四、微生物检验 HSV感染已有疗效显著的抗病毒治疗方法。临床上迫切需要快速准确的诊断方法。 (一)标本采集 一般采集病损皮肤粘膜的拭子。新鲜水 疱液含有高浓度的病毒，可用棉签吸取残 存的水疱液后，用力擦拭病损部位的基底 部，以采集感染的上皮细胞。HSV能在病毒.

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11 四、微生物检验 HSV感染已有疗效显著的抗病毒治疗方法。临床上迫切需要快速准确的诊断方法。 (一)标本采集
一般采集病损皮肤粘膜的拭子。新鲜水 疱液含有高浓度的病毒，可用棉签吸取残 存的水疱液后，用力擦拭病损部位的基底 部，以采集感染的上皮细胞。HSV能在病毒 运送液中存活2—3天。不得在-20℃冻存。

12 （二）标本直接检查 1.直接显微镜检 查用荧光素标记 或酶标记单克隆抗体检测HSV抗原。 2.核酸检测 也可采用DNA杂交或者
PCR法直接检测标本中的HSVDNA， 敏感性、特异性高。

13 （三）病毒分离和鉴定 是最为敏感的方法，并且可对HSV分离株 进行分型，能在许多培养细胞产生CPE。 常用原代人胚细胞和人二倍体细胞分离
圆，折光性强，有细胞融合，形成多核 巨细胞， CPE出现快而明显。可在接种 后18～24h出现CPE，病毒含量如在细胞 培养液中加地塞米松，可加快CPE的出 现，增加CPE病灶的数量。 ·

14 通常采用特异性的MoAb进行组化染色， 可进行鉴定和分型。也可用型特异性 DNA探针进行的鉴定和分型。

15 (四)抗体检测 双份血清HSV抗体阳转，可诊断 为原发感染，但无法区分HSV型别。 抗HSVIgM抗体的检测无法用于区
分原发感染和复发感染。复发感 染时抗HSVIgM抗体也升高，单份 血清检出HSVIgG抗体表明个体曾 感染过HSV。 常用的检测方法是ELISA。

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18 微生物检验 临床标本主要有疱疹病损部位的 涂片、皮肤刮取物、水疱液、活 检组织和血清。主要通过病毒分 离、免疫荧光和原位杂交或者PCR
等检测技术，在患者的组织或者 体液中证实VZV或者其成分的存在。

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21 微生物检验 病原学诊断方法包括直接检查、 病毒分离和鉴定以及血清学诊断。 （一）直接检查 包括检测病毒颗粒、病毒包涵体 或者抗原或者核酸。

22 1．检测病毒颗粒 可采用假复制方法 对HCMV先天性感染患儿的尿液和 口腔标本进行电镜检查，敏感性 为噬斑形成单位/ml，优点是快速 缺点是不敏感。

23 2．检测病毒包涵体 活检组织标 本切片或者脱落细胞涂片，以 HE等常规染色，观察巨细胞以 及细胞核内嗜碱性包涵体。可 用于快速诊断，但敏感性较低。

24 3．检测病毒抗原 活检组织标本 切片、脱落细胞或者周围血白 细胞涂片、接种标本并培养数 日的盖玻片细胞培养物。进行 免疫荧光染色，检测特异性抗 原。该法敏感特异快速，可用 于快速诊断。

25 4．检测病毒核酸 用PCR法检测 核酸。敏感性高，能检出活 动性感染和潜伏感染。

26 (二)病毒分离和鉴定 是诊断最可靠的金标准。将标本接种人胚 成纤维细胞，观察4～6周，期间盲传2次。
产生特征性的CPE，细胞肿胀变圆，形成巨 大细胞，可作出初步诊断。经过MoAb免疫 染色作出最终鉴定。改良快速诊断法是培 养24h后用荧光素标记的MoAb直接检测表达 的早期抗原，在接种后24h即可检出。

