免 疫 学 实 验 技 术.

Presentation on theme: "免 疫 学 实 验 技 术."— Presentation transcript:

1 免 疫 学 实 验 技 术

2 抗原抗体反应 特点 可逆性 最适比例 特异性

3 沉淀反应 凝聚反应 中和反应 补体参与的 反应 分 类

4 实验一 沉淀反应 沉淀反应（Precipitation test）是将可溶性抗原（如组织浸出液、细菌毒素、或菌体溶解物）与相应的抗体混合，在电解质存在时，可出现肉眼可见的反应，称为沉淀反应，沉淀反应按其形式归纳起来可以分为三类：环状沉淀试验、絮状沉淀试验和凝胶扩散试验。

5 一、环状沉淀试验 （Ring Precipitation test）
在细狭的小管中，将稀释的抗原加在一定浓度的特异性抗血清表面，在其交界的液面上可出现乳白色的沉淀环。

6 二、凝胶扩散试验 （gel diffusion test）
凝胶扩散试验是利用可溶性抗原与抗体在半固体琼脂内进行扩散，当抗原抗体相对 应，且两者比例合适时，就出现白色沉淀线，称为阳性反应。本试验可在试管内、平皿及玻片上进行操作。

7 （—）单相琼脂扩散试验 （Single radial immunodiffusion test）
单免疫扩散试验是一种定量试验，将抗体混合于琼脂内，倾注于玻片或平皿上，凝固后在琼脂上打孔，再将抗原标本加入孔内，经过一定的时间，在孔的周围出现抗原抗体复合物形成的沉淀环，环的大小与抗原含量和扩散时间相关。用不同的浓度的抗原制成标准曲线，则未知标本中的抗原含量即可从准标曲线中求出。

8 图1—1 单向免疫扩散试验沉淀环模式图 抗体 抗原 抗原抗体沉淀环

9 (二)双相琼脂扩散试验 （double immunodiffusion test）
双免疫扩散试验的基本原理是抗原抗体都在各自的凝胶孔中扩散，在两孔之间的比 例适当处抗原抗体相遇形成淀沉线

10 Ag Ag Ab Ab

11 （四）火箭电泳 (Rocket electrophoresis)

12 （三）对流免疫电泳 （Counter immunoelectrophoresis、CIE）
对流免疫电泳是双向扩散与电泳技术相结合的一种方法，具有方法简便，敏感性 高，结果迅速等优点。它是在免疫反应基础上通以电流，使抗原、抗体在电场中定向移动，限制了双免疫扩散时抗原、抗体多方向自由扩散的倾向。因此提高该试验的敏感度，且在短时间内形成沉淀线

13 Ab Ag Ag + ——

14 （五）免疫电泳（1mmunoelectrophoresis）
免疫电泳是在凝胶电泳与凝胶扩散试验的基础上发展起来的一项免疫化学技术，可鉴定免疫球蛋白及分析各种抗原性物质。

15 实验二 凝集反应 凝集反应（Agglutination reaction）是某些病原微生物或红细胞等颗粒表面抗原与相应抗体，在有适量的电解质存在下，经过一定的时间，出现肉眼可见的凝集小块称为凝集反应。参加的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。

16 凝集反应所用的抗原（凝集原）大多数为颗粒性抗原，如微生物（细菌、螺旋体等）和红细胞，也可采用吸附了可溶性抗原的载体颗粒（主要有聚乙烯乳胶颗粒，红细胞等）作为抗原。颗粒性抗原与抗体直接结合出现的凝集现象，称为直接凝集反应，而后者，当抗原与相应抗体结合后，载体颗粒被动凝集成团，称为间接被动凝集反应或间接凝集反应。后来又建立了将抗体分子吸附在载体颗粒上，用于检测可溶性抗原的方法，这种方法称为反向间接凝集试验。

17 一 直接凝集反应 直接凝集反应（Directive agglutination reaction）是颗粒性抗原与相应的抗体在适量的电解质存在情况下所出现的凝集现象。实验方法可又玻片和试管法两种，前者是一种定性实验，后者是定量实验。实验室经常用这一反应来进行血型鉴定和协助诊断某些传染病，如诊断伤寒、付伤寒的肥达氏反应、诊断斑疹伤寒、恙虫热的外斐氏反应等都属这一反应。

18 二 间接凝集反应 间接凝集反应（1ndirect glutination reaction）也称为被动凝集反应，是将可溶性抗原，先吸附于一定大小，与免疫无关的载体颗粒，然后再与相应的抗体作用，并在电解质存在的适宜条件下，出现凝集现象，称为间接凝集反应。如果将可溶性抗原吸附于红细胞（致敏红细胞），则此反应称为间接血球凝集反应（简称间接血凝）。如果先将可溶性抗原与相应抗体混合，隔一定时间后，加入抗原致敏颗粒则因抗体己被中和，不再出现凝集现象，则称为间接凝集抑制。

19 实验三 补体参与的反应 补体通过经典途径或旁路途径被活化后，可在靶细胞上形成膜攻击复合物，造成靶 细胞溶解。在活化过程中补体的裂解产物还表现出很多生物学活性，如引起炎症反应， 调理作用，免疫调节作用等。

20 一、免疫溶血反应 用红细胞免疫异种动物后，可获得IgG类的红细胞抗体。此类抗体与红细胞结合后， 只出现凝集现象，但在补体的参与下，可使红细胞发生溶血，因而也称之为溶血素。因红细胞表面抗原与抗体结合，再有补体参加而引起的细胞溶解，称为免疫溶血反应。

21 二、血清总补体溶血活性（CH50）测定 本试验原理是用绵羊红细胞（SRBC），与与相应抗体（溶血素）结合后，成为致敏 SRBC，可激活待检血清中补体导致SRBC溶血。其溶血串与血清中补体的含量和功能有关。C1～9任何一种成分缺陷也可使CH50降低。由于补体含量与溶血程度之间呈正相关，但不是直线关系，而呈S曲线关系，故通常取反应曲线中间部位即50％溶血为判定终点。

22 实验四 免疫标记技术 1.Coons 1941年首创的免疫荧光技术（immunofluorescence technic）
实验四 免疫标记技术 1.Coons 1941年首创的免疫荧光技术（immunofluorescence technic） 2.yalow和Berson 1956年发展的放射免疫技术（radioimmunoassay，RIA） 3.Engvall和Perimanon及Weemen和Schurs于1966年发展的免疫酶技术（immunoenzymetic technic）

23 ELISA的原理和类型 ELISA的类型

24 双抗体夹心法测抗原

25 双抗原夹心法测抗体

26 间接法测抗体

27