第十次实验 抗生素抗菌谱及微生物的耐药性的测定

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1 第十次实验 抗生素抗菌谱及微生物的耐药性的测定
第十次实验 抗生素抗菌谱及微生物的耐药性的测定

2 实验(一) 抗生素抗菌谱的测定 实验目的： 学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗菌谱。

3 实验原理 抗生素——是一类由微生物或其它生物生命活动中合成的次级代谢产物或其人工衍生物，在低浓度时就能抑制或干扰它种生物（包括病原菌、病毒、癌细胞等）的生命活动，可作为优良的化学治疗剂。 各种抗生素有其不同的制菌范围，即抗菌谱。如青霉素一般对G+细菌有抗性；链霉素以抗G-为主；庆大霉素、头孢霉素兼抗G+、G-细菌；氯霉素、四环素能同时抗G+、G-细菌及立克次氏体和衣原体，称为广谱抗生素。

4 抗菌谱

5 不同抗生素抑制细菌生长的机制不同， 如青霉素抑制细菌细胞壁的合成， 四环素抑制细菌蛋白质的合成。 抗生素 作用机制 作用后果 杆菌肽
氨苄青霉素 头孢霉素 抑制细胞壁的合成 阻止肽聚糖的合成 短杆菌肽 干扰细胞膜功能 细胞内物质外漏 卡拉霉素 四环素 壮观霉素 庆大霉素 链霉素 抑制蛋白质合成，与30s核糖体结合 促进错译，抑制肽链延伸 灰黄霉素 抑制DNA的合成 抑制有丝分裂中的纺锤体功能 丝裂霉素 抑制DNA的复制 抑制复制后的分离 放线菌素D 抑制RNA的转录 阻止DNA依赖的RNA合成 利福霉素 抑制RNA的合成，RNA聚合酶结合 阻止RNA的合成 不同抗生素抑制细菌生长的机制不同， 如青霉素抑制细菌细胞壁的合成， 四环素抑制细菌蛋白质的合成。

6 实验材料 菌种： 培养基： 供试抗生素： 设备与用具： 各种不同来源的细菌。 牛肉膏蛋白胨培养基 卡那霉素（母液浓度50mg/mL，溶于水)
恒温培养箱、接种环、培养皿。

7 实验步骤 1 倒（牛肉膏蛋白胨＋卡那霉素(终浓度50μg/mL)）平板 2 将平板(皿底）划分为6等份，每一等份内标明一种细菌的名称；
3 用接种环分别接种不用来源的细菌至相应的区域 4 将划好线的细菌平板，置37℃倒置培养24h-48h。 5 记录细菌的生长情况，根据细菌的生长情况，可初步确定卡那霉素的抗菌谱。

8 实验结果 记录各种不同来源的细菌的生长情况

9 实验(二) 微生物耐药性的测定 实验目的： 学习微生物耐药性的测定方法，了解微生物对抗生素耐药性产生的原因及对策

10 实验原理 耐药性(antibiotic resistance)——即抗药性,指微生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学治疗药物作用的耐受性。耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。

11 耐药性产生的原因 1、产生一种使药物失去活性的酶； 2、把药物作用的靶位加以修饰和改变； 3、形成“救护”途径 4、使药物不能透过细胞膜；
5、通过主动外排系统把进入细胞内的药物泵出细胞外；

12 实验材料 菌种： 金黄色葡萄球菌。 培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基 供试抗生素：
庆大霉素、卡那霉素、四环素、氨苄青霉素、壮观霉素和链霉素、无菌水 设备与用具： 恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养皿。

13 滤纸片法测定微生物的耐药性 所需浓度抗生素溶液配制 A 氨苄青霉素（50μg/mL) ， B 卡那霉素（50μg/mL) ，
C 四环素（50μg/mL) ， D 庆大霉素（50μg/mL) ， E 链霉素（50μg/mL) ， F 壮观霉素(50μg/mL) ，

14 实验步骤 1 倒牛肉膏蛋白胨平板 2 取0.2ml菌液加入平板中，涂布均匀。
3 将平板(皿底）划分为6等份，每一等份内标明一种抗生素的名称；分别将浸有各种抗生素的小圆滤纸片贴在平板的每一等份中。 4 将贴好滤纸片的含菌平板，置37℃倒置培养24-48h。 5 测量并记录抑菌圈的直径，抑(杀)菌圈的大小，能够反映抗生素抑(杀)菌能力的大小；根据其直径的大小，可初步确定细菌对各种抗生素的耐药性情况(或敏感性情况)(自带尺子）

15 ①氨苄青霉素②卡那霉素③四环素④庆大霉素⑤链霉素 ⑥壮观霉素⑦无菌水

16 实验结果 抗生素 抑（杀）菌圈直径/mm 氨苄青霉素 庆大霉素 卡那霉素 链霉素 四环素 壮观霉素

17 思 考 题 1、什么叫抗生素？什么是耐药性？ 2、微生物产生耐药性的原因有哪些？