第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析.

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1 第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析

2 本类药物多数具有芳酸基本结构，即芳基取代羧酸结构。根据芳基和羧酸的取代位置及芳基上的取代基的不同，可分为水杨酸类、邻氨基苯甲酸类、邻氨基苯乙酸、芳基丙酸、吲哚乙酸及苯并噻嗪甲酸等六类。 结构特点：游离羧基和苯环、酯基等。

3 第一节、典型芳酸类非甾体抗炎药物结构与性质
一、典型药物与结构特点 C O H 3 C O H 阿司匹林 双氯芬酸钠 水杨酸 N O C H 3 Cl M e 布洛芬 吲哚美辛 对乙酰氨基酚

4 二、主要性质 1、酸性：游离羧基pka=3～6，芳酸酸性强；脂肪酸较弱 2、水解性：酯基、酰胺基 3、吸收光谱特性：含共轭体系 4、基团或元素特性

5 第二节、鉴别试验 （一）与三氯化铁反应 1、水杨酸及其盐 反应条件：弱酸性（pH46） 反应现象：紫堇色

6 2、阿司匹林需加热水解后与FeCl3反应 方法：取本品0.1g 煮沸放冷 加水10ml 加FeCl3 1d 显紫堇色

7 3、酚羟基反应 药物中若具有酚羟基结构，可与FeCl3作用显蓝紫色。 如对乙酰氨基酚：取药物适量加水溶解，滴加三氯化铁试液，即显蓝紫色。

8 二、缩合反应 二苯甲酮结构，在酸性条件下与二硝基苯肼缩合生成橙色偶氮化合物。 +

9 三、重氮化-偶合反应 对氨基水杨酸钠具芳伯氨基结构，在酸性溶液中，与亚硝酸钠液进行重氮化反应，生成的重氮盐与碱性β-萘酚偶合产生橙红色沉淀。

10 四、氧化反应 甲酚那酸遇硫酸显黄色 五、水解反应：阿司匹林与碳酸钠试液反应 反应现象：水杨酸白色沉淀析出，并产生醋酸的臭气

11 六、特征元素的反应 1、氯元素的反应：硝酸银白色沉淀 2、硫元素的反应：分解产生硫化氢，遇醋酸铅黑色沉淀 七、光谱法 1、紫外吸收光谱：max、 min、吸光度法、吸光度比值法 2、红外吸收光谱法 八、色谱法 1、薄层色谱法 2、高效液相色谱法

12 第三节、特殊杂质及其检查方法 （一） 阿司匹林（ASA）合成工艺：

13 （二）阿司匹林中游离水杨酸与有关物质检查 1、溶液的澄清度：
（1）杂质来源：①原料②合成工艺中由副反应生成的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等。 （2）检查原理：利用药物与杂质在溶解行为上的差异进行检查 （3）检查方法： 取供试品0.5g，加温热至约45℃的碳酸钠试液10ml 溶解后，溶液应澄清。

14 2、游离水杨酸（SA）----特殊杂质 （1）来源：①生产过程乙酰化不完全（未反应SA） ②贮存不当水解而产生的SA
（2）检查原理(中国药典2005方法)： 阿司匹林+硫酸铁铵 不反应 水杨酸+硫酸铁铵 紫堇色 与一定量水杨酸对照液生成的色泽比较不得更深。 2010版方法：HPLC法 3、易炭化物 4、有关物质：HPLC法

15 二、甲芬那酸中2,3-二甲基苯胺及有关物质的检查 方法：GC法，聚乙二醇为固定相，FID检测器 三、二氟尼柳中有关物质的检查 方法：有关物质A-正相TLC法；有关物质B-反相HPLC法 四：萘普生中6-甲氧基-2-萘乙酮等有关物质的检查 方法：HPLC法 五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺的检查

16 第四节、含量测定 一、酸碱滴定法 （一）、直接滴定法：阿司匹林、布洛芬、萘普生等 （1）：原理利用游离羧基的酸性，以标准碱滴定液直接滴定。 （2）：方法： 滴定液：NaOH(0.1mol/L) 溶剂：中性乙醇 指示液：酚酞

17 3）注意事项： A 采用中性乙醇做溶剂的目的： ①易于溶解样品 ②防止本品水解 B 滴定过程中不断振摇目的：防止局部碱度过大而促使其水解。 C 采用酚酞作指示剂：药物是弱酸，用强碱滴定时，化学计量点偏碱性，故选用在碱性区域变色的酚酞。

18 （二）、剩余量滴定法 美洛昔康含有与羰基共轭的烯醇式羟基，具有羧酸性质，显酸性。可用氢氧化钠滴定。但由于溶解度的限制需使用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，用盐酸滴定液回滴剩余的碱。 需做空白

