《中华人民共和国兽药典》 二○一五版二部解析

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1 《中华人民共和国兽药典》 二○一五版二部解析
中国兽药典委员会 中药专业委员会

2 主要内容 二部编制总体情况介绍 1 2 完善中药专用检测手段和方法 3 加强对现代分析技术的应用 加强兽药安全性检查 4 5
中药标准修订实例 5

3 9种（马兰草、羊蹄、泡桐叶、泡桐花4，仁香散[家蚕病]、鱼腥草注射液、黄芪多糖注射液2、银黄提取物口服液、清肺颗粒）
一、二部编制总体情况介绍 （一）二部正文总体情况介绍 新增 中药材和成方制剂 9种（马兰草、羊蹄、泡桐叶、泡桐花4，仁香散[家蚕病]、鱼腥草注射液、黄芪多糖注射液2、银黄提取物口服液、清肺颗粒） 修订 中药材及饮片、成方制剂、提取物 415种 增修订内容主要有基原、性状、鉴别、检查、特征图谱、含量测定等项目。

4 一、二部编制总体情况介绍 （一）二部正文总体情况介绍
新增药材品种 来源 原标准 马兰草 本品为菊科植物马兰Kalimeris indica(L.)Sch.-Bip.的干燥全草。 兽药国家标准化学药品、中药卷第一册2013年7月 羊蹄 本品为蓼科植物羊蹄Rumex japonicus Houtt.或巴天酸模Rumex patientia L.的干燥根。 泡桐叶 本品为玄参科植物兰考泡桐Paulownia elongata S.Y.Hu或同属数种植物的干燥叶。 泡桐花 本品为玄参科植物兰考泡桐Paulownia elongata S.Y.Hu或同属数种植物的干燥花。 新增制剂 鱼腥草注射液 本品为鲜鱼腥草经加工制成的灭菌水溶液/本品为鱼腥草经水蒸气蒸馏制成的灭菌水溶液。每ml原生药2g。鉴别、特征图谱 兽药国家标准化学药品、中药卷第一册2013年7 黄芪多糖注射液 本品为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根经提取制成的灭菌溶液，含黄芪多糖以葡萄糖计为标示量的 %，增加制法、单双糖限度、脾增重、含量测定。 银黄提取物口服液 金银花提取物2.4g、黄芩提取物24g，制成1000ml。梯度测少特征图谱2015版药典 转正3册 清肺颗粒 板蓝根900葶苈子500浙贝母300桔梗300甘草250，每1ml原生1g 1140号09 仁香散 艾叶10g广藿香10苦杏仁30丁香20。家蚕白僵病、曲霉病 830号07

5 一、二部编制总体情况介绍 （一）二部正文总体情况介绍 增加药材基原—芦荟
2010年版 2015年版 本品为百合科植物 库拉索芦荟Aloe barbadensis Miller、好望角芦 荟Aloe ferox Miller或其他同属 近缘植物叶的汁液 浓缩干燥物。 本品为百合科植 物库拉索芦荟 Aloe barbadensis Miller叶的汁液 浓缩干燥物。

6 一、二部编制总体情况介绍 （二）二部附录总体情况介绍 新增 15项 修订 49项

7 一、二部编制总体情况介绍 （二）二部附录总体情况介绍 增订“质谱法” 增订“二氧化硫残留量测定法” 增订“国家兽药标准物质通则”
将2010年版附录“微生物限度检查法”拆分成微生物计 数法、控制菌检查法、微生物限度标准三个通则

8 一、二部编制总体情况介绍 （二）二部附录总体情况介绍 增订“兽药引湿性试验指导原则”、 增订“兽用中药中铝、铬、铁、钡元素测定指导原 则”
增订“兽用中药中真菌毒素测定指导原则”、 增订“兽药洁净实验室微生物监测和控制指导原则” 增订“药用辅料功能性指标研究指导原则”、 增订“药包材通用要求指导原则”、 增订“药用玻璃材料和容器指导原则”、 增订“兽药标准物质制备指导原则”；

