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第22章 呼吸道病毒 急性呼吸道感染中90%-95%是由病毒引起的。常见的呼吸道病毒有正黏病毒科中的流感病毒、副黏病毒科中的副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒以及腺病毒、风疹病毒、鼻病毒、冠状病毒和呼肠孤病毒等。
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呼吸道病毒引起的主要疾病 科 种 引起的主要疾病 正粘病毒 甲、乙、丙型流感病毒 流感 副粘病毒 副流感病毒1～4型 呼吸道合胞病毒
感冒、支气管炎 婴儿支气管炎、肺炎 麻疹病毒 麻疹 小RNA病毒 冠状病毒 腺病毒 腮腺炎病毒 鼻病毒 流行性腮腺炎 急性上感、感冒 同上 小儿肺炎
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第一节 流感病毒 Influenza virus
一、生物学性状 1.由核衣壳、包膜和刺突组成病毒体 （1）核衣壳:由核酸、核蛋白和PB1、PB2、PA等三种蛋白质组成。 ① 核蛋白（NP）呈螺旋对称排列。 ② PB1、PB2、PA等三种蛋白 质有型抗原特异性。
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③核酸为分节段的单股负链RNA，甲型、乙型有8节段，丙型有7个节段，复制中易发生高频重组变异，出现新的亚型。
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血凝素识别与吸附宿主细胞，为中和抗原，有亚型特异性 5 NP 核蛋白，具有型特异性 6 NA
节段 编码多肽 功 能 1 PB2 RNA聚合酶与RNA转录和复制有关 2 PB1 同上 3 PA 4 HA1、2 血凝素识别与吸附宿主细胞，为中和抗原，有亚型特异性 5 NP 核蛋白，具有型特异性 6 NA 神经氨酸酶，促进病毒释放为中和抗原，有亚型特异性 7 M1 M2 基质蛋白，与病毒组装有关 膜蛋白，形成膜通道，促进病毒释放 8 NS1、2 非结构蛋白，抑制mRNA转运
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（2）包膜：基质蛋白（M蛋白）有保护核心，
维持形态的作用，具有型抗原特异性， 与病毒出芽释放有关。 （3）刺突：存在于包膜上，有两种刺突。 血凝素（hemagglutinin,HA） 神经氨酸酶（neuraminidase,NA)
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抗原漂移（antigenic drift）：
变异幅度小，是连续变异，属于 亚型内变异，变异的机理是基因点突 变使HA或NA抗原结构发生小变异及人 群免疫力选择所造成。 抗原转变（antigenic shift）： 变异幅度大，属于质变，HA和NA 抗原结构发生变异形成新亚型，变异 机理是基因重组的结果。
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神经氨酸酶（NA) 1.具有酶活性,有利于成熟病毒芽生释放。 2.为亚型特异性抗原,其抗体能抑制病毒释放。
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血凝素 1.凝集鸡的红细胞,血凝现象是病毒增 殖指标,其亚单位HA1,HA2均有膜融 合作用。 2.血凝现象可被相应抗体抑制,此抗体
称血凝抑制抗体,能中和病毒,有保 护作用。可利用其鉴定病毒。 3.是甲型流感病毒区分亚型的依据。
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（二）分型与变异 蛋白）抗原性分为甲、乙、丙三型。 2.根据HA和NA抗原性将甲型分为 H1-3、N1-2亚型。
1.根据核蛋白（NP）和基质蛋白（M 蛋白）抗原性分为甲、乙、丙三型。 2.根据HA和NA抗原性将甲型分为 H1-3、N1-2亚型。
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甲型流感病毒抗原变异情况 原甲型 H1N1 1918-1957 西班牙 亚洲甲型 H2N2 1957-1968 亚洲