19 （三）、水解后剩余滴定法 1、水解后剩余量滴定法 酯结构在碱性溶液中水解，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热使药物水解，过量氢氧化钠用硫酸滴定液回滴。需作空白。

20 2、两步滴定法 （1）适用范围：阿司匹林片剂 采用本法原因：①消除片剂中稳定剂干扰（枸橼酸或酒石酸） ②消除水解产物干扰：阿司匹林片在贮存过程水解产生水杨酸和醋酸 （2）测定：第一步：中和 精密称取片粉 酚酞指示剂 迅速滴至粉红色 加中性乙醇溶解 NaOH滴定液 酒石酸等稳定剂、 SA、ASA均成为相应钠盐

21 第二步：水解 中和后供试品液 水浴加热 加定量过量NaOH(0. 1mol/l) 第三步：测定 用H2SO4滴定液 (0
第二步：水解 中和后供试品液 水浴加热 加定量过量NaOH(0.1mol/l) 第三步：测定 用H2SO4滴定液 (0.05mol/l)滴定剩余的碱。 滴定结果用空白试验校正 每1ml H2SO4滴定液 (0.05mol/l)滴定液相当于18.02mg的C9H8O4

22 实际测得含量 ×100％ 标示量 VFT平均片重 ×100％ 称样量标示量 （3）含量计算： 标示量:表示制剂中各成分含量的理论值。
用标示量的百分值来控制制剂含量。 公式通则为：标示量％＝ = 实际测得含量 ×100％ 标示量 VFT平均片重 ×100％ 称样量标示量

23 例：取标示量为0. 3g的阿司匹林片10片，称出总重为3. 5840g，研细后称取0
例：取标示量为0.3g的阿司匹林片10片，称出总重为3.5840g，研细后称取0.3484g，按药典方法用两步滴定法测定其含量，消耗硫酸滴定液（ mol/l）23.84ml，空白试验消耗该硫酸滴定液39.88ml，求阿司匹林的含量为标示量的多少？（99.41%）

24 （四）、非水溶液滴定法 吡罗昔康具有吡啶环显碱性，可在冰醋酸中用高氯酸滴定液滴定，结晶紫为指示剂。

25 二、紫外-可见紫外分光光度法 （一）直接紫外-可见紫外分光光度法 部分本类药物制剂采用此法。溶解过滤后对照法测定。 （二）、柱分配－紫外分光光度法 适用：片剂、胶囊、栓剂 特点：能分离杂质，同时测定ASA、SA （1）SA的限量测定 色谱柱用硅藻土填充；固定相：三氯化铁－尿素；洗脱液：氯仿，乙醚。 在λmax=306nm测定吸收度，A样（SA) ＜ A标（SA) （2）ASA的测定 固定相：碳酸氢钠；洗脱液：氯仿 λmax=280nm测定吸收度，A样（ASA+SA) -A样（SA)

26 三、高效液相色谱法 ChP2010收载的典型芳酸类非甾体抗炎药物制剂大多采用离子抑制-反相HPLC法测定，外标法计算含量。

27 第五节 体内药物分析 一、血浆中阿司匹林与水杨酸的HPLC法测定 小剂量ASA血浆中ASA及SA的同时测定，液质联用法
液质联用仪由以下几部分组成 数据及供电系统 ━━━━┳━━━━━╋━━━━━━┓ 进样系统 离子源 质量分析器 检测器 ┗━━━━━╋━━━━━━┛ 真空系统

28 LC/MS 系统构成 质量分析器 检测离子 离子源 + 离子识别 离子检测 样品与溶剂脱 离及电离 EI ESI APCI LC/MS 接口
HPLC 数据系统 质谱 离子识别 Quadrapole Time of Flight Fourier Transform … 离子检测 -

29 三级(重）四极杆质谱仪 液相色谱和质谱串联，最重要的就是接口问题。 液相里面的流动相是液体，液体必须转换为气体才可能进行离子化。
从液态到气态，体积上要增大1000倍， 这就要求流动相能够迅速地完全气化 这样，一般液相色谱所用到的添加剂，缓冲液或者是离子对试剂必须也是可以气化的 气化的这部分溶剂就可以进入MS的检测了

30 LC - MS/MS法定量测定人血浆中阿司匹林及其代谢产物水杨酸

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32 方法的定量下限(LOQ)为25 ng/mL, 灵敏度较高, 其人血浆中阿司匹林和水杨酸在25～10 000ng/mL范围内, 其浓度与响应值之间具有良好的相关性, 全部标准曲线的相关系数( r)均在0.990～1.000之间, 方法的日内和日间精密度、准确度符合要求。