9 二、完善中药专用检测手段和方法 中药 显微鉴别法 薄层色谱法 特征图谱和指纹图谱 一测多评法及对照提取物 20种成方制剂增订薄层鉴别项
32种成方制剂修订薄层鉴别项 17种药材增订薄层鉴别项 8种药材修订薄层鉴别项 新增42种药材的显微鉴别项 修订2种药材的显微鉴别项 修订3种成方制剂的显微鉴别项 中药 特征图谱和指纹图谱 一测多评法及对照提取物 新增2种药材的特征图谱项 新增1种提取物的特征图谱项 新增2种制剂的特征图谱项 一测多评法新增丹参药材和生姜药材 引入对照提取物测定含量

10 二、完善中药专用检测手段和方法 （一）显微鉴别法
新增42种药材的显微鉴别项 修订2种药材的显微鉴别项 修订3种成方制剂的显微鉴别项

11 1.新增42种药材的显微鉴别项——实例 山楂 本品粉末暗红棕色至棕色。石细胞单个散在或成群， 无色或淡黄色，类多角形、长圆形或不规则形，直 径19~125µm，孔沟及层纹明显，有的胞腔内含深 棕色物。果皮表皮细胞表面观呈类圆形或类多角形， 壁稍厚，胞腔内常含红棕色或黄棕色物。草酸钙方 晶或簇晶存在于果肉薄壁细胞中。

12 1.新增42种药材的显微鉴别项——实例 苦杏仁 种皮表面观：种皮石细胞单个散在或数个相连，黄 棕色至棕色，表面观类多角形、类长圆形或贝壳形， 直径25~150µm。种皮外表皮细胞浅橙黄色至棕黄 色，常与种皮石细胞相连，类圆形，壁常皱缩。

13 2.修订2种药材的显微鉴别项——实例 海螵蛸 2010年版 2015年版
本品粉末类白色。多数为不规则透明薄片，有的具细条纹。不规则碎块，表面显网状或点状纹理。 本品粉末类白色。角质层碎块类四边形，表面具横裂纹和细密纵纹交织成的网状纹理，亦可见只有纵纹的碎块。石灰质碎块呈条形、正方形或不规则状，多具细条纹或分支状蛇形笈道。

14 3.修订3种成方制剂的显微鉴别项 增加鉴别特征——普济消毒散 2010年版 2015年版
收载了大黄、黄芩、黄连、甘草、陈皮、桔梗、升麻、连翘等8味处方中的药味 在2010年版标准基础上新增加柴胡、荆芥、青黛、滑石等处方中4味中药的显微鉴别

15 3.修订3种成方制剂的显微鉴别项 修订显微鉴别特征描述 品种 2010年版 2015年版 穿白利康丸 秦艽散
草酸钙砂晶充塞于薄壁细胞及射线细胞中。 草酸钙砂晶充塞于薄壁细胞中。 秦艽散 花粉粒黄棕色、类圆形，直径约至30μm，外壁具细点状。 花粉粒黄棕色、类圆形，直径约至30 μm，表面有网状雕纹。

16 二、完善中药专用检测手段和方法 （二）薄层色谱法
17种药材增订薄层鉴别项 8种药材修订薄层鉴别项 20种成方制剂增订薄层鉴别项 32种成方制剂修订薄层鉴别项

17 17种药材增订薄层鉴别项—实例 火炭母 取本品粉末2 g，加50%甲醇30 ml，加盐酸1 ml，加热回流1小时，趁热滤过，滤液放冷，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 ml ，合并乙酸乙酯提取液浓缩至1 ml，作为供试品溶液。取火炭母对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。另取槲皮素对照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录0502）试验，吸取供试品溶液10 µl、对照药材溶液10 µl和对照品溶液5 µl，分别点于同一含0.5%的氢氧化钠的硅胶G薄层板上，以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸（5﹕4﹕1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 杨树花 取本品1 g，加水15 ml，加热回流1小时， 滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次， 每次10 ml，弃去乙酸乙酯层，取下层 溶液，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解， 作为供试品溶液。另取杨树花对照药材 1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层 色谱法（附录0502）试验，吸取上述两 种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶H薄 层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲醇-水 （6.5﹕4﹕0.8﹕0.8）为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以三氯化铝试液， 105℃加热1分钟，置紫外光灯（365 nm） 下检视。供试品色谱中，在与对照药材 色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光 主斑点。

