维生素C含量测定方法综述.

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1 维生素C含量测定方法综述

2 摘要 目前研究维生素C测定方法的报道较多，如滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等，各种方法各有特点。特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法。本文对近年来有关维生素C的测定方法进行了综述。

3 关键词 维生素C 滴定法 光度分析法 高效液相色普法等

4 概述 维生素C是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。维生素C有防治坏血病的功能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素C能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。其广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定维生素C的含量，对饮食健康、医疗保健都具有十分重要的意义。近年来报道的测定方法主要有滴定法、光度法、高效液相色谱法等。

5 维生素C的结构式 维生素C：六碳的多羟基内酯

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7 1 滴定法测定维生素C 1.1 2，6一二氯靛酚法 1.2 微量滴定法

8 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量 其能还原2,6-二氯酚靛酚染料。 维生素C具有还原性的烯二醇基，我们通过氧化还原滴定来测定维生素C

9 ——2，6-二氯靛酚法 原理 2，6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸性介质中为红色，碱性介质中为蓝色，与Vc反应后，生成无色的还原型酚亚胺，因此，在酸性条件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液显玫瑰红色，即为终点；无需另加指示剂。

10 ——2，6-二氯靛酚法 方法 取本品适量（约相当于Vc50mg），用适量水溶解，置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20ml,再用水稀释置刻度，摇匀； 精密量取稀释液适量（约相当于Vc2mg）置50ml的锥形瓶中,加偏磷酸-醋酸试液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液显玫瑰红色,并持续5s不褪； 空白试验：取偏磷酸-醋酸试液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。 计算： (V-V0) ×F ×T ×W 反应摩尔比１﹕１ 标示量%= ×100％ W ×标示量

11 2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。
+ ==== + 维生素C ,6-二氯酚靛酚 维生素C ,6-二氯酚靛酚 （还原型） （氧化型，粉红色） （氧化型） （还原型） 2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。

12 碘量法 原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化，用碘滴定VC 终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为终点 反应式：
EC6H6O6/C6H8O6=0.18 ,EI2/I-=0.535 终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为终点 反应式：

13 碘量法 碘的浓度由已知浓度的Na2S2O3标准溶液标定 反应式： 计算式： Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100%

14 碘量法 注意 ！ 测定时：加HAC使溶液呈弱酸性 原因: (1) Vc还原性很强，在空气中很容易被氧化，在碱性介质中更甚
(2)I2在碱性介质中会发生歧化反应 加HAC可减少VC的副反应，避免实验误差

15 电位滴定法 原理：根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点. Pt为指示电极，甘汞作参比电极
E池＝E+-E-+E液接电位＝EI2/I-+k(常数)

16 电位滴定法 原理(具体来说:) 随着滴定剂的加入，由于发生化学反应，待测离子浓度将不断变化； 从而指示电极电位发生相应变化；
导致电池电动势发生相应变化； 计量点附近离子浓度发生突变；引起电位的突变，因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点。

17 电位滴定法 计算式：(与碘量法相同) 优点： 右图：电位滴定法基本仪器装置 Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc ) *100%
解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题

18 2 分光光度测定维生素C 2.1 2，4一二硝基苯肼分光光度法 2.2 钼蓝比色法 2.3 其他方法

19 2，4一二硝基苯肼分光光度法 原理： 维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸 反应式：

20 2，4一二硝基苯肼分光光度法 pH>5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸 二酮古洛糖酸

21 2, 4一二硝基苯肼分光光度法 脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎 脎在500nm波长有最大吸收
脎的结构：

22 分光光度法 样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处理 500nm处测吸光度 下图：721型分光光度计

23 钼蓝比色法 马占玲等用钼蓝比色法测定青椒中还原型维生素C含量的基本原理和方法。测定波长839 nm，维生素C含量在0．004～0．024 mg／mL范围内呈线性关系，回收率为97．2％。该方法简单、快速、准确。

24 钼蓝比色法 逯家辉等提出了一种测定维生素C的新方法，它是基于Folin B试剂与抗坏血酸在pH=3的三氯乙酸酸性介质中反应生成脱氢抗坏血酸，反应产物在910 nm波长处有最大吸光度进行定量分析。该方法的线性范围为0～50．0μg／mL，相关系数r=0．999 86，回收率为98．12％～102．15％。

