尿液蛋白质检查 内蒙古民族大学临床医学院 赵文海

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1 尿液蛋白质检查 内蒙古民族大学临床医学院 赵文海
尿液蛋白质检查 内蒙古民族大学临床医学院 赵文海 内蒙古民族大学临床医学院 赵文海

2 尿液蛋白质检查 尿液蛋白质检查 是尿液化学检验的最重要项目之一，当肾小球发生病变时或肾小管遭到破坏时，可产生蛋白尿。

3 蛋白质的组成 1、正常尿蛋白质的来源： （1）小相对分子质量的蛋白质：如：微球蛋白、溶菌酶、RNAE、Fc片断等。
（2）大相对分子质量的蛋白质：肾小管的髓袢升支粗段及肾远曲小管的起始部分上皮细胞分泌的THP（糖蛋白）及分泌型IgA（SIgA）等。 （3）中相对分子质量的蛋白质：占50％左右。 尿蛋白总量不超过130mg/24h，随机尿不超过80mg/L，蛋白定性试验：阴性。 2、蛋白尿：尿蛋白总量超过150mg/24h或100mg/L，蛋白定性试验：阳性。

4 蛋白尿的生产原因及机制 1、肾小球性蛋白尿：
（1）选择性蛋白尿：当肾小球损伤较轻时,主要是滤过膜屏障、尤其是电荷屏障受损，致使膜电荷减低，A、转铁蛋白等滤出增多。其Pro相对分子质量为4－9万的中相对分子质量的A、抗凝血酶、转铁蛋白、前清蛋白、α1酸性糖蛋白、 α1抗胰蛋白酶及少量小相对分子质量的蛋白质，如β1－M、Fc片断、部分糖蛋白等。 Pro相对分子质量为大于9万的IgG、IgM、IgA、C3等极少量的蛋白质。A/G大于1,Pro: 最典型的是肾病综合症，Pro大于3.5g/24h. （2）非选择性蛋白尿：反应肾小球毛细血管壁有严重破裂损伤。混合蛋白质，Pro：＋－＋＋＋＋。多见于原发性肾小球疾病。 2、肾小管性蛋白尿:感染、中毒引起。小分子蛋白质尿，Pro：＋－＋＋。

5 3、混合性蛋白尿：肾小管和肾小球同时损伤，大中小Pro均增多。 血液循环中，出现大量以中、小相对分子质量的Pr0。 4、溢出性蛋白尿：指血液循环中，出现了以中、小相对分子质量为主的异常蛋白质，如：游离Hb、肌红蛋白、溶菌酶等增多，经肾小球滤出，超过了肾小管的重吸收最大能力，而大量出现在尿中。Pro：＋——＋＋。（1）浆细胞病 （2）急性血管内溶血 （3）急性肌肉损伤 （4）其他：AML－血溶菌酶增多；急性胰腺炎－血、尿淀粉酶增多。 5、组织性蛋白尿：凡肾组织代谢产生的蛋白质、组织破坏分解的蛋白质、肾脏组织炎症、药物刺激泌尿道组织分泌的蛋白质等。Pro：±－＋；多为T－H糖蛋白－是尿管型的基质和尿结石的中心，见于肾脏疾病、泌尿道结石等。

6 6、生理性蛋白尿： （1）功能性蛋白尿：剧烈运动、发热、寒冷
刺激、精神紧张、交感神经兴奋等，引起肾血管痉挛或充血等暂时性功能改变，使肾小球毛细血管壁的通透性增高，导致暂时性、轻度蛋白质，称为～。Pro：小于＋。 （2）体位性蛋白尿：又称直立性蛋白尿，前突的脊柱压迫肾静脉或直立过久，使肾脏下移，肾静脉扭曲造成肾静脉淤血、淋巴、血流循环受阻有关。 7、偶然性蛋白尿：又称假性蛋白尿，混入多量血液、脓液、粘液或生殖系统分泌物，如：白带、月经血、精液、前列腺液等

7 检测原理 一、尿蛋白定性试验： 1、试带法：利用PH指示剂的蛋白误差，进行尿蛋白定性或半定量检查。 2、加热醋酸法 3、磺基水杨酸法
二、蛋白质定量 1、沉淀法：尿蛋白质＋生物碱，在H＋条件下，形成沉淀，估计蛋白质含量。 2、比浊法：磺基水杨酸－硫酸钠法，沉淀与已知浓度标准管比浊，求出蛋白质的含量。 3、比色法：双缩脲比色法。 4、染料结合法：考马斯亮兰法CBB、丽春红S法等 5、免疫法：酶联、比浊、放射免疫法等。可检出各种不同性质的蛋白质，如：A、G、M、Hb、Mb等。 6、尿蛋白电泳法：