27 (三)抗体检测 常用ELISA检测特异性IgG和IgM抗体。

28 (四)结果分析 1．先天性感染的诊断 在出生最初 3周内从新生儿尿液、呼吸道分泌 物或者其他体液分离出HCMV是最 敏感和特异的确诊依据。

29 2．血清学试验结果的分析 6个月 以上的患儿，母体抗体已经消失， 如果出现双份血清抗体阳转，可 作出原发感染的诊断，可诊断为 近期感染。

30 3．免疫功能缺损个体HCMV感染检 测结果的分析 检出HCMV提示 存在活动性感染，但不能确定 HCMV感染与疾病的相关性。

31 （五）评价 HCMV检测结果分析必须结合患者的临 床评价，才能对HCMV感染和疾病提供 准确的诊断，及时进行对应的抗病毒 治疗。

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33 抗原分类 ①潜伏期抗原，为潜伏感染细胞所 合成，包括EBV核抗原(EBNA)和潜 伏期膜蛋白(LMP)。这类抗原的表

34 ②早期抗原(EA)，属于病毒非结构蛋 白，其合成不依赖于病毒DNA的复制。 EA的表达显示开始病毒复制，是增 殖标志。 ③晚期抗原(LA)，包括衣壳抗原(VCA) 和包膜抗原(MA)。

35 微生物检验 病原学诊断方法包括直接检测病 毒抗原或者核酸、病毒分离和鉴 定以及抗体检测。

36 (一)直接检查 在病变组织中检测EBV抗原或者 核酸是EBV感染诊断的重要方法。 大部分病变组织中存在EBV的核蛋
因组核酸。用核酸杂交和PCR或者 RT-PCR可检出基因组核酸及其转录 产物。

37 （二）病毒分离和鉴定 分离EBV的标本可以是唾液、咽漱液 及血细胞等，咽漱液中分离率最高， 可达80％以上。将咽漱液接种人脐
带血淋巴细胞，培养4周，如果出现 大量的转化淋巴细胞，则提示病毒 培养阳性，鉴定通过免疫荧光技术 检测EBV核抗原。

38 (三)抗体检测 是最常用的诊断方法。由于不同病人 体内针对EBV不同的抗原成分所产生的 抗体的组成及水平均有一定的特征性，
为疾病诊断提供了参考指标。

39 （四）结果分析与评价 根据抗体模式和滴度，可归为3大类： ①易感：抗VCA抗体阴性； ②原发感染：抗VCA抗体阳性，EBNA 抗体阴性；
EBV活动性感染的患者产生抗EA／ D抗体。

40 第五节人疱疹病毒6、7、8型 一、人疱疹病毒6型 感染在人群中十分普遍。少数发生 幼儿急疹或婴儿玫瑰疹。在器官移
植等患者，可发生重症感染，如脑 炎和肺炎等。 为疱疹病毒科中的一个独特成员。 基因组DNA为160～170kb，G+C mol 为43％～44％。在CD4+T细胞中增殖 良好。

41 微生物学检验 包括病毒分离和鉴定、病毒核酸检测 和抗体检测。 采集患者外周血单个核细胞，与经过 PHA刺激的脐带血淋巴细胞共同培养。
出现肿大的气球样细胞提示存在病毒， 可用免疫荧光法鉴定。 是HHV-6活动性感染的强有力的诊断 依据。

42 采用核酸杂交技术检出HHV-6核酸。 用血清学方法检出患者血清中的特 异性IgM和IgG抗体。 从患者外周血中检出病毒或者病毒 DNA是HHV-6活动性感染的强有力的 诊断依据。

43 二、人疱疹病毒7型 从慢性疲劳综合征患者的外周血单个 核细胞、幼儿急疹患者、肾移植患者 以及各种免疫抑制治疗病人中分离出
HHV-7。在健康人的唾液中大量存在 HHV-7。目前认为HHV-7是一种普遍存 在的人类疱疹病毒，但除了幼儿急疹 外，还没有发现其他任何疾病和HHV-7 存在着必然的联系。

44 三、人疱疹病毒8型 是从伴发卡波济肉瘤的艾滋病患者的病灶 中通过分子生物学途径发现的， HHV-8具 有典型的疱疹病毒颗粒的形态和结构。病
毒dsDNA基因组为约为165kb。 HHV-8主要感染淋巴细胞，尤其是B淋巴细 胞，具有嗜B细胞的特性。 目前认为，HHV-8是以潜伏的形式存在的一 种新人类肿瘤病毒。