25 ——差示旋光法 与 原理 方法 结果 讨论 维生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有显著差异，而片剂辅料旋光度保持不变
差示旋光法消除辅料的影响，直接测出该制剂的含量

26 ——差示旋光法 与 原理 方法 结果 讨论 1）标准溶液的配制
TEXT TEXT 1）标准溶液的配制 准确称取维生素C精制品5.0g，乙二胺四乙酸钠0.37g,置于100mL容量瓶中,用新沸冷却的蒸馏水溶解,加水到指定刻度,配制成50mg/mL的维生素C标准溶液。

27 ——差示旋光法 与 方法 结果 讨论 原理 2）比旋光度与溶液pH值的关系
量取10.0mL维生素C标准液于50mL量瓶中,用水稀释至50mL。测定溶液的pH及旋光度,然后逐次分批加入氢氧化钠固体(每次约50mg),每次溶解后,测定一次溶液的pH及其旋光度,得到维生素C溶液的pH及旋光度关系

28 ——差示旋光法 选定pH为2.2和6.2

29 ——差示旋光法 与 原理 方法 结果 讨论 2）差示旋光度与溶液浓度关系
吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容；一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置3min后,用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光度(△a)。 文献结果：线性方程为△a=0 205*C+ 0．05，r=0．9964

30 ——差示旋光法 与 原理 方法 结果 讨论 3）辅料干扰试验
取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、EDTA、糊精等按处方比例混匀)两份分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容,一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。 文献结果：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素C含量的测定不干扰。

31 ——差示旋光法 与 原理 方法 结果 讨论 4）稳定性试验 同一测试样品，在120min内，每隔3min测定一次差示旋光度。
文献结果：差示旋光度基本不变

32 ——差示旋光法 与 原理 方法 结果 讨论 5）回收率试验
精密称取维生素C精制品500.0mg两份，分别置于50mL容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。 文献结果：平均回收率为97.8％，变异系数cv为1.03％

33 ——差示旋光法 与 原理 方法 结果 讨论 6）样品测定
TEXT TEXT 6）样品测定 取维生素C片剂10片，称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液(相当于含Vc 20mg/mL)，滤去不溶物，测定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其含量。

34 ——差示旋光法 与 原理 方法 结果 讨论 方法 TEXT TEXT 1）维生素易被氧化,空气及水中的氧均可使其氧化分解，配制溶液时使用新沸冷却水,同时加人EDTA作为稳定剂； 2）样品测定时，片剂部分物质不能完全溶解，必须过滤除去，然后测定滤液的差示旋光度。

35 3 高效液相色谱法测定维生素C 3.1 HYPERSIL—C8色谱柱法 3.2 VenusilXBP—C18柱法 3.3 其他方法

36 HYPERSIL—C8色谱柱法 采用HYPERSIL—C 8色谱柱，用0．1％低浓度的草酸作流动相，陈昌云等采用0．05 mol／L磷酸二氢钾缓冲液：甲醇=80：20 (v／v)作流动相。流速为1．0mL／min，二极管阵列检测器，检测波长为254 nm。

37 3.2 VenusilXBP—C18柱法 系统采用VenusilXBP—C18柱(4．6x250 mm，5μg)，用0．2％的偏磷酸的水溶液作为流动相，流速1 ml／min，检测波长240 nm；维生素C浓度在0．1-1．0 mg／mL范围内有良好的线性关系。该方法回收率99．89％，标准偏差0．91，操作简便、灵敏、可靠

38 薄层扫描法 原理 维生素C具有 较强还原性，可使蓝色染料2，6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺，而本身被氧化成去氢抗坏血酸，利用此特征进行薄层扫描法测定含量。

39 薄层扫描法 操作方法与结果 （1）试纸的制备 2,6-二氯靛酚钠 (DCP-Na)溶于无水乙醇配成0.05%的DCP-Na乙醇溶液，滤纸在盛有DCP-Na乙醇溶液的展开缸中浸渍3min，边浸边摇展开缸，使滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于暗处，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，备用。