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10 十一项尿液分析仪

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性 能 特 点  　　创新的JP1-UF-100加快尿液分析速度提高了工作效率，当今，尿液分析需要几乎衡定的时间和注意力，这便导致了过低的工作效率。现在,UF-100的自动处理，令尿液分析实现了离机式分析。离心、玻片的准备和人工镜检等耗时的预处理程序被简化了，快速的全程分析可使分析速度达每小时100全样本。 　依据我们丰富的市场经验，配合你的需求而设计的优质产品。 革命性流式尿沉渣 全自动分析仪____尿检验从定性到定量 　　1.创新的流式细胞技术 　　JP1-UF-100采用流式分析技术，配合快速荧光染色技术和电阻探测技术，达到直接检测和计数尿中有形成的目的，从而实现了尿沉渣检测的自动化和标准化。UF-100每小时可测定多至100份标本，仪器最多存储1000份标本的测试结果和图形。 　　2.准确的自动尿液标本检测 　　尿中有形成份流经仪器管路时，其有形成份中的细胞核和细胞膜被复合快速荧光染色剂染色后，在鞘流液的作用下依次进入流动分析池。氩离子激光器以488nm波长透射流动池，对流经光路的每一颗粒进行散射光、荧光及脉冲时间分析。经过计算机对上述数据的分析，实现对尿中有形成份的分类和计数。 　　※前向散射光（Fsc）/荧光（F1）散射图：根据细胞大小和染色强度区分红细胞、白细胞和细菌。 　　　　

14 ※ 荧光波宽（Flw）/前向散射光波宽（Fscw）散射图：可区分上皮细胞，病理管形和非病理管形。 3
※ 荧光波宽（Flw）/前向散射光波宽（Fscw）散射图：可区分上皮细胞，病理管形和非病理管形。 　　3.多项目报告和提示功能　 　　JP1-UF-100仪器对每一标本将找印十四类结果，其中包括六项图形测试结果。UF-100实现了每控，使不同人员，不同时间的测定结果具有可比性，并能够与尿分析试纸结果进行交叉核对，最大限度地满足临床需要。 ※ 定量测试项目： 　　红细胞，白细胞，上皮细胞，管形和细菌 　　※标本提示项目： 　　病理管形，小圆细胞，类酵母细胞，晶体和精子 　　※红细胞形态： 　　变异红细胞，非变异红细胞，混和型 　　提示             交叉检查                　　病理性型      试纸条               UF-100 　　小型细胞      潜血/血红蛋白     红细胞 　　微菌样细胞   白细胞脂酶    白细胞 　　结晶             蛋白                     管型 　　精虫             亚硝酸盐              细菌 　　规格 　　

15 测定项目：白细胞、红细胞、上皮细胞、管型、细菌 　　提示项目：病理管型、小园细胞、微菌样细胞、结晶、精虫 　　速 度：每小时约100个样本 　　样本量：    0.8ml 　　数据储存： 1，000个测试结果包括散 射图和直方图     　　              12个质控数据文件 　　体积：        主机：      约600×705×606     　　宽×高×厚（mm）  取样机：    约600×93×201       　　             激光放大器：约221×148×285         　            激光转换器：约222×216×290           　          真空泵：    约340×390×500 　　重量（kg）         主机：      约68 　　取样机：    约6             　　      激光放大器：约9       　  　          激光转换器：约23     　  　            真空泵：    约31 　　外周兼容：主计算机串行接口                 　　  彩色图形打印机并行接口 　　数据打鲟机DP-520并行接口     　　              尿试纸机串行接口 　　电源：      117VAC±10%,220VAC±10%,240VAC±10 (50或 60Hz) 　　耗电量：   主机：取样机：500VA(50或60Hz)   　　                激光放大器：1，500VA（50或60Hz）       　　            真空泵：     480VA（50或60Hz）

16 方法学评价 1、加热醋酸法：特异性强，干扰因素少，能同时检出A、G，但敏感性较低，一般在0.15g/L左右；
2、磺基水杨酸法：操作简单，反应灵敏、结果显示快，A、G、T－H糖蛋白和本周氏蛋白发生发应；灵敏度可达0.05－0.1g/L、可出现假阳性。 3、试带法：本法快速、简便、易于标准化，适于健康普查或临床筛检。对A敏感，对G不敏感，可漏检本周氏蛋白。当试带法阴性而磺基水杨酸法阳性时，应考虑与造影剂、青霉素有关，尿液PH增高也可产生假阳性。

17 4、沉淀法：已淘汰。需要特殊器材，测定费时，只能粗略估计结果。
5、比浊法：操作简便，但线性范围窄，受温度、PH、T、混匀方式等多种因素的影响，结果不准确。少用。 6、比色法：显色稳定，灵敏度低。对A、G的反应都有相同的灵敏度。染料可附着比色杯上，难以清洗。 7、免疫法、电泳法：灵敏度高，特异性强，结果准确，是当今普遍采用的新技术，有很好的临床应用前景。