18 8种药材修订薄层鉴别项——实例 丹参——将2010年版分开鉴别的丹参酮ⅡA和丹酚 酸B整合为一个鉴别项
（2）取本品粉末1 g，加乙醇5 ml，超声处理15分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。另取丹参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取丹参酮ⅡA对照品、丹酚酸B对照品，加乙醇制成每1 ml分别含0.5 mg和1.5 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录0502）试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6﹕4﹕8﹕1﹕4）为展开剂，展开，展至约4 cm，取出，晾干，再以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4﹕1）为展开剂，展开，展至约8 cm，取出，晾干，分别在日光及紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。

19 修订山茱萸鉴别（3）--增加指标成分 2015版 2010版 取本品粉末0.5g，加甲醇10ml， 超声处理20分钟，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇2ml使溶解，作 为供试品溶液。另取莫诺苷对照 品、马钱苷对照品，加甲醇制成 每1ml各含2mg的混合溶液，作为 对照品溶液。照薄层色谱法（附 录 页）试验，吸取上述两种溶 液各2ul，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以三氯甲烷-甲醇（3:1） 为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃ 加热至斑点显色清晰，置紫外光 灯（365nm）下检视。供试品色 谱中，在与对照品色谱相应的位 置上，显相同颜色的荧光斑点。 取本品粉末0.5g，加无水乙醇 10ml，超声处理15分钟，滤过， 滤液蒸干，残渣加无水乙醇2ml 使溶解，作为供试品溶液。另取 马钱苷对照品，加无水乙醇制成 每1ml含1mg的溶液，作为对照品 溶液。照薄层色谱法（附录32页） 试验，吸取上述两种溶液各5ul， 分别点于同一硅胶G薄层板上， 以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸 （50:10:1）为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸 溶液，在105℃加热至斑点显色 清晰。供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同的 紫红色斑点。

20 鸡血藤薄层全面修订 2015版 2010版 取本品粉末2g，加乙醇40ml，超声 处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残 渣加水10ml使溶解，用乙酸乙酯 10ml振摇提取，乙酸乙酯挥干，残 渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶 液。另取鸡血藤对照药材2g，同法 制成对照药材溶液。照薄层色谱法 （附录 ）试验，吸取供试品溶液 5-10ul、对照药材溶液5ul，分别点 于同一硅胶G254薄层板上，以二氯 甲烷-丙酮-甲醇-甲酸 （8:1.2:0.3:0.5）为展开剂，展开， 取出，晾干，置紫外光灯（254nm） 下检视。供试品色谱中，在与对照 药材色谱相应的位置上，显相同的 斑点。喷以5%香草醛硫酸溶液，在 105℃加热至斑点显色清晰。在与对 照药材色谱相应的位置上，显相同 颜色的斑点。 取本品粉末1g，加入乙醇100ml， 加热回流1小时，滤过，滤液蒸干， 残渣加甲醇2ml使溶解，加入硅胶 1g拌匀，挥干溶剂，置硅胶柱 （ 目，2g，内径1.0cm， 干法装柱）上，依次用石油醚 （60-90℃）30ml、甲醇-三氯甲 烷（1:9）40ml洗脱，收集甲醇- 三氯甲烷（1:9）洗脱液，蒸干， 残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作 为供试品溶液。另取芒柄花素对 照品，加甲醇制成每1ml含1mg的 溶液，作为对照品溶液。照薄层 色谱法（附录32页）试验，吸取 上述供试品溶液5-10ul、对照品 溶液5ul，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以三氯甲烷-甲醇（20:1） 为展开剂，展开，取出，晾干， 置紫外光灯（254nm）下检视。供 试品色谱中，在与对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的荧光 斑点。

21 20种成方制剂增订薄层鉴别项—实例 通乳散——鉴别（3）——王不留行的鉴别
（3） 取本品2.5g，加70%甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液 作为供试品溶液。另取王不留行黄酮苷对照品，加甲醇制成每1ml含 0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录0502）试验， 吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-水 （4︰6）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液， 热风吹干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

22 1. 供试品 2. 王不留行对照药材 4.王不留行黄酮苷对照品 5.阴性样品
薄层鉴别时应尽量选用对照药材和对照品共同作为对照，有干扰时应选用具有专属性的对照品或选用对照药材中的主斑点进行对照 标准修订时为什么选择了王不留行黄酮苷对照品而未选择对照药材 1. 供试品 2. 王不留行对照药材 4.王不留行黄酮苷对照品 5.阴性样品 对照溶液的选择

