枢神经有兴奋作用，大剂量则有抑制作用。对离体蛙心脏有兴奋作用，并有雄性激素样作用及抗炎作用。 临床上用于冠心病心绞痛、血管性头痛、坐骨神经痛、白癜风等。本品国内已合成生产。人工合成品的药理作用，经试验与天然麝香酮相似。

55 ▪ 在心肌细胞缺血再灌注损伤实验中被证实能够抗氧化、抗凋亡等作用。
研究背景 ▪目前已证实的麝香酮对心血管系统的益处 ▪ 通过抗炎、抗氧化改善心肌缺血再灌注损伤。 ▪ 在心肌细胞缺血再灌注损伤实验中被证实能够抗氧化、抗凋亡等作用。

56 研究背景 ？ 改善心梗后的心肌重构

57 研究方法 制作心梗模型小鼠 小鼠分组 给药21天观察生存率测定心功能 处死并解剖观察心脏病理改变 分子水平实验室相关检测 统计学分析

58 研究结果 1.麝香酮有提高心梗后小鼠21天生存率的趋势

59 研究结果 2.麝香酮能改善心功能 室壁变薄，心腔扩大，收缩能力减弱 59

60 2.麝香酮能改善心功能 给药组 对照组

61 研究结果 3.麝香酮能改善心肌肥厚及心腔扩大（心肌重构）

62 研究结果 4.麝香酮具有减少心肌纤维化面积的趋势（Masson染色） 对照组 给药组

63 研究结果 5、麝香酮能抑制炎症因子表达

64 研究结果 AKT p-Akt eNOS pNOS 6、麝香酮能促进p-Akt，p-NOS的表达，改善内皮功能，起到扩血管及血管新生作用
假手术组 给药组 对照组

65 研究结果 6.麝香酮能促进BCL-2、抑制BAX表达、抑制NF-kB表达，起到抗炎、抗凋亡作用。 Bcl-2 Bax NF-kB GAPDH
假手术组 给药组 对照组

66 三、人参皂苷Rg1对糖尿病小鼠肢体缺 血的有益作用
▪ 研 究 背 景 ▪ 研 究 目 的 ▪ 研 究 方 法 ▪ 研 究 结 果

67 研究背景 ▪ 下肢动脉疾病（PAD）是下肢动脉粥样硬化引起的血管阻塞性疾病。下肢动脉疾病在世界范围内有很高的发病率，其最常见的症状是间歇性跛行，静息痛，下肢溃疡或组织缺失。 ▪ 糖尿病长期的高血糖状态，同时伴随的脂质代谢紊乱，高胰岛素血症以及胰岛素抵抗等，这些因素共同促进了动脉粥样硬化的发生及发展。

68 研究背景 ▪ 人参是一种五加科属的多年生草本植物，在中国被用来作为药用植物已经有2000多年的历史，并且在过去的数十年中在西方国家也得到了普及应用。 ▪ 人参具有广泛的治疗和药理用途。目前认为人参具有促进血管新生，抗肿瘤，抗应激和抗氧化作用。 ▪ 人参皂苷Rg1是人参中主要的活性成分。

69 研究方法 制作后肢缺血模型小鼠 小鼠分组 给药3周观察后肢坏疽情况及血流动力学 处死并解剖观察病理改变 分子水平实验室相关检测 统计学分析

70 研究结果 制作右后肢肢体缺血模型结果 C57BL/6J小鼠右后肢未结扎（A）及结扎后（B）激光多普勒血流图像。

71 研究结果 2.Rg1减少脚趾坏疽的发生率 未治疗糖尿病组 5/13(38.5%） Rg1治疗糖尿病组 1/12(8.3%） 未治疗正常对照组
1/11(9.1%） Rg1治疗正常对照组 0/10

72 3.Rg1促进肢体缺血后血流恢复

73 4.Rg1增加了缺血肢体血管新生

74 5.Rg1增加缺血肢体VEGF表达水平

75 研究成果 ▪五味子乙素相关论文已被PLOS ONE杂志（IF：3.73）接收 ▪人参皂苷Rg1相关论文已在ABBS杂志（IF：1.8）发表

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