18 质量控制： 1、加热醋酸法：应控制加酸量和盐类的影响。
2、磺基水杨酸法：某些药物、碘造影剂、高浓度的尿酸、草酸盐、粘蛋白可呈假阳性，加热煮沸可消失 3、试带法：注意有效期，使用合格的试带等。 减少误差的方法：标本、试剂合格；操作规范。

19 参考值：1、阴性 2、定量：小于0。1或0。15g/L 临床意义： 1、生理性蛋白尿：定性试验：不超过＋；定量试验：小于0。5g/L （1）功能性蛋白尿： （2）直立性蛋白尿： （3）摄入性蛋白尿： （4）偶然性蛋白尿： （5）老年性蛋白尿： （6）妊娠性蛋白尿：

20 2、病理性蛋白尿： （1）肾前性蛋白尿：浆细胞病；血管内溶血；大面积肌肉损伤；酶类增多等 （2）肾性蛋白尿：
1）肾小球性蛋白尿：肾病综合症；原发性肾小球肾炎；继发性肾小球肾炎。 2）肾小管性蛋白尿：肾小管间质病变；重金属中毒；药物中毒；器官移植等。 （3）肾后性蛋白尿：泌尿、生殖系统炎症；泌尿系统结石、结核、肿瘤等；泌尿系统邻近器官疾病；其他病理性蛋白尿等。

21 分 类机 制 蛋白种类疾病肾小 球性 蛋白 尿 选择性肾小球滤过膜截留正常血浆蛋白缺陷 清蛋白为主微小病变性、轻微病变性肾病综合征非选择性反映肾小球毛细血管壁严重损伤断裂，使尿中出现血循环中蛋白成分IgG、IgA、IgM、C3、β2-M、清蛋白 肾小球肾炎、糖尿病肾病肾小管性蛋白尿肾小管对正常滤过的血浆蛋白重吸收障碍β2-M、溶菌酶间质性肾炎、重金属肾中毒、抗生素肾损害混合性蛋白尿肾脏病变同时累及肾小球和肾小管 清蛋白、β2-M、免疫球蛋白等 肾小球疾病后期、肾小管间质疾病组织性蛋白尿肾小管代谢产生和组织破坏分解的蛋白质 T-H糖蛋白为主 分离蛋白有助于定位诊断溢出性蛋白尿异常增多的血浆蛋白质通过正常肾小球时滤过增加 IgG、IgM的轻链、B-J蛋白、肌红蛋白、血红蛋白多发性骨髓瘤、急性溶血、挤压伤

22 二、尿液微量白蛋白的测定 健康人的尿液白蛋白一般小于20mg/L, 大于30mg/L时即提示异常。 定义：微量白蛋白是指尿中白蛋白含量超过
健康人水平，但常规尿蛋白试验为阴性的 低浓度白蛋白。 检测方法：染料结合法、放射免疫分析、 酶联免疫吸附、免疫比浊分析、胶体金纸片

23 报告方式：定时留尿法（μg/ml ; mg/24h)
晨尿法(mg/L) 随机留尿法(mg/mmol Cr ;mg/g Cr) 国际上以尿白蛋白排泄率>20 mg/L 或尿总蛋 白>30mg/24h作为尿微量白蛋白的临界值。

24 临床意义： 尿微量白蛋白在糖尿病肾病中的应用 尿微量白蛋白在心血管疾病中的应用 尿微量白蛋白在炎症方面的应用 其他

25 三、 Bence-Jones protein：
实质是免疫球蛋白轻链或其聚合物，单聚体分子量为2.3万。 凝溶蛋白：pH4.5~5.5，56℃条件加热出现白色混浊及凝固，100 ℃煮沸以后混浊消失或明显减退，再冷却时又可重新凝固。 蛋白电泳时可在α2至γ球蛋白区带间的某个部位出现M区带。

26 检测方法： 对甲苯磺酸沉淀筛选实验：灵敏度3mg/L 热沉淀法验证 乙酸纤维素膜电泳或者聚丙烯酰胺凝胶电泳：M带 免疫固定电泳：区带电泳分离蛋白后，立即将浸有特异抗L链血清的薄膜条直接放到预计出现异常蛋白带的位置上，使之产生抗原抗体的复合物反应。 免疫扩散实验：用特异的L链血清进行免疫扩散实验。 临床意义：多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症

27 四、β2-microglobulin 性质：一种低分子量的蛋白质（1.18万），是细胞膜上完整组织相溶性抗原HLA的一部分。
检测方法：放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA） 参考值: 血β2-M <3.0mg/L 尿β2- M<0.2 mg/L 临床意义：肾小管疾病、血清β2-M异常增高