23 1.3.供试品 2.4王不留行黄酮苷对照品 5.阴性样品 不同品牌聚酰胺薄膜图谱比较

24 20种成方制剂增订薄层鉴别项——实例 黄连解毒散——鉴别（4）——黄芩的鉴别
（4）取本品1g，加甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml 使溶解，用稀盐酸调pH值至1～2，用乙酸乙酯25ml振摇提取，分取乙酸乙酯层， 蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材0.3g，同法制 成对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照 品溶液。照薄层色谱法（附录0502）试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于 同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

25 1.5.供试品 2.黄芩苷对照品 3.黄芩对照药材 4.阴性样品 不同品牌薄层板图谱比较

26 原则 32种成方制剂修订薄层鉴别项 保护检验人员、减少对环境的污染（主要针对展开剂中含苯方法的修订）
提高方法的专属性、灵敏度和操作的简便性。

27 实例—黄连解毒散鉴别（2） 2010年版 （2） 取本品1.3g，加甲醇20ml，加热 回流15分钟，放冷，用铺有滤纸与氧 化铝的滤器滤过，滤液作为供试品溶 液。另取黄连对照药材0.2g，同法制 成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对 照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶 液，作为对照品溶液。照薄层色谱法 （附录 页）试验，吸取上述三种溶 液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板 上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓 氨溶液（6∶3∶1.5∶1.5∶0.5）为展开剂， 置氨蒸气的展开缸内，预饱和30分钟， 展开，取出，晾干，置紫外光灯 （365nm）下检视。供试品色谱中， 在与对照药材色谱和对照品色谱相应 的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 2015年版 （2） 取本品1.3g，加甲醇20ml，超声 处理15分钟，滤过，滤液作为供试品 溶液。另取黄连对照药材0.2g，同法制 成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对 照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液， 作为对照品溶液。照薄层色谱法（附 录 页）试验，吸取上述三种溶液各 2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以环己烷—乙酸乙酯—异丙醇—甲 醇—水—三乙胺（3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1）为 展开剂，置氨蒸气的展开缸内，预饱 和30分钟，展开，取出，晾干，置紫 外光灯（365nm）下检视。供试品色谱 中，在与对照药材色谱和对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的荧光斑 点。

28 实例—黄连解毒散鉴别（2） 1.3.5供试品 2.对照药材 4.盐酸小檗碱对照品 图 按2015版兽药典标准操作获得的色谱图

29 含量测定增加指标成分—大黄药材 2010年版 2015年版 总蒽醌量测定同2010年版。增 加游离蒽醌含量测定。色谱 条件、对照品溶液、测定法 均一致，但供试品制备不同。 供试品溶液的制备 取本品粉 末（过四号筛）约0.5g，精密 称定，置具塞锥形瓶中，精 密加入甲醇25ml，称定重量， 加热回流1小时，放冷，再称 定重量，用甲醇补足减失的 重量，摇匀，滤过，取续滤 液，即得。 本品按干燥品计算，含游离 蒽醌以含芦荟大黄素、大黄 酸、大黄素、大黄酚和大黄 素甲醚的总量不得少于0.2%。 HPLC法：测定总蒽醌量。按干 燥品计算，含芦荟大黄素、大黄 酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲 醚的总量不得少于1.5%。 类似的情况2015年版兽药典还 有许多品种均增加了其他成 分测定，在进行制剂生产时 要注意相应药材标准的变化。 制剂中三子散、大黄芩鱼散、 小柴胡散、四君子散、四黄 止痢颗粒、穿白痢康丸、龙 胆泻肝散等增加含量测定项， 大黄末、双黄连口服液等修 订含量测定，此外有些产品 检查项、鉴别项进行了修订， 在选择药材时要保证质量， 以免造成质量不合格。

30 二、完善中药专用检测手段和方法 （三）特征图谱和指纹图谱
成方制剂 提取物 鱼腥草注射液 柴胡注射液 药材和饮片 刺五加浸膏 羌活 沉香

31 沉香 羌活 二、完善中药专用检测手段和方法 （三）特征图谱和指纹图谱 对照特征图谱 对照特征图谱
峰1：沉香四醇；峰3：8-氯-2-（2-苯乙基）-5,6,7-三羟基-5,6,7,8-四氢色酮； 峰5：6, 4'-二羟基-3'-甲氧基-2-（2-苯乙基）色酮 对照特征图谱 峰1：羌活醇 峰2：阿魏酸苯乙醇酯 峰3：异欧前胡素峰4：镰叶芹二醇

