荧光定量PCR技术 在临床检验工作中的应用

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1 荧光定量PCR技术 在临床检验工作中的应用
美国应用生物系统公司 AppliedBiosystems 荧光定量PCR技术 在临床检验工作中的应用 Xiaoyuan Liang Marketing Specialist

2 The vision behind the creation of Applera is coming to pass.
The businesses of Applera share … The separate roles of AB and CRA. AB as a supplier of systems to CRA. CRA is now providing content for assays AB is developing – something you will hear a lot more about today. CDx has been established as a JV. Over the last 12 months, the management team at CDx has made great progress to develop and to begin to execute on a compelling business and scientific strategy that Kathy Ordonez and John Sninsky will share with you today.

3 全球分析仪器及实验室设备销售额排名： ABI公司名列全世界第一！ 2004年3月20日

4 ABI提供基因分析全套解决方案 PCR仪： 荧光实时定量PCR仪： 遗传分析仪: DNA/RNA自动提取仪 DNA合成仪 热循环仪器专利！
2400，9600， 2720，9700，9800 荧光实时定量PCR仪： 7700, 7900, ， 7300， 7500 遗传分析仪: 310, , 3130XL， 3730， 3730xl DNA/RNA自动提取仪 6100/Tempus 人全血RNA提取反应管 DNA合成仪 3900, 3400 热循环仪器专利！

5 2004年Applied Biosystems公司 基因分析新产品:更快,更好,更高通量,应用更广
2004年２月 /7500型荧光定量PCR　 2004年４月 全基因组表达谱芯片 2004年6月 SNPlex技术 2004年9月 PCR扩增仪 2004年10月 快速荧光定量PCR扩增系统 35分钟完成 仪器/试剂/新型96孔板/20微升 2004年10月 快速PCR扩增系统:25分钟 2004年11月 /3130XL 基因分析仪

6 快速检测血液中可能存在的病原体 6100 自动核酸提取仪 定性分析: 发现新病源体/已知病原体分型 定量分析:
30分钟内提取96个样品中的RNA 可以提取同一样品的DNA 和 RNA 定性分析: 发现新病源体/已知病原体分型 9800 PCR: 25分钟 3130/3130XL: 40分钟/500碱基,1小时/700碱基 2小时: Q20以上950个碱基 定量分析: 7300/7500: 96孔板 7900: 384个样品/自动进样/35分钟

7 The World’s Most Trusted PCR Solutions.
Fast PCR System 分钟30个循环 The World’s Most Trusted PCR Solutions.

8 MJ Research侵权，被判罚1980万美圆 APPLIED BIOSYSTEMS AND ROCHE MOLECULAR SYSTEMS WIN PATENT INFRINGEMENT LITIGATION AGAINST MJ RESEARCH FOSTER CITY, CA – April 19, 2004 – Applied Biosystems (NYSE:ABI), an Applera Corporation business, today announced that a U.S. District Court jury in New Haven, CT has returned a favorable decision in a lawsuit brought by Applera Corporation and Roche Molecular Systems, Inc. against MJ Research, Inc and its principals, Michael and John Finney. The jury found that MJ Research infringed U.S. patent Nos. 4,683,195, 4,683,202 and 4,965,188 (each relates to polymerase chain reaction [PCR] process technology) and U.S. patent Nos. 5,656,493, 5,333,675 and 5,475,610 (each relates to thermal cycler instrument technology). The jury found the infringement of the ‘195, ‘202, ‘188 and ‘493 patents to be willful. In addition to direct infringement by MJ Research of the ‘610 and ‘675 patents, the jury found that MJ Research induced its customers to infringe all of the patents and contributed to infringement by its customers of the ‘610 and ‘675 patents. The jury awarded damages in the amount of $19.8 million to Applied Biosystems and Roche Molecular Systems. Applied Biosystems and Roche Molecular Systems are pursuing an enhancement of damages, including legal fees, since several infringements were found to be willful. Additionally, the companies are seeking an injunction against

9 AB 荧光定量PCR仪大家族 5700/7700/7000/7900/7300/7500 61

10 ABI 公司荧光定量PCR仪器介绍 第一代荧光定量PCR仪 第二代荧光定量PCR仪 第三代荧光定量PCR仪

11 7000型荧光定量PCR仪获2002年世界科学家杂志“最佳仪器奖”
2002年12月9日发表

12 第三代荧光定量PCR仪 2004年 2月最新推出！ 7300型荧光定量仪！ 7500型荧光定量仪

13 2004年11月7300/7500获得医疗器械注册证 市场上最新款的荧光定量PCR仪

14 Applied Biosystems 7900HT 快速荧光定量 PCR 系统
快速模式的反应结果和标准模式的反应结果相当 所有现有的 7900HT 的客户可以进行快速模式的升级 We are the only company that can offer a complete fast system in a standard 96-well format In addition, our upgrade options make it easy for any existing customer to be able to run our new fast block

15 2004年11月10日 获得荧光定量PCR仪器技术的专利 (Patent No. 6,814,934).

