赛增®水剂 —更安全的rhGH.

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1 赛增®水剂 —更安全的rhGH

2 生物制剂早期只能选择冻干粉剂剂型 生物制剂的主要成分是蛋白质，分子量大、结构复杂、稳定性差（温度、存放时间、有机溶剂……）。
水针剂型研发的挑战：蛋白质药物在水溶液中会发生氧化、脱氨和聚合反应，导致生物活性丧失。要使蛋白质在水溶液中稳定存在近两年的时间是一个巨大的挑战。 多肽链中氨基酸的排列顺序 肽链折叠， 形成局部空间构象 多肽链的三维构象 多亚基蛋白质的 三维构象 一级结构 二级结构 三级结构 四级结构

3 生长激素粉剂使用过程中存在污染 玻璃碎屑污染 注射环境污染 安瓿瓶打开过程中不可避免带来多种污染
安瓿瓶颈割锯掰开时，由于玻璃的脆性所产生的细小微粒会因瓶内负压而吸入安瓿内造成污染 注射环境污染 空气中含有大量尘埃、细菌、纤维、微生物，易进入已掰开的安瓿中，造成污染 1、渠敬香.静脉输液微粒污染的防范.中国保健.医学研究版.chinese Health Care （2008） 3

4 药物使用过程中的污染影响患者安全 进入重要脏器1 引起肉芽肿1 热原反应2
-0.5~2.0μm的微粒可进入脾脏，0.1~0.5μm的 可进入肝脏；0.01~0.1μm的可进入骨髓；15~25μm的可沉附在肺细胞壁毛细血管上 引起肉芽肿1 -由于人体最小毛细管直径4~7μm，微粒不能在体内代谢，因此较大的微粒能引起局部毛细血管堵塞或供血不足，组织缺氧，产生静脉炎，水肿和肉芽肿等 热原反应2 -引起患者出现发热、寒战、恶心、呼吸困难等症状 不溶性微粒在体内不能代谢，潜伏期很长，可长达10~20年才出现症状1 1.于芳.输液中不溶性微粒及其对人体的危害.职业与健康.2002年12月第18卷第12期 2.尹三凤.护理操作引起输液微粒问题的探讨.护理实践与研究.2010年第7卷第7期

5 粉剂到水剂的演变是国际发展趋势 水针剂是生物制剂最重要的发展方向之一。
已上市的蛋白水针剂包括：胰岛素、人生长激素、促红细胞生成素 、粒细胞集落刺激因子 、抗CD20单克隆抗体等 生长激素从粉剂到水剂的演变同样是国际发展趋势 Genentech（罗氏） Novo Nordisk（诺和诺德） 金赛药业 1985年 Protropin：192AA rhGH粉剂，2004年退市 1993年 Nutropin：191AA rhGH粉剂，已退市 1995年 Nutropin AQ：191AA rhGH水剂 1999年 Nutropin Depot:微球包裹长效粉剂，2004年退市 1995年 Norditropin ：191AA rhGH粉剂，已退市 2000年 Norditropin ：191AA rhGH水剂 1998年 191AA rhGH粉剂（赛增） 2005年 191AA rhGH水剂（赛增） 2014年 PEG化长效水剂（金赛增）

6 冷冻干燥过程导致蛋白质变性最终影响疗效和安全性
低温应力 浓度效应 相分离 脱水应力 疗效、安全性

7 蛋白冻干过程破坏了二级结构 左图为傅里叶转换红外光谱显示的各种蛋白冷冻干燥之后二级结构的变化百分比，包括α-螺旋和β-折叠变化，
2017/3/18 β-折叠变化百分比 左图为傅里叶转换红外光谱显示的各种蛋白冷冻干燥之后二级结构的变化百分比，包括α-螺旋和β-折叠变化， 可以看出，对于各种蛋白，冷冻干燥都会导致其二级结构发生不同程度的改变 α-螺旋变化百分比 a-牛胰蛋白酶抑制剂 b-肌血球素 c-重组人血白蛋白 d-马心脏细胞色素C e-金枪鱼心脏细胞色素C f-核糖核酸酶A g-胰凝乳蛋白酶原 h-胰岛素 Kai Griebenow And Alexander M. Klibanov. Proceedings Of The National Academy Of Science

8 蛋白冷冻过程破坏高级结构 2017/3/18 图示表示了不同的冷冻温度对泛素的天然结构的破坏程度，绿色表示保留了天然结构，红色和蓝色表示其发生了不同于天然结构的变化。可以看出，低温对于蛋白的天然结构是有破坏的，而在冷冻干燥过程中，温度往往会达到甚至低于-30℃ Charles R Babu, Vincent J Hilser & A Joshua Wand. Nature structural & molecule biology

9 蛋白冻干过程破坏蛋白完整性 左图为牛免疫球蛋白SEC-HPLC图谱，其中： A 未经过处理（天然结构） B 经过冷冻和解冻
2017/3/18 左图为牛免疫球蛋白SEC-HPLC图谱，其中： A 未经过处理（天然结构） B 经过冷冻和解冻 C 冻干过程中缓慢降温（2℃/min） D 冻干过程中迅速降温（液氮） 从图中可以明显看出，经过冷冻或者冻干过程后，蛋白的主峰都出现了不同程度的下降，而杂质峰也出现了。和天然结构差异发生巨大改变。 Jeanne-marie Sarciaux, Said Mansour, Michael J. Hageman, And Steven L. Nail. Journal of Pharmaceutical Sciences