32 二、完善中药专用检测手段和方法 （三）特征图谱和指纹图谱
刺五加浸膏 对照特征图谱 峰2为原儿茶酸，峰4（S）为紫丁香苷，峰5为绿原酸，峰7为刺五加苷E，峰8为异嗪皮啶

33 （三）特征图谱和指纹图谱 柴胡注射液 对照特征图谱（原图） 对照特征图谱（放大） 供试品特征图谱中应有6个特征峰，并出现与正己醛参照物峰保留时间相同的色谱峰，与参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±8%之内。规定值为：0.301（峰1）、0.317（峰2）、0.331（峰3）、0.586（峰4）、1.0000（峰S）、1.593（峰5）。其中峰5与参照物（5.0μg/ml）峰峰面积比值应为0.15~1.5

34 （三）特征图谱和指纹图谱 鱼腥草注射液对照特征图谱
峰1：4-萜烯醇 峰2：α-松油醇 峰s：甲基正壬酮 峰3：乙酸龙脑酯 供试品特征图谱中应有4个特征峰，并出现与甲基正壬酮参照物峰保留时间相同的色谱峰，与参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±8%之内。规定值为0.890（峰1）、0.927（峰2）、1.000（峰S）、1.029（峰3）。其中峰1与参照物（0.25 μg/μl）峰峰面积比值应不得低于0.15。

35 二、完善中药专用检测手段和方法 （四）一测多评法及对照提取物
1.一测多评法 特点 中药 多成分、多功效 多指标定量 存在的问题： 对照品难以获得，检测成本过高 一测多评法 定义：建立成分间的相对校正因子，用一种对照品同时测定多个成分的含量。

36 二、完善中药专用检测手段和方法 一测多评法——实例
待测成分（峰） 相对保留时间 校正因子 隐丹参酮 0.75 1.18 丹参酮I 0.79 1.31 丹参酮ⅡA 1.00 以本品丹参酮ⅡA的峰面积为对照，分别乘以校正因子， 计算隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮ⅡA的含量。

37 二、完善中药专用检测手段和方法 （四）一测多评法及对照提取物 2.对照提取物
◆ 定义：对照提取物指经过提取制备，含有多种主要有效成分或指标 性成分，用于药材（含饮片）、提取物、中成药等鉴别或含量测定用的 国家兽药标准物质。 ◆ 分类：定性鉴别用、含量测定用。

38 二、完善中药专用检测手段和方法 （四）一测多评法及对照提取物 2.对照提取物（2010版附录未收载薏苡仁对照提取物）
◆应用：对于那些价格昂贵、性质不稳定、毒性强、提取制备困难、含 量极低的中药对照品可用对照提取物替代进行质量控制，2015版兽药典 共收载功劳木对照提取物、羌活对照提取物、薏苡仁油对照提取物（药材 鉴别3中7个主峰）和三七总皂苷对照提取物，其中3种为本版兽药典新增品种。 ◆实例：首次采用对照提取物作为含量测定对照品——功劳木【含量测 定】项使用功劳木对照提取物；采用羌活对照提取物作为【特征图谱】 项对照物；采用薏苡仁油对照提取物作为薏苡仁薄层鉴别时的对照物。

39 三、加强对现代分析技术的应用 聚合酶链式反应法（PCR扩增—DNA鉴别 质谱法 二氧化硫残留量测定法 动物源性原材料的要求 1 2 3 4

40 质谱法 定义：质谱法是使待测化合物产生气态离子，再按质 荷比（m/z）将离子分离、检测的分析方法，检测限可 达10-15～10-12mol数量级。质谱法可提供分子质量和结 构的信息，定量测定可采用内标法或外标法。