亚型名称 抗原结构 流行年代 最初流行地 原甲型 H1N 西班牙 亚洲甲型 H2N 亚洲 香港甲型 H3N 香港 香港甲型 H3N2、H1N 俄罗斯 与新甲型
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（三）培养 鸡胚羊膜腔培养。细胞培养用狗肾传代细胞。感染多种动物，如雪貂、小鼠、地鼠、豚鼠等。 血凝试验是病毒增长指标。 （四）抵抗力 弱,对热、消毒剂均敏感。
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二、致病性与免疫性 （一）致病性 1.传染源是患者； 2.传播途径为呼吸道； 3.呼吸道粘膜细胞为病毒靶细胞；
4.病毒在细胞间蔓延,不形成病毒血症； 5.病后对同型有1-2年短暂免疫力，以体液免疫为主。
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1.标本采集与处理 标本应于疾病早期采集鼻咽拭子为标 本，浸入无菌的pH 7．2的肉汤中，分 离时培上述充分振荡标本液，置4℃自
然沉淀5～10min，取上清液3ml，按每 毫升加青霉素250U、链霉素250μg用 于分离病毒和病毒抗原或RNA的检测。 血清学实验需取双份血清。
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2.标本电镜观察球形或丝状病毒颗粒， 球形直径80～120nm，用特异抗体进 行免疫电镜观察，提高检出率，敏 感性达50％。用荧光标记抗体，在 荧光显微镜下观察，敏感性为50％— 90％。 3.直接检测临床标本或细胞培养物中 的流感病毒抗原，试验敏感且特异 性高，能在30分钟内完成。
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4.标本直接核酸检测 32P标记的流感病毒特异性cDNA探针能 检出标本中的约lpg的流感病毒RNA。 用RT-PCR技术
丙三型 流感病毒及其亚型。
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5.分离培养 可选用传代狗肾细胞(MDCK)培养7-10 天，用红细胞吸附或血凝试验核查， 阳性者再用血凝抑制(HI)试验鉴定。
用鸡胚培养时，用10—11日龄的鸡胚 ，初次接种羊膜腔，传代选尿囊腔， 孵育2～3天，收获羊水做血凝试验。 动物接种以雪貂最为易感。
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6.鉴定 血凝试验能证实病毒的存在，甲、乙型流 感病毒能凝集人O型、鸡和豚鼠的红细胞 用特异性抗体做血凝抑制(H1)试验进行鉴 定和分型。
也可用中和试验进行分型和亚型。
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7.抗体检测 较常用的方法是血凝抑制HI和ELISA 法。敏感、特异，并与随后的亚型的 特异性检测有关。
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第二节 副粘病毒科 副粘病毒科与正粘病毒科的生物学性 状相似，为单负链RNA病毒，为150～ 300nm，核衣壳是螺旋对称，有包膜，
第二节 副粘病毒科 副粘病毒科与正粘病毒科的生物学性 状相似，为单负链RNA病毒，为150～ 300nm，核衣壳是螺旋对称，有包膜， 但包膜刺突与正粘病毒不同。包括副 粘病毒属、腮腺炎病毒属和麻疹病毒 属等三个属。
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一、呼吸道合胞病毒 (RSV) 是引起婴幼儿下呼吸道病最常见的病 毒。由于致培养细胞产生融合而得名。 儿童对RSV普遍易感，再感染率很高，
也很常见，老年人可引起严重肺炎， 并发展为成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。
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微生物特性 RSV为球形颗粒，直径80～350nm。为单 负链RNA，不分节段，螺旋对称，外被 包膜，刺突G能吸附宿主细胞，具血凝
作用。刺突P是融合蛋白，G与P又是保 护性抗原，可产生中和抗体。
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面鼠和非洲绿猴是较好的动物模型。 RSV能在多种传代细胞中增殖，引起 CPE及融合细胞。抵抗力不强，在pH 3．0被灭活，5．5最稳定。加温55℃5 ｍin被灭活。
