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第十章 苛养菌及人兽 共患病原菌 苛养菌是指对营养要求苛刻,在普 通培养基上不生长或难以生长的一类 细菌;体外培养需添加特殊因子或其
第十章 苛养菌及人兽 共患病原菌 苛养菌是指对营养要求苛刻,在普 通培养基上不生长或难以生长的一类 细菌;体外培养需添加特殊因子或其 他营养成分。
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第一节 苛养菌 一、嗜血杆菌属 为一群无动力、无芽孢的G-细小杆菌;呈球杆状,有时呈丝状或多形态。属于巴斯德菌科,嗜血杆菌属。与临床有关的有9个:流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、杜克雷嗜血杆菌、埃及嗜血杆菌、嗜沫嗜血杆菌、副嗜沫嗜血杆菌、迟缓嗜血杆菌。模式菌为流感嗜血杆菌。
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(一)临床意义 本菌属存在于上呼吸道,定植可达人群 的50%。
1.流感嗜血杆菌 常引起鼻炎、咽炎、中耳炎、肺炎。在G-杆菌中引起肺炎者占到第三位。脑膜炎、心包炎、骨髓炎、关节炎也可分离到该菌。有荚膜b型对人致病性最强,脑膜炎病人中检出率最高,同时还可引起菌血症。其主要致病物质是内毒素、荚膜、菌毛和酶类。荚膜有杭吞噬作用,菌毛能粘附于人类口咽部细胞。致病力强的流感嗜血杆菌菌株具有lgA蛋白酶,能水解SIgA。
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2. 副流感嗜血杆菌 引起人类咽炎及心内膜炎,是寄居健康人体上呼吸道细菌之一。
3.溶血嗜血杆菌 存在于人体的鼻咽部,常引起儿童上呼吸道感染; 4.埃及嗜血杆菌 有高度的传染性,易侵犯儿童。常存在于细胞内。 5.副嗜沫嗜血杆菌 属于正常菌群,引起心内膜炎、败血症、脑脓肿、脑膜炎。 6.杜克氏嗜血杆菌 为性传播病菌。常引起外阴脓疱、溃疡、淋巴结肿大。
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(二) 微生物特性 1.为G-短小球杆菌,无芽孢、无鞭毛、有荚膜菌株,毒力较强。
(二) 微生物特性 1.为G-短小球杆菌,无芽孢、无鞭毛、有荚膜菌株,毒力较强。 2.需氧或兼性厌氧,最适生长温度为35℃,pH以7.6-7.8为最佳。培养时必须供给含有X、V因子的新鲜血液。最佳培养基是巧克力琼脂:因为加热可使V因子释放。 3.根据荚膜多糖抗原可分为6个血清型,其中b型的致病性最强,f型次之。 4.抵抗力弱,加热50℃30分钟被杀死。消毒剂敏感,干燥易死亡。DNA 的G+Cmol%为37—44。
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(四)微生物检验 1.根据不同感染分别采取血液、脑脊液、鼻咽分泌物,采集后立即送检。
2.直接镜检 查到G-短小杆菌或多形态杆菌,结合临床症状,可做初步诊断。 3.分离培养 巧克力琼脂中加入抗生素(万古霉素、杆菌肽、氯林可霉素),可提高本菌的阳性率。经18~24h培养出现小、无色透明的菌落。因为葡萄球菌能合成V因子释放,促进本菌的生长,故与金黄色葡萄球菌一起培养时,可见到靠近葡萄球菌的菌落较大,而远离的菌落较小,称为“卫星现象”。
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5.核酸检测:即取囊性纤维化病人的痰,采用DNA杂交的方法,检查流感嗜血杆菌的外膜蛋白,比传统的培养方法阳性率高。
4.抗原检测:可做荚膜肿胀试验,取抗体与菌悬液混匀,加美蓝混合后,室温10分钟用油镜观察,如菌体呈蓝色,周围绕有膨大空白圈为阳性。 5.核酸检测:即取囊性纤维化病人的痰,采用DNA杂交的方法,检查流感嗜血杆菌的外膜蛋白,比传统的培养方法阳性率高。
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6.药物敏感试验 流感嗜血杆菌引起的感染性疾病,若β-内酰胺酶阴性,则首选氨苄青霉素、阿莫西林,次选磺胺及增效剂(TMP-SMZ)、二、三代头孢菌素、红霉素及氨曲南。应选用专用培养基(HTM),检测β-内酰胺酶,如阳性提示对青霉素、氨苄西林和阿莫西林均耐药。b型与非b型相比,b型产生β-内酰胺酶比非b型高两倍。