10 水针剂型保持蛋白质的天然结构 蛋白水相稳定技术的应用，解决了生长激素在溶液中空间结构不稳定，易脱氨、易氧化、易聚合的难题
傅里叶红外光谱试验证据显示：水针剂型可以保持蛋白质的天然结构（天然α螺旋比例为60%） 水剂 粉剂 α螺旋比例减少到42%±2%，与天然结构不一致 α螺旋比例为57%±3%，与天然结构一致 傅里叶红外光谱 图 β-折叠 α-螺旋 （水剂） （粉剂）

11 rhGH水剂均不产生抗体 1996 Nutropin AQ 液体制剂 2005 赛增AQ 亚洲第一支注射笔装生长激素液体制剂 剂型 产品
抗体发生率 水剂 Nutropin AQ GHD:0/107 0% CRI:0/125 TS:0/112 ISS:0/117 2005 赛增AQ 亚洲第一支注射笔装生长激素液体制剂 剂型 产品 抗体发生率 水剂 赛增 AQ 0/111 0% 1.数据来自国外厂家的注册临床试验 2.数据来自金赛PEG化长效II和III临床试验

12 FDA对新批准内分泌生物药品抗体零容忍 ——国际生长激素学会主席美国Cohen教授 单克隆药物发展历程表明严格控制抗体免疫原性业界共识
细胞因子类药物通过PEG修饰，显著降低了临床免疫原性 生长激素通过192个氨基酸发展至191个氨基酸、由粉剂发展至水剂，实现了临床抗药抗体零检出的突破 FDA对新批准内分泌生物药品抗体零容忍 ——国际生长激素学会主席美国Cohen教授

13 《生物来源治疗性蛋白质药物免疫原性评价指导原则》
免疫原性是评价生物制品安全性的关键因素1 《生物来源治疗性蛋白质药物免疫原性评价指导原则》 儿童是抗体发生的高危人群，免疫复合物的危害可能严重到威胁生命。 生物来源治疗性蛋白质药物可能会导致临床免疫反应，应以风险管理为基础，收集有效性和安全性数据以充分了解免疫反应的临床后果。 欧盟药品审评中心•2007 免疫原性作为评价生物制品安全性的关键因素也越来越多的得到国际医药领域的普遍关注。 欧盟药品审评中心就规定，对于…………。随着对药物安全性要求的不断提高，对于免疫原性的要求也会越来越明确和严格。 同样，对于生长激素药物的免疫原性需要长期评估。 尸源性的GH使用了27年退市，包涵体技术的GH也使用了近20年，一方面由于其安全事件的发生率不高，另一方面也是由于技术的限制，没有替代产品的出现。 而药物作为特殊的商品，我们的目的绝对不能用回顾性的评价来考虑其安全性，因为任何一起医患事件都会给患者带来身体的伤害甚至导致死亡，我们应尽量通过技术的发展来规避可能发生的危险，从源头来控制其发生的可能性。水剂和PEG化长效制剂正是遵循这样一种观念来开发的。 …………，不是说生长激素粉剂就是不安全的，而是只能说基于目前的使用情况来看是安全的，但粉剂无法规避抗体带来的安全风险，10几年的使用历史也不够全面的进行评价，需要长期评估。 1、 GUIDELINE ON IMMUNOGENICITY ASSESSMENT OF BIOTECHNOLOGY-DERIVED THERAPEUTIC PROTEINS.Doc. Ref. EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006,London, 24 January 2007.

14 抗体的产生带来的安全隐患 长期影响 短期影响 迟发型过敏反应和免疫复合物 局部及全身的抗原抗体反应1 及自身免疫2 …… …… 瘙痒
免疫复合物型肾小球肾炎 血清病 类风湿性关节炎 …… 短期影响 局部及全身的抗原抗体反应1 瘙痒 红肿 全身过敏反应 …… 1、李双庆等.国产rhGH的免疫原性及其对临床疗效的影响.华西大学报,2002;33(1)：77~79. 2、 GUIDELINE ON IMMUNOGENICITY ASSESSMENT OF BIOTECHNOLOGY-DERIVED THERAPEUTIC PROTEINS.Doc. Ref. EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006,London, 24 January 2007.

15 总 结 rhGH粉剂使用中存在安全性隐患 rhGH从粉剂到水剂是国际发展趋势 rhGH从粉剂生产的冻干工艺会影响蛋白的稳定性
总 结 rhGH粉剂使用中存在安全性隐患 rhGH从粉剂到水剂是国际发展趋势 rhGH从粉剂生产的冻干工艺会影响蛋白的稳定性 rhGH水剂保持蛋白天然结构，抗体零检出 抗体的检出影响药物安全性 rhGH水剂较粉剂更安全

16 Thanks!