第八章 免疫学应用.

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1 第八章 免疫学应用

2 第一节 免疫学检测 一、抗原或抗体的检测 （一）抗原、抗体反应的特点与影响因素 1. 抗原、抗体反应的特点 特异性 可逆性 可见性

3 2.抗原、抗体反应的影响因素 电解质 酸碱度 温度

4 （二）抗原-抗体反应的基本检测方法 1.凝集反应 （agglutination）
定义：细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等都是不溶性的颗粒抗原，当与相应抗体结合，抗原与抗体结合形成凝集团块，即称为凝集反应。

5 1．直接凝集（direct agglutination）：将细菌或红细胞与相应抗体结合产生的细菌凝集或红细胞凝集现象。
可用于传染病诊断如肥达氏反应（Widal reaction）诊断伤寒病。或利用血细胞凝集现象检查血型。 2．间接凝集（indirect agglutination）：用可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应抗体混合出现的凝集现象。 如用γ球蛋白包乳胶颗粒检测类风湿关节炎病人血清中的类风湿因子，用甲状腺球蛋白包被乳胶颗粒用于检测甲状腺球蛋的抗体。 也可以将抗体吸附到乳胶颗粒上检查临床标本中的抗原，如细菌或真菌性脑膜炎抗体包被的乳颗粒，一旦与含有相应抗原的脑脊液混合，便可发生凝集。

6 2. 沉淀反应 （precipitation neaction）
定义：可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时，可形成较大的不溶性免疫复合物。在反应体系中出现不透明的沉淀物，这种抗原抗体反应称为沉淀反应。

7 （1）单向免疫扩散 （single immunodiffusion）
在凝胶中进行的沉淀反应。 将抗体混入加热溶解的琼脂中，倾注于玻片上，制成含有抗体的琼脂板，在适当位置打孔，将抗原材料加入琼脂板的小孔内，让抗原从小孔向四周的琼脂中扩散，与琼脂中的抗体相遇形成免疫复合物。当复合物体积增加到一定程度时停止扩散，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，沉淀圈的直径与加入的抗原浓度成正相关。 本方法简便，易于观察结果，可测定抗原的灵敏度（最低浓度）约为10～20μg/ml，常用于定量测定人或动物血清IgG、IgM、IgA和C3等。

8 （2）双免疫扩散试验 （double immunodiffusion）
在琼脂板上按一定距离打数小孔，在相邻的两孔内分别放入抗原和抗体材料。 当抗原和抗体向四周凝胶中扩散，在两孔间可出现2～3条沉淀线。 本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析。

9 （3） 免疫电泳 (immunoelectrophoresis)
分成两步，即先进行电泳，再进行琼脂扩散。 先将样品加入琼脂中电泳，将抗原各成分依电泳速度不同而分散开。然后在适当的位置上沿电泳方向挖一直线形槽，于槽内加入含有针对各种抗原混合抗体液，让各抗原成分与相应抗体进行双向免疫扩散，可形成多答卷沉淀线。 此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义。

10 3. 补体参与的反应 溶血反应（hemolytic assay）、
补体介导的细胞毒试验（complement mediated cytotoxicuty test） 补体结合试验（complement fixation test）。

11 （1）免疫荧光技术（immunofluorescence techni）
4.用标记抗体或抗原 进行的抗原、抗体反应 （1）免疫荧光技术（immunofluorescence techni） 是用化学方法使荧光素标记的抗体（或抗原）与组织或细胞中的相应抗原（或抗体）结合，进行定性定位检查抗原或抗体的方法

12 （2）酶免疫测定 （enzyme immunoassay,EIA）
将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作用结合起来，根据酶作用底物后显色，以颜色变化判断试验结果，可经酶标测定仪作定量分析。 常用于标记的酶有辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase)、碱性磷酶（alkaline phosphatase）等。 它们与抗体结合不影响抗体活性。这些酶具有一定的稳定性，制成酶标抗体可保存较长时间。 常用的方法有酶标免疫组化法和酶联免疫吸附法。前者测定细胞表面抗原或组织内的抗原；后者主要测定可溶性抗原或抗体。

13 夹心法（sandwich assay）:将已知的特异抗体包装在固相载体（塑料板凹孔或纸片上），加入待检标本，标本中的抗原即可与载体上的抗原结合，洗去未结合的材料后加入该抗原的酶标记抗体，洗去未结合的酶标抗体，加底物显色，用酶免疫检测仪测量颜色的光密度。 可定量测定抗原。

14 间接法（indirecr ELISA）：常用于检查特异抗体。
先将已知特异抗原包被固相载体，加入待检标本（可能含有相应抗体），再加入酶标抗Ig的抗全（即第二抗体），经加底物显色后，根据颜色的光密度计算出标本中抗体的含量。