40 薄层扫描法 （2）缓冲溶液的配制 称取柠檬酸水合物10g，放入1000ml容量瓶中，加入1M 氢氧化钠 420ml，并用蒸馏水稀释至刻度，此溶液的pH应为3.5。否则，用酸或碱调整 pH值，保存于冰箱中。

41 薄层扫描法 与 原理 方法 结果 讨论 3）扫描条件确定
在制备的染料试纸上定量点上维生素C对照品进行扫描 ，维 生素 C在 290nm 处有最大吸收，420nm处无吸收，故选择1=290nm， 2=420nm．双波长反射式锯齿扫描。

42 薄层扫描法 与 结果 原理 方法 讨论 4）线性实验 4.1）对照品溶液的配制 精密称取维生素C标准品100mg，用缓冲溶液配成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素C标准溶液1、2、3、4、5ml，分别置于10ml容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。 4.2）测定 用5l定量毛细管，分别吸取上述溶液各5 l，点于试纸上 。点样后晾干，并将试纸 固定在20cm×20cm玻璃板上，放入薄层扫描仪。测定△A 的积分值 (峰面积)作为纵坐标Y ，点样量为横 坐标X，得一直线方程 Y=15692X ，r= 0．9991

43 薄层扫描法 与 原理 方法 结果 讨论 5）样品的含量测定
TEXT TEXT 5）样品的含量测定 取维生素 C片10片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放入100ml容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振摇，使维生 素 C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml 移至10ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用 5 l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上 ，然后扫描 测定峰面积，由工作曲线法计算维生素C片中的维生素C含量。

44 薄层扫描法 6）回收率实验 精密称取维生素C对照品20mg，其它原辅料适量，置 10ml容量瓶中，加缓冲液稀释至刻度，振摇，滤过 ，弃初滤液。分别吸取续滤液与对照品维生 素 C液各5 l点于同一试纸上，按上述条件进行扫描测定。

45 薄层扫描法 与 原理 方法 结果 讨论 点样时各点间距应大于10mm，扫描测不定期波长可做少量变动，但每次测定必须固定同一测定波长
点样量 在3～8l之间线性关系较好，当点样量为10 l，线性关系较差。

46 结束语 总之，维生素C的测定方法很多，各种方法各有特点，常用的滴定法方法简单，但在滴定有色物质终点不易判断，分光光度法操作费时，高效液相色谱法是目前发展较快的一种方法，方法灵敏，选择性好，有较好的发展前景。毛细管电泳n51是近几年新兴的分析方法，具有效率高、分析时间短、样品处理简单等特点，但有待于进一步完善。

47 参考文献 [1]吴春艳．水果中维生素C含量的测定及比较[J]．武汉理工大学学报，2oo7，29(3)：90—91．

48 参考文献 [6]逯家辉，等．F0lin B分光光度法测定蔬菜中维生素C的含量[J]．分析检测，2oo5，26(8)：171—172．

49 参考文献 [11]王爱月，张向兵，李发生．高效液相色谱法测定食品及保健品中维生素C含量的研究[J】．中国卫生检验杂志，
2006，16(10)： ． [12]雍莉，等．高效液相色谱法快速测定保健食品和果蔬中的VitC[J]．现代预防医学，2005，32(3)：247—248． [13]胡志群，王惠聪，胡桂兵．高效液相色谱测定荔枝果肉中的糖、酸和维生素C[J]．果树学报，2005，22(5)：582． [14]张秀梅，等．高效液相色谱法测定菠萝果实维生素C含量[J]．福建果树，2oo7，140(1)：20—21． [15]杨建洲，张荣莉．毛细管区带电泳分析果蔬中的维生素C含量[J]．分析化学，2oo2，30(1)：120

50 谢词 本文是在徐洁老师的精心指导下独立完成的。为此，我首先要感谢徐老师，她对我的论文提出了实践性的建议，徐老师教学严谨，踏踏实实，对我的影响极大。从她身上我知道了该如何对待自己的工作，该如何做好自己的工作，为我以后踏上工作岗位有很大的帮助，使我对工作有了更新的态度，在以后的学习工作中我会加倍努力以回报老师的辛勤。再次感谢徐老师的言传身教。