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二、鲍特菌属 (一)分类 包括百日咳鲍特菌、副百日咳鲍特菌、支气管鲍特菌、鸟鲍特菌、欣氏鲍特菌、霍氏鲍特菌,前三种DNA同源性高达72%~94%,DNA的G+C mol%为66~70,是临床常见的致病菌,而后三种临床致病报道较少。
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(二)临床意义 百日咳的致病菌,人是惟一的传染源,通过飞沫传染。 感染后传染性强,患者出现阵发性剧烈咳嗽,直至咳出粘稠的痰液或呕吐为止。
病后及预防接种后可产生较持久的免疫力。
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本菌粘附在气管和支气管上皮细胞上并迅速繁殖释放毒素:①百日咳毒素是主要毒力因子,与阵发性咳嗽、支气管痉挛有关。②丝状血细胞凝集素能促进病原菌粘附在纤毛上皮细胞上。③腺嘌呤环酶毒素可使吞噬活性受抑,导致免疫力减低。④气管细胞毒素对纤毛上皮细胞有特殊亲和力,抑制纤毛摆动并使细胞坏死脱落。
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(三)微生物特性 该菌属为G-小杆菌,无芽胞,有荚膜。专性需氧,最适生长温度为35℃—37℃,
O抗原为共同抗原,K抗原的因子7为百日咳、副百日咳和支气管炎鲍特菌所共有。经多次传代后,菌落变为粗糙而呈多形性;失去荚膜变为无毒株。 抵抗力弱,但在低温能生存,对紫外线敏感,日光照射60分钟可死亡。
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(四)微生物检验 2.革兰染色直接镜检为G-小杆菌。
1.标本采集 ①咳碟法:患者对准打开的鲍-金氏培养基平板咳嗽数次,直接收集病人咳出的飞沫培养。②鼻咽拭子法:将拭子进入鼻咽部采集标本。 2.革兰染色直接镜检为G-小杆菌。 3.初次分离对营养要求较高,需要半胱氨酸和组氨酸等,并产生过多的脂肪酸可抑制生长,因此应加入15%-25%血、活性炭吸附多余的脂肪酸;2—3天可形成细小光滑、灰色不透明的露滴状菌落,并有狭窄的溶血环。
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4.抗原检测: (1)以荧光标记抗体检测菌体,外周呈 绿色荧光,中心暗的球杆菌为阳性。 (2)可用 ELISA的方法测特异性脂多糖 抗原。 5.核酸检测: 检测百日咳鲍特菌的DNA, 有高度特异性。
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(五)临床治疗 首选红霉素类;次选氨曲南及磺胺增效剂(SMZ-TMP),对青霉素不敏感。
该菌感染的控制以预防接种为主,小于6个月的婴儿患病时应注意并发肺炎、脑膜炎及呼吸衰竭。
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第二节 人兽共患病原菌 大多数引起动物感染的微生物,不能引起人类感染。但有少数微生物既能感染动物也能感染人,被称为人兽共患微生物。包括病毒、细菌、螺旋体、立克次体等。 人兽共患炭疽细菌包括芽胞杆菌、鼠疫耶尔森菌、布鲁菌属、巴斯德菌届、弗朗西斯菌属等。
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一、布鲁菌属 包括羊布鲁菌(又称马尔他布鲁菌)、牛 布鲁菌(又称流产布鲁菌)、猪布鲁菌、绵 羊布鲁菌、狗布鲁菌、森林鼠布鲁菌等6
个种,但经DNA-DNA杂交研究只有一种, 其他均为变种。 DNA G+C mol%为56~58。
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(一)临床意义 可通过皮肤、呼吸道、消化道引起感染,以长期发热多汗、关节痛及全身乏力疼痛为特征。多见于牧区,城市散发,发病季节以夏秋较多。传染源为病兽,病菌存在于乳液、阴道分泌物、胎儿及羊水内,引起动物死胎及流产。在淋巴结、脾、骨髓等处繁殖,并多次进入血液引起菌血症,有各种类型发热,常见波状热。
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布鲁菌为胞内寄生菌,故以细胞免疫为主,它有较强的内毒素,能产生透明质酸酶和过氧化氢酶有关。有利于细菌生长繁殖和扩散,致病性还与迟发性超敏反应有关。但特异性IgM和lgG可发挥免疫调节作用。布鲁菌各菌种或生物型的抗体有交叉保护作用,其初期的免疫为有菌免疫,但随着免疫力不断增强,可转变为无菌免疫。
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(二)微生物特性 G-短小球杆菌,无动力无芽胞、光滑型有微荚膜,家畜的胎盘、绒毛膜中都含有赤癣醇,为本菌的生长因子;所以这些部位对感染敏感。