16 ABI荧光定量PCR仪系统——硬件功能 新型低温CCD检测器， 信噪比更高，保证更高检测灵敏度
单一报告荧光TaqMan实验中仅10个起始拷贝数的模板，其置信度高达99.7% 新型卤钨灯光源，使用寿命更长，机器配有时间监测功能 使用寿命>2000小时 四色－五色滤光片配置， 支持多重定量！ 光源 滤光片 反射镜 FAM™, SYBR® Green I VIC™, JOE™ NED™,TAMRA™, CY3 Dye™. ROX™ (passive reference), Texas Red® CY5 Dye™ 超低温CCD 双色镜 多元镜 96孔透镜组 四色滤光片 96孔样品板

17 ABI荧光标记--化学特性及发光强度线性范围基本相同
同时检测4色荧光，支持多重定量和突变分析! ABI荧光标记--化学特性及发光强度线性范围基本相同 517nm FAM/SYBR Green（兰色） 第一报告荧光：靶基因1定量指标， 554nm VIC 绿色 第二报告荧光：靶基因2或IPC定量指标 583nm TAMRA，黄色 淬灭荧光，强度随PCR变化 607nm Rox，红色 内置荧光强度校准，荧光强度不受PCR影响，可校准加样误差及孔间差异。

18 ROX管内荧光强度校准的好处 排除两大干扰！ 减少加样误差, 消除孔间差异！ Reporter / Reference Reporter

19 多种基因同时定量 TNF-, TGF-, TNF- and lymphotoxin- 四种基因定量扩增， 每种取5个复管
18S 核糖体 RNA 20管 定量重复扩增

20 ABI荧光定量PCR仪系统——性能特点 线性范围更宽！至少9个数量级的线性范围！ 灵敏度更高！单一报告荧光TaqMan实验中
仅10个起始拷贝数的模板，置信度高达99.7% 具有绝对定量、相对定量、等位基因分型、 阴阳性结果自动判定 (+/-)功能 支持 最大反应体积 = 100uL 最小反映体积 = 25uL 标准96孔反应板，8连管，单管 开放试剂

21 ABI公司荧光定量PCR仪系统综合应用 绝对定量 (AQ) 相对定量 (RQ) 等位基因分析 (AD) 阴阳性结果自动判定 (+/-)
精确进行病原体含量鉴定和基因模板定量 相对定量 (RQ) 可同时分析10块96孔反应板的数据 大规模高通量对比观察、追踪动态变化 等位基因分析 (AD) 自动判定杂合位点类型 高通量筛选SNP 阴阳性结果自动判定 (+/-) 快速、方便用于临床、卫检等辅助诊断

22 SDS 1.2－扩增曲线

23 SDS 1.2－相对定量

24 SDS 1.2－等位基因分型

25 ABI荧光定量PCR仪的使用优点 消耗品便宜 0.2ml反应管，标准消耗品 进口的约0.2元/个 国产的约几分钱/个 操作简单
使用普通移液器加样

26 ABI荧光定量仪的使用优点 标准品成本低 实验设计容易 每批可以检测96个样品 每批样品检测应做5个标准曲线， 2个阴性对照，1个阳性对照
可以检测88个未知样品（可以是两种以上检测项目） 未知/标准＝11 实验设计容易 提供Primer Express 软件，方便设计探针 提供2万余种人类基因的定量和15万种SNP试剂盒（其他公司的定量PCR仪不支持这种应用）

27 ABI 公司为您提供 最完善的试剂盒服务系统！

28 ABI公司用于定量PCR研究的试剂盒 通用的DNA和RNA定量试剂 全部人类基因定量试剂盒（ Assay-on-Demand）
含有防污染体系UNG酶，内参比荧光ROX，反转录试剂盒 全部人类基因定量试剂盒（ Assay-on-Demand） 转基因检测试剂盒（GMO大豆、玉米等） 食品微生物鉴定试剂盒（大肠杆菌、痢疾杆菌等) 卡片式反应板(2ul反应体系，384基因同时定量) Assay-by-Design（待客设计、合成服务） 人类核酸/男性核酸定量检测试剂盒（Quantifiler）

29 ABI 实时荧光定量PCR仪 - 基因诊断的主要技术平台：快速方便简单可靠
临床病原体检测 定量分析： 单一定量+ 双重定量(MGB) 各种病毒，细菌，衣源体，支原体，病毒载量 病原体检测--检测炭疽菌，Ecoli.O157,沙门氏菌 基因分型： 病原耐药性点突变的检测(MGB) 各种基因的定量表达分析: 人基因定量试剂盒 大样本量，快速方便，线性范围宽 重现性好，定量准确，可以确定20-30%的差异 SNP和基因突变分析： SNP分型试剂盒 疾病相关基因型与临床表型的关系 SNP检测与临床表现的相关性：抗高血压药物疗效个体差异 药物副反应的预防

30 定量PCR在临床诊断中的具体应用 1、肝炎病毒检测 2、结核杆菌检测 3、优生优育相关项目检测 4、性病病原体检测 5、EB病毒检测
SARS病毒检测： 血源病毒的多重定量检测

31 SARS快速诊断，病原基因测定 病原基因序列测定 1国外 2国内 全部是AB公司用户

32 Fighting Against SARS!!! ABI 捐赠中国卫生部 3台荧光定量PCR仪！ 国家疾控中心病毒所
广州中山医科大学呼吸病研究所 北京小汤山医院

33 You provide science, We provide tools.
Applied Biosystems You provide science, We provide tools. ABI为临床检验工作提供 最尖端的解决方案! Thank you !