15 BAS-ELISA 使用生物素-亲合素-过氧化物酶复合物作为指示剂，组成一新的生物放大系统进一步提高检测的敏感度。
可用来检测多种抗原抗体系统如细菌病毒肿瘤细胞表面抗原 一个亲合素（avidin）分子可以结合4个生物素分子（biotin）。结合非常稳定。亲合素和生物素都可与抗全、酶、荧光素等分子结合，而不影响后者的生物活性。一个抗体分子可偶联90个生物素分子，通过生物素又可连接多个亲合素。因此大提高检测的敏感度。 目前应用生物-酶标亲合素系统，它是通过生物素标记抗体连接免疫反应系统，同时借助生物素化酶或酶标亲合素引入酶与底物反应系统。

16 二、淋巴细胞的测定 （一）淋巴细胞的类别鉴定 1. 尼龙棉分离法 2. E花环分离法 3. 洗淘法 4. 流式细胞术

17 （二）淋巴细胞功能测定 1. T细胞功能测定 （1）T细胞增殖试验 （2）细胞毒试验 （3）皮肤试验 2. B细胞功能测定
（2）抗体形成的细胞测定

18 四、免疫学检检测的应用 1.疾病的诊断 （1）感染性疾病 （2）免疫缺陷病 （3）自身免疫病 （4）超敏反应性疾病 （5）肿瘤
2.免疫学检测

19 第二节 免疫预防 定义： 根据特异性免疫应答的原理，采用人工方法将抗原（疫苗、类毒素等）或抗体（免疫血清、丙种球蛋白等）制成各种制剂，接种于人体，使其产生特异性免疫力，达到预防某些疾病的目的。

20 特异性免疫的获得方式 自然主动免疫：患传染病，隐性感染 特 主动免疫 异 人工主动免疫：接种疫苗、类毒素等 性
特 主动免疫 异 人工主动免疫：接种疫苗、类毒素等 性 免 自然被动免疫：经胎盘、初乳 疫 被动免疫 人工被动免疫：注射抗毒素、丙种球蛋白

21 一、人工主动免疫 (artificial active immunization)
应用人工方法给机体接种疫苗、类毒素等抗原物质，刺激机体产生特异性免疫力的方法。

22 人工主动免疫过程 抗原(Ag) 活化的B细胞 抗体 记忆B细胞 记忆T细胞 活化的T杀伤细胞 与B细胞结合，诱导B细胞释放抗体

23 （一）人工主动免疫的生物制剂 疫 苗 (Vaccine):人工主动免疫使用的生物制剂，具有与病原微生物相同或相似的抗原性，输入机体之后，使之产生特异性免疫。 常规疫苗包括细菌性制剂、病毒性制剂及类毒素。

24 传统疫苗 1、灭活疫苗（死疫苗）：用物理或化学方法将病原体杀死而制成的。如狂犬疫苗等 优点：疫苗稳定，易保存，无毒力回复突变危险
缺点：须多次注射，用量大，接种后反应亦大 2、减毒活疫苗：是用人工定向变异或直接从自然界筛选出来的毒力减弱，或由基本无毒的活病原体制成的。如脊髓灰质炎疫苗等。 优点：只需接种一次，用量较小，接种后反应亦小 缺点：稳定性较差不易保存，有毒力回复突变可能

25 3、类毒素（toxiod）：细菌的外毒素经0.3%-0.4%甲醛处理制成，使其失去外毒素毒性，但保留免疫原性。接种后，可刺激机体产生抗毒素。

26 新型疫苗： 亚单位疫苗 结合疫苗 合成肽疫苗 基因工程疫苗
亚单位疫苗：去除病原体中与激发保护性免疫无关的成分保留有效免疫成分的疫苗如流感病毒神经氨酸酶亚单位疫苗等

27 二、 人工被动免疫 (artificial passive immunization)
是给人体注射含特异性抗体或者细胞因子的制剂，使机体被动获得特异性免疫力，以达到治疗或紧急预防感染的目的。

28 （一）人工被动免疫的制剂 1.抗毒素(antitoxin): 如破伤风抗毒素,白喉抗毒素等 2.人免疫球蛋白制剂:
（1）正常人血浆丙种球蛋白 （2）人特异性免疫球蛋白 3. 细胞因子和单克隆抗体

29 （二）人工被动免疫注意事项 1.防止超敏反应 2.早期、足量 3.不滥用丙种球蛋白

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31 三、计划免疫 有计划地用疫苗进行接种，预防相应传染病，确保儿童健康成长的重要手段，最终达到控制以至消灭相应传染病的目的而采取的重要措施。

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33 常见传染病疫苗接种前后的发病率比较 1.白喉 2.百日咳 3.破伤风 4.流感 5.脊髓灰质炎 6.流行性腮腺炎 7.麻疹 8.风疹 106
发病数 104 接种后 102 1 2 3 4 5 6 7 8 1.白喉 百日咳 破伤风 4.流感 5.脊髓灰质炎 6.流行性腮腺炎 7.麻疹 风疹

34 免疫治疗（immunotherapy):
第三节 免疫治疗 免疫治疗（immunotherapy): 指利用免疫学原理，针对疾病的发生机制，人为地调整机体的免疫功能，以达到治疗目的所采取的措施。