第二十一章 免疫学检测.

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1 第二十一章 免疫学检测

2 第一节 抗原抗体的测定 一、抗原抗体反应的相关理论
第一节 抗原抗体的测定 一、抗原抗体反应的相关理论 抗原具有抗原性（免疫反应性），可与相应的抗体在体外发生特异性结合，并在一定条件下出现可见反应现象。故可用已知的抗原（或抗体）检测未知的抗体（或抗原）。因抗体主要存在与血清中，故又称为血清学反应。

3 （一）抗原抗体反应的特点 1.特异性 2.可逆性 3.比例性和结合物的可见性 4.阶段性（1）特异性结合阶段 （2）可见反应阶段

4 （二）抗原抗体反应的主要影响因素 1.抗原、抗体反应的浓度、比例 2.电解质 3.温度 4.酸碱度

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6 三、血清学反应的种类 （一）凝集反应（agglutination） 1.直接凝集反应（direct agglutination） 是指颗粒性抗原（凝集原）与相应的抗体（凝集素）直接结合所呈现的凝集现象。如红细胞ABO血型的测定，细菌凝集试验。

7 2.间接凝集反应 （indirect passive agglutination） 是可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关的微球载体上，形成致敏颗粒，与相应的抗体或抗原在电解质存在的条件下进行反应，出现凝集。

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9 （二）沉淀反应（precipetation）
是指可溶性抗原与相应抗体在合适的电解质存在下，出现肉眼可见的沉淀现象。 1.单向琼脂扩散试验 2.火箭电泳 3.双向琼脂扩散试验 4.对流免疫电泳

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14 （三）补体结合试验 （complement fixation test，CFT) 是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统，来检测未知抗原或抗体的试验。

15 （四）中和反应（nertralization）
毒素、酶、激素或病毒等与其相应的抗体结合后，导致生物活性的丧失。 1.病毒中和反应 2.毒素中和反应

16 （五）免疫标记技术 1.免疫酶技术 2.免疫荧光技术 3.放射免疫测定 4.免疫胶体金标记技术

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18 第二节 免疫细胞的检测 一、免疫细胞的分离 二、免疫细胞的计数 （一）外周血单个核细胞的分离 （二）T、B及其它免疫细胞的纯化
第二节 免疫细胞的检测 一、免疫细胞的分离 （一）外周血单个核细胞的分离 （二）T、B及其它免疫细胞的纯化 （三）免疫磁珠分离法 （四）荧光激活细胞分离仪分离法 二、免疫细胞的计数 （一）花环形成试验 （二）荧光抗体染色

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20 三、免疫细胞功能的检测 （一）T细胞功能的测定 淋巴细胞转化试验:T细胞在体外受特异性抗原或有丝分裂原（PHA、ConA等）刺激后，能转化为淋巴母细胞。试验时取外周血，分离淋巴细胞，加入有丝分裂原或特异性抗原，在培养液中培养72小时，经涂片染色后镜检计算转化百分率。

21 （二）B细胞功能的检测 1.空斑形成细胞检测 （plaque formingcell，PFC） 是动物体外检测B细胞功能的方法。 2.定量溶血分光光度法（QHS） 又称B细胞介导的红细胞定量溶血分光光度法，反映机体的体液免疫功能。 3.酶联免疫斑点试验

22 （三）其他淋巴细胞功能的检测 1.NK 细胞活性测定 （1）NK细胞自然杀伤功能的检测 （2）ADCC试验 2.LAK细胞活性测定 （四）吞噬细胞功能检测 1.中性粒细胞吞噬功能的测定 2.大吞噬细胞的检测

23 第三节 细胞因子的检测 一、细胞生物学活性检测法 二、免疫学标记技术法 三、分子生物学方法 人类干扰素的检测 白细胞介素-1（IL-1）的检测 肿瘤坏死因子（TNF）的检测

24 第四节 分子生物技术在免疫检测中的应用 一、分子杂交技术 二、转基因技术 三、多聚酶链反应