41 质谱法 1. 定性分析 以质荷比为横坐标，以离子的相对丰度为纵坐标，测定物质的质 谱。高分辨质谱仪可以测定物质的准确分子质量。
在相同的仪器及分析条件下，直接进样或流动注射进样，分别测 定对照品和供试品的质谱，观察特定m/z处离子的存在，可以鉴别 药物、杂质或非法添加物。产物离子扫描可以用于极性的大分子 化合物的鉴别。复杂供试品中待测成分的鉴定，应采用色谱-质谱 联用仪或串联质谱仪。 质谱中不同质荷比离子的存在及其强度信息反映了待测化合物的 结构特征，结合串联质谱分析结果，可以推测或确证待测化合物 的分子结构。当采用电子轰击离子化时，可以通过比对待测化合 物的质谱与标准谱库谱图的一致性，快速鉴定化合物。未知化合 物的结构解析，常常需要综合应用各种质谱技术并结合供试品的 来源，必要时还应结合元素分析、光谱分析（如核磁共振、红外 光谱、紫外光谱、X射线衍射）的结果综合判断。

42 质谱法 2. 定量分析 采用选择离子检测（selected-ion monitoring，SIM) 或选择反应检测或多反应 检测，外标法或内标法定量。内标化合物可以是待测化合物的结构类似 物或其稳定同位素（如2H，13C，15N )标记物。 分别配制一定浓度的供试品及杂质对照品溶液，色谱-质谱分析。若供试 品溶液在特征m/z离子处的响应值（或响应值之和）小于杂质对照品溶液 在相同特征m/z离子处的响应值(或响应值之和），则供试品所含杂质符合 要求。 复杂样本中的有毒有害物质、非法添加物、微量药物及其代谢物的色谱- 质谱分析，宜采用标准曲线法。通过测定相同体积的系列标准溶液在特 征m/z离子处的响应值，获得标准曲线及回归方程。按规定制备供试品溶 液，测定其在特征m/z离子处的响应值，带入标准曲线或回归方程计算， 得到待测物的浓度。内标校正的标准曲线法是将等量的内标加入系列标 准溶液中，测定待测物与内标物在各自特征m/z离子处的响应值，以响应 值的比值为纵坐标，待测物浓度为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程。 使用稳定同位素标记物作为内标时，可以获得更好的分析精密度和准确 度。

43 质谱法应用实例——黄曲霉毒素测定第二法 用高效液相色谱-串联质谱法测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计）。 方法：以三重四极杆串联质谱仪检测；电喷雾离子源（ESI），采集模式为正离子模式。 附注：当测定结果超出限度时，采用第二法进行确认。

44 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2对照品的监测离子对、碰撞电压（CE）参考值
质谱法应用实例——黄曲霉毒素测定第二法 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2对照品的监测离子对、碰撞电压（CE）参考值 编号 中文名 英文名 母离子 子离子 CE（V） 1 黄曲霉毒素G2 Aflatoxin G2 331.1 313.1 245.1 33 40 2 黄曲霉毒素G1 Aflatoxin G1 329.1 243.1 311.1 35 30 3 黄曲霉毒素B2 Aflatoxin B2 315.1 259.1 287.1 4 黄曲霉毒素B1 Aflatoxin B1 241.0 285.1 50

45 质谱法应用实例——阿胶的鉴别 采用质谱检测器，电喷雾正离子模式（ESI+），进行多反应监测（MRM），选择质荷比m/z 539.8（双电荷）→612.4和m/z 539.8（双电荷）→923.8作为检测离子对。取阿胶对照药材溶液，进样5 μl，按上述检测离子对测定的MRM色谱峰的信噪比均应大于3﹕1。 吸取供试品溶液5 μl，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定。以质荷比（m/z）539.8（双电荷）→612.4和m/z539.8（双电荷）→923.8离子对提取的供试品离子流色谱中，应同时呈现与对照药材色谱保留时间一致的色谱峰。

46 二氧化硫残留量测定法 样品 性质 酸碱滴定法 气相色谱法 离子色谱法
采用顶空进样方式进样，热导检测器检测，按外标工作曲线法定量，计算样品中亚硫酸根含量，测得结果乘以0.5079，即为二氧化硫含量。 酸碱滴定法 系将中药材以蒸馏法进行处理，样品中的亚硫酸盐系列物质加酸处理后转化为二氧化硫后，随氮气流带入到含有双氧水的吸收瓶中，双氧水将其氧化为硫酸根离子，采用酸碱滴定法测定，计算药材及饮片中的二氧化硫残留量 气相色谱法 样品 性质 离子色谱法 将中药材以水蒸气蒸馏法进行处理，样品中的亚硫酸盐系列物质加酸处理后转化为二氧化硫，随水蒸气蒸馏，并被双氧水吸收、氧化为硫酸根离子后，采用离子色谱法检测，并计算药材及饮片中的二氧化硫残留量。