28 五、尿液血红蛋白、肌红蛋白及其代谢产物检查
1.hemoglobin 正常人血浆中游离血红蛋白与珠蛋白结合，以复合物的形式运转至单核-巨噬细胞系统被代谢，不能从尿液中排出。 疾病时尿液中血红蛋白有两个来源：1.发生血管内溶血，超过珠蛋白的结合能力，游离血红蛋白从尿液中排出。2.尿路（尤其是上尿路）出血，红细胞在低渗或者高渗的环境下破坏逸出的血红蛋白。

29 检测方法： 试纸法：利用血红蛋白中亚铁血红素具有类过氧化物酶作用，在邻联甲苯胺等供氢体存在下，使过氧化物还原为水，而邻联甲苯胺被氧化成有色物质。 免疫测定方法：利用抗人血红蛋白单克隆抗体 临床意义： 血管内溶血 泌尿道出血

30 2.myoglobin 肌红蛋白是横纹肌、心肌细胞内的一种含亚铁血红素的蛋白质，分子量小，易通过肾小球。 测定方法：
纸片法：原理与血红蛋白测定类似。 肌红蛋白能溶于0.8饱和度的硫酸铵溶液中 免疫法：利用单克隆抗体 ELISA、

31 3.hemosiderin 当发生血管内溶血时，大部分血红蛋白随尿排出，其中一部分血红蛋白被肾小管上皮细胞再吸收后在肾小管上皮细胞内分解形成血铁黄素，再随细胞脱落至尿中排出。 检测方法：Prussian反应，当尿中含有铁血黄素时，其中高铁离子与亚铁氰化钾作用，在酸性环境下，产生蓝色的亚铁氰化钾沉淀。 注意事项：1.避免铁污染；2.清晨第一次尿阳性率较高 临床意义： 血管内溶血 行军性血红蛋白尿。

32 4.porphyrin δ-氨基酮戊酸、卟胆原 尿卟啉 粪卟啉 原卟啉+Fe 血红素 卟啉尿是指尿中排出过多的卟啉或者其前体
测定方法：酸萃取后，紫外线进行检测 临床意义：先天性卟啉病、肝性卟啉病

33 六、Tamm—Horsfall protein
TH蛋白由Henle袢升支与远曲小管的上皮细胞的高尔基复合体产生，是一种肾特异性蛋白质。是构成管型的一种重要蛋白。 检测方法：酶联免疫吸附法、放射免疫法 临床意义：协助诊断上尿路疾患 有助于泌尿系统结石形成机制的研究。

34 七、尿液酶测定 尿液酶的来源： 血液的酶：淀粉酶、溶菌酶
肾实质的酶：肾小管刷状缘（γ-GT、AAP、LAP、ALP、α-GLU）、溶菌体（NAG、ACP、β-葡萄糖醛酸苷酶）、胞浆（LDH）及线粒体（AST） 尿路及生殖系统的酶：前列腺（ACP、NAG）、精液（LDH、hyaluronic acid）、肿瘤细胞

35 尿液酶测定时尿液标本的处理方法： 尿液通常为弱酸性，且蛋白质浓度较低，不利于尿酶活力的保存，因此必须及时测定和处理。
大部分尿酶活性比血浆酶活性低，在测定时适当加大标本用量或延长酶作用时间。 尿液中含有较高浓度的低分子物质，如尿素、尿酸、肌酐、硫酸盐、磷酸盐等，他们可能是某些酶的抑制剂，因此必须对尿液标本进行预处理：超滤法、透析法、凝胶过滤法

36 (N-acetyl- β –D-glucosaminidase, NAG）
1.N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (N-acetyl- β –D-glucosaminidase, NAG） NAG是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，存在于所有组织中，以前列腺和肾近球肾小管溶酶体含量最高。 临床应用： 各种肾脏疾病：急慢性肾功能不全、肾病综合症 肾移植排斥反应：早期诊断 药物性肾损害： 其他系统疾病：糖尿病肾病、高血压肾病

37 2.α-葡萄糖苷酶（ α-glucosdiase, α-GLU）
α-GLU主要存在于肾小管上皮细胞刷状缘，在血清中的含量极低，且分子量大（9万），不易通过肾小球，因而尿中的α-GLU主要来自肾小管上皮细胞。 测定：用麦芽糖做底物，经α-GLU的水解作用生成葡萄糖，再用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖的生成率。 临床意义：肾小管损伤的敏感指标

38 3.谷氨酰转移酶（γ-glutamyl transferase，γ-GT）
用γ-谷氨酰对硝基苯胺做底物，测定游离的对硝基苯胺量。 临床意义： γ-GT常作为药物性肾损害的诊断指标。 γ-GT在急性肾炎、肾盂肾炎、肾结石时升高 γ-GT在慢性肾衰、肾癌时降低。

39 谢谢大家!