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第八章 病原学诊断 细菌学诊断 病毒学诊断 真菌学诊断
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细 菌 学 诊 断 Diagnosis of bacteria
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血清学诊断：以检测患者血清中特异抗体为目的。
细菌学诊断 病原菌检测 病原菌抗原检测 其他检测法：PCR等 细菌学诊断：以检测病原菌及其抗原、产物 或核酸为目的。 血清学诊断：以检测患者血清中特异抗体为目的。
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病原菌检测 标本采集与送检的原则 病原菌的检测方法 细菌学诊断 区别取材 无菌操作 用抗生素之前 尽快送检、妥善保护 做好标记
细菌形态与结构检查 分离和鉴定 显微镜放大法 染色法——革兰染色法
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革兰染色（Gram stain） 细菌学诊断 方法 涂片 干燥 固定 染色： 初染：结晶紫 媒染：碘液 脱色：95%酒精 复染：沙黄
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细菌学诊断
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细菌学诊断 革兰染色（Gram stain） 原理：细胞壁结构 用途: 鉴别细菌 选择用药 了解细菌致病性
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细菌学诊断 抗酸染色 原理：分枝杆菌的细胞壁结构特点。 用途：分枝杆菌的鉴定 方法 初染：石炭酸复红 脱色：3%盐酸酒精 复染：碱性美兰
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分离培养是微生物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断技术。
细菌分离和鉴定 细菌学诊断 分离培养是微生物学诊断的金标准，是最可靠的传统诊断技术。
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标本 观察菌落性状、溶血性、色素——初步鉴别
致病菌的检验程序 细菌学诊断 标本 观察菌落性状、溶血性、色素——初步鉴别 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 血清学鉴定 普通琼脂平板 血平板 选择培养基 分离培养
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致病菌的检验程序 标本 培养特征 形态特征 普通琼脂平板 血平板 选择培养基 生化试验 血清学试验 动物试验 药物敏感试验
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细菌学诊断
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细菌学诊断
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细菌学诊断
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病原菌抗原的检测 细菌学诊断 优点： ①不受抗生素使用的限制； ②敏感性高。 免疫学技术: 沉淀试验 ELISA 免疫荧光等
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血清学诊断 适用于抗原性较强、病程较长的传染病诊断 取双份血清（隐性感染或者疫苗接种） 血清抗体效价受多种因素影响 直接凝集试验（肥达试验）
细菌学诊断 用已知抗原检测患者血清中未知抗体及其量的变化—— 辅助诊断方法 适用于抗原性较强、病程较长的传染病诊断 取双份血清（隐性感染或者疫苗接种） 血清抗体效价受多种因素影响 诊断方法 直接凝集试验（肥达试验） 中和试验 ELISA
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病 毒 学 诊 断 Diagnosis of virus
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病毒学诊断 标本采集与转运 急性期标本； 根据感染性质取不同的标本； 标本置于转运液中； 冷藏快运。
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病毒感染的实验室诊断方法
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病毒分离培养 方法 应 用 价 值 存 在 问 题 动物接种 应用最早； 方法简便； 结果易于观察 自身带病毒； 有的接种后不敏感；
应 用 价 值 存 在 问 题 动物接种 应用最早； 方法简便； 结果易于观察 自身带病毒； 有的接种后不敏感； 动物饲养问题 鸡胚培养 来源客观，易于管理，带病毒机会少；多途径接种 敏感病毒谱窄 细胞培养 应用广泛，敏感病毒谱广 设备技术要求条件高
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识别病毒在培养细胞中增殖的方法 （1）细胞的变化 细胞病变效应（CPE）： 病毒感染细胞后，可出现细胞圆缩、裂解或细胞肿大、数 包涵体
个细胞融合成多核巨细胞等。 包涵体
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epithelial cells - adenovirus
uninfected early infection late infection slides from CDC
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（2）红细胞吸附： （3）干扰现象 （4）pH改变
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病毒数量与感染性测定 蚀斑测定： PFU（空斑形成单位） TCID50与ID50 病毒量：Pfu/ml 用于病毒浓度的精确定量
概念：病毒感染鸡胚、动物与细胞后，引起50%死亡或病变的最小病毒量。
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病毒感染的血清学诊断 病毒学诊断 原理： 应用： 常用实验： 中和实验 血凝抑制实验
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病毒学诊断 病毒感染的快速诊断 形态学检查： 病毒蛋白抗原检查： 特异IgM检测： 病毒核酸检测：
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形态学检查 电子显微镜： 直接观察病毒 光学显微镜： 观察病毒的包涵体
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病毒蛋白抗原的检测 1、免疫荧光技术 2、ELISA 3、免疫印迹试验 4、放射免疫法
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真 菌 学 诊 断 Diagnosis of fungi
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一、病原性真菌的检查与鉴定 直接镜检：
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分离培养： －常用培养基 沙保（Sabourud）培养基 培养方法： 一般培养 小培养 动物实验 皮肤超敏反应实验
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二、真菌快速诊断 血清学实验： 核酸检测： 真菌毒素检测：
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