47 四、加强兽药安全性检查 （一）制定部分药材二氧化硫、有害元素的残留量 1、 二氧化硫残留限度规定
在《中国兽药典》附录检定通则中规定：山药、天冬、天花粉、天麻、牛膝、白及、白术、白芍、党参、粉葛等10种传统习用硫磺熏蒸的中药材及其饮片，二氧化硫残留量不得过400mg/kg，其他中药材及其饮片（矿物类除外）的二氧化硫残留量不得过150mg/kg。

48 四、加强兽药安全性检查 2、 重金属及有害元素检测的研究
除矿物、动物、海洋类外的中药材铅不得过10mg/kg；镉不得过1mg/kg；砷不得过5mg/kg；汞不得过1mg/kg；铜不得过20mg/kg。 与2010年药典相比铅镉砷汞的限度放宽了。

49 四、加强兽药安全性检查 海洋类中药材牡蛎、珍珠、蛤壳、海藻、昆布、海螵蛸、水蛭等7种海洋或淡水类增加了相关的检查。
铅不得过5mg/kg；镉不得过0.3mg/kg；砷不得过2mg/kg；汞不得过0.2mg/kg；铜不得过20mg/kg。 与10年药典限度相同。

50 2015年版新增7种药材的重金属限量规定 品种 重金属 Pb (mg/kg) Cd As Hg Cu 水蛭 10 1 5 牡蛎 0.3 2
0.2 20 昆布 4 - 0.1 珍珠 海螵蛸 海藻 蛤蚧

51 四、加强兽药安全性检查 （二）增加对黄曲霉素及16种农药的检查 1、 对黄曲霉毒素的检查
黄曲霉毒素的危害： 远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性，其中以B1毒性最大。当人摄入量大时，可发生急性中毒，出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入，可造成慢性中毒，生长障碍，引起纤维性病变，致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位，是目前已知最强致癌物之一。

52 1、 对黄曲霉毒素的检查 对《中国兽药典》收载的柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、 肉豆蔻、远志、薏苡仁、大枣、地龙、蜈蚣、水蛭、全蝎、决 明子、陈皮、桃仁、酸枣仁、僵蚕等18（14）味易受黄曲霉毒素 感染的药材及其饮片品种项下增加“黄曲霉毒素” 检查项目。 限量标准：本品每1000 g含黄曲霉毒素B1不得过5 µg，黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2和黄曲霉毒素B1总量不得过10 µg。

53 四、加强兽药安全性检查 （二）增加对黄曲霉素及16种农药的检查 2、农药残留的研究：
增加检测项目（由9种增加至16种） 六六六、滴滴涕、五氯硝基苯、六氯苯、七氯、艾氏剂、氯丹等等均做了具体的含量要求。 人参药材及其饮片品种项下增加了“农药残留量”的检查项目。

54 2015年版对4种中药材做农药残留量规定 品种 限量 总六六六 总滴滴涕 五氯 六氯 七氯 艾氏剂 氯丹 人参 √ 西洋参 甘草 黄芪

55 四、加强兽药安全性检查 （二）增加对黄曲霉素及16种农药的检查
2、农药残留的研究——举例——人参 含六六六（α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC之和）不得过0.2 mg/kg； 总滴滴涕（pp-DDE、pp-DDD、op-DDT、pp-DDT之和）不得过0.2 mg/kg； 五氯硝基苯不得过0.1 mg/kg； 六氯苯不得过0.1 mg/kg； 七氯（七氯、环氧七氯之和）不得过0.05 mg/kg； 艾氏剂不得过0.05 mg/kg； 氯丹（顺式氯丹、反式氯丹、氧化氯丹之和）不得过0.1 mg/kg

56 五、中药标准修订实例——黄芪多糖注射液 缺少【制法】项 原标准存在的问题 【鉴别】项专属性不强 缺少对单糖和双糖量的【检查】项
缺少对注射剂安全性的【检查】项 【含量测定】项测定结果重复性差