为需氧菌,营养要求高,初次分离时需5~10%的C02及硫胺、烟酸、生物素等物质,最适生长温度为35℃,最适pH 6.7。生长缓慢,初代分离更为迟缓。 其抗原结构复杂,主要有A和M抗原,羊布鲁菌A:M约为1:20;牛布鲁菌A:M约为20:1。
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(三)微生物检验 1.采集血液、骨髓、尿液或流产胎儿的淋 巴、肝脾肺组织,及流产的子宫分泌物 等标本。
2.在血琼脂平板培养5~7天可形成微小、 灰色不溶血菌落。延长培养≥30天才能 报告阴性 3.生化鉴定及染料抑制试验:可利用葡萄 糖等糖类,但产酸量少。
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各种布鲁菌的生化鉴定 菌 种 氧化酶 /触酶 葡萄糖分 解 精氨酸 脱 羧 硫廑 40μg 复红 20μg 羊布鲁菌 + - 牛布鲁菌
菌 种 氧化酶 /触酶 葡萄糖分 解 精氨酸 脱 羧 硫廑 40μg 复红 20μg 羊布鲁菌 + - 牛布鲁菌 猪布鲁菌 绵羊布鲁菌 +/- 犬布鲁菌
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4.药物敏感试验 临床治疗首选强力霉素,次选磺胺增效剂(TMP/SMZ);由于病程长,用药时间需4—6周。药敏试验可不作为临床常规。
5.抗体检测 感染后2周血中开始出现不完全抗体,需用抗人球蛋白检测,且在病程进展中不断的升高。发病3周后出现IgG抗体,其特异性较高。
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6.结果解释 由于培养的营养苛求而且时间长,应以血 清学诊断为主。从患者的标本中分离出布鲁 菌即为确诊的依据。应尽早抽血或骨髓作分 离培养。 血清学检查是常用的诊断方法,症状出现 后,抗体效价上升,持续时间很长;若抗体 效价再次升高,可能是重复感染或复发。补 体结合试验特异性强,诊断价值较高。
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二、巴斯德菌属 常寄生在上呼吸道,与人类疾病相关的有 多杀巴斯德菌、嗜肺巴斯德菌、溶血巴斯德 菌、犬巴斯德菌等。其中常见的为多杀巴斯
德菌,为模式菌种。DNA G+Cmol%为 40~45。 引起动物败血病、鸡霍乱等,人类感染多 是通过被狗、猫咬伤或抓伤所致。常引起肺 部感染、菌血症、脑膜炎、脑脓肿及伤口感 染,近年来,家养宠物增多,所以该病较为 多见。
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G-球杆菌,无动力无芽胞,触酶、氧化酶阳性。为需氧或兼性厌氧菌,生长温度为35℃,在血培养基上生长良好。18—20h,可形成白色不溶血,直径0.5~1.5mm的小菌落,发酵葡萄糖产酸不产气不发酵乳糖,能还原硝酸盐。 首选治疗药物是阿莫西林加棒酸:如β-内酰胺酶类抗生素过敏,可选环丙沙星、氟哌酸或磺胺类。
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三、弗朗西斯菌属 本菌属有土拉弗朗西斯菌和新凶手弗朗西 斯菌等2个种。 土拉弗朗西斯菌是引起土拉热病(野兔热)
的病原菌,流行于野兔和啮齿动物中,人因摄 入污染食物和水可经消化道感染,吸入污染空 气经呼吸道感染,或因昆虫叮咬而感染。 其DNA的G+Cmol%为36 — 38。
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本菌属甲类菌种,分离鉴定只能在专门实验室进行,应注意安全,防止交叉感染,工作人员应接受预防接种。
为G-小杆菌,无芽胞、鞭毛和荚膜。为需氧菌,用卵黄或胱氨酸血培养基分离,最适生长温度为35℃,降低温度则生长缓慢。 水中可存活1—2个月;对热、消毒剂敏感。与鼠疫耶尔森菌有共同抗原和交叉反应。
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采用血清凝集试验检测抗体,发病一周后 即出现血凝抗体,在病程中抗体效价4倍增长 或单价血清效价1:160才可诊断。 该菌对氨基糖甙类抗生素敏感,首选链霉 素或庆大霉素,此外还可选四环素类药物均 有较高的治愈率,抗生素敏感试验可不作为 常规试验。
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