57 五、中药标准修订实例——黄芪多糖注射液 （一）增加【制法】项 一方面查阅最初的新药申报资料 另一方面根据资料进行小试和中试。

58 五、中药标准修订实例——黄芪多糖注射液 （二）修订【鉴别】项 删除原标准中专属性不强的【鉴别】（1）、（2），改为 为【鉴别】项。
该方法实质为先用碱性酒石酸铜试液将供试品溶液中的还原性单糖完全氧化和降解，再将剩余的糖水解为葡萄糖，最后用碱性酒石酸铜试液鉴别新生成的葡萄糖。

59 五、中药标准修订实例——黄芪多糖注射液 （三）修订【检查】项 1.增加单糖和双糖的检查项

60 图 自制黄芪多糖粉配制的注射液中单糖和双糖的检测
1.增加单糖和双糖的检查项 日光下 紫外光灯（365nm）下 1、葡萄糖对照品（0.05mg/ml） 2、4、6、8、10、12不同工艺下制成的黄芪多糖注射液 3、蔗糖对照品（0.5mg/ml） 5、蔗糖对照品（1.0mg/ml） 7、乳糖对照品（1.0mg/ml）9麦芽糖对照品（1.0mg/ml）11、果糖对照品（1.0mg/ml）13、鼠李糖对照品（1.0mg/ml）14、阿拉伯糖对照品（1.0mg/ml） 图 自制黄芪多糖粉配制的注射液中单糖和双糖的检测

61 五、中药标准修订实例——黄芪多糖注射液 （三）修订【检查】项 1.增加单糖和双糖的检查项 仲裁方法

62 1.增加单糖和双糖的检查项 1、鼠李糖对照品（0.4mg/ml）2、阿拉伯糖对照品（0.4mg/ml）3、果糖对照品（0.2mg/ml）4、葡萄糖对照品（0.1mg/ml）5、蔗糖对照品（0.4mg/ml）6、乳糖对照品（0.4mg/ml）7、麦芽糖对照品（0.4mg/ml）） 图 混合对照品色谱图

63 （三）修订【检查】项 2.修订生物活性的限度值 在以往的生物活性测定中，发现葡萄糖溶液 （10mg/ml）有时也能够使脾增重指数≧1，由此分析认 为现行的限度值可能过低。本次修订中重点对限度进 行了考察，采用自制多糖粉配制成的注射液，进行了 生物活性测定，结果均大于2，因此规定给药组与对照 组平均脾指数的差值应≧2。

64 （三）修订【检查】项 3.增加了注射剂有关物质检查 4.增加了其他项，补全了检查项

65 （四）修订【含量测定】项 1.修订的内容 （1）修改了供试品溶液的制备方法，删掉了加30%硫酸锌溶液和亚铁氰化钾的前处理步骤。 （2）减小了供试品取样量，降为精密量取本品3ml。不再规定对照品称样量，只规定最终制成溶液的浓度，操作时称样量符合天平要求即可，从而减少了对照品的用量。

66 1.修订的内容 （四）修订【含量测定】项 （3）改变了部分测定条件，明确了一些操作细节，确保了反应的重复性。
①规定了苯酚必须是新蒸馏的，避免由于苯酚被氧化导致的测定结果差异过大。 ②规定供试品反应完后直接放入冰水浴5分钟，此操作可使化学反应立即停止，待放至室温后直接测定。相较于原标准规定的“放冷”，现标准更加明确，确保了操作的重复性。 ③提高了苯酚的浓度和用量，确保反应时其是过量的，糖被完全反应。 ④供试品溶液不再稀释定容，而是放至室温后直接测定，避免了稀释定容过程中硫酸遇水再次放热而引起的误差。

67 （四）修订【含量测定】项 2.修订后的标准

68 小结 一是强化现代检测技术应用。如先进、成熟分析技术 LC-MS、一测多评、DNA条形码和分子鉴定技术。
二是安全性控制项目日益增强。二氧化硫残留量、重 金属及有害元素、黄曲霉毒素和农药残留的检查展开 剂中苯等毒性溶剂的替换等。 三是有效性控制水平不断提升。中药材、成方制剂的 专属性鉴别和含量测定项目完善：性状、显微、薄层、 含量测定（黄连）、PCR扩增--琼脂糖凝胶法（川贝母） 或者根据现代实验结果完善其方法，提高其专属性、 可操作性。 四是质控导向作用进一步强化。国家标准物质通则及 其制备指导原则、药包材通用要求等收录。

69 谢谢！