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微生物检验 1)免疫荧光法：采用单克隆或多克隆高效 价抗体，免疫荧光检查抗原，敏感性高， 特异性可达85％-95％。
2)ELISA法：用于快速检测呼吸道分泌物中 的RSV抗原，敏感性和特异性均≥90%，可 检测存在于细胞表面的抗原，操作简便， 结果客观，能快速或自动化检测。
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3）病毒分离 能在Hela和HEP-2细胞内增胞有50％— 75％已长成单层时便可接种标本，维 持液中适度增加谷氨酰胺，于36℃5％
C02孵箱中培养。3—7天出现CPE，细胞 融合形成多核巨细胞，胞质内可见嗜 酸性包涵体。作IF试验进行鉴定。
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4)核酸检测 5）抗体检测 RT-PCR技术。用病人鼻咽抽吸物或从受染细 胞提取RNA，以F蛋白基因为PCR扩增的模板，
检测患者血清中抗RSV抗体(IgG、IgM)。需 双份血清有4倍增高可诊断。血清中IgM抗 体，可协助早期诊断。
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二、副流感病毒 1.属副粘病毒亚科，具有神经氨酸酶，引起上呼吸道感染，支气管炎、肺炎及哮喘等。
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2.形态结构类似流感病毒，呈球形略大，直径150～180nm，单负链RNA，不分节段，螺旋对称，有HN和P刺突，HN刺突具有血凝和神经氨酸酶活性， P刺突具有细胞融合和病毒穿人细胞并传播扩散的作用。可凝集鸡、豚鼠等红细胞，对鸡胚和多传代细胞都敏感。对豚鼠、雪貂等动物也敏感。 3.抵抗力弱，对热敏感，不耐酸，pH 3．0可灭活。标本-70℃保存。
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微生物检验 标本显微镜检查：观察到脱落细胞 胞质内嗜酸性包含体。 2) 直接检测脱落细胞中的副流感病毒 抗原，最常用间接免疫荧光法，
ELISA法，阳性者再用分型McAb进 行鉴定。
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3）病毒的分离 标本是鼻咽拭子，人 与猴原代肾细胞敏感，可用豚鼠红 细胞进行血吸附试验证实病毒存在。 用McAb进行型别鉴定。 4）抗体检测 取双份血清，用中和试 验、血凝抑制和EIJSA法，抗体效价 有4倍增高可认为PIV感染。
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三、腮腺炎病毒 1.属副粘病毒亚科、腮腺炎的病原体，还可 引起脑膜炎、睾丸炎、卵巢炎和胰腺炎等。
2.呈球形，直径 nm，单负链RNA，螺 旋对称，包膜表面有两种糖蛋白突起，一 种是含血凝素的神经氨酸酶(HN)，另一种 是融合蛋白(F)。 3.对猴肾和Hela细胞等敏感。抵抗力不强， 56℃30min、甲醛及有机溶剂均可灭活病毒。
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微生物检验 1．以免疫荧光法在标本或细胞培养中早 期发现病毒抗原，或用RT-PCR法检测 病毒RNA。 2．病毒分离与鉴定 早期收集唾液与脑
2．病毒分离与鉴定 早期收集唾液与脑 脊液用于病毒分离，用原代恒河猴或 人胚肾细胞。能产生典型CPE，细胞融 合及多核巨细胞。不出现CPE的可用豚 鼠红细胞进行吸附试验，再做吸附抑 制试验鉴定。
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3．抗体检测 用ELISA法和HI试验， 双份血清抗体效价有4倍升高，可 认为是感染。ELlSA法可检测IgM 抗体，与副流感病毒抗体无交叉反 应。
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四、麻疹病毒 属于副粘病毒科，缺乏神经氨酸酶。 只有一个血清型，是引起麻疹的病原 体。是儿童常见的急性呼吸道传染病。
人是自然宿主，普遍易感，易感者接 触后100％发病。在我国6个月至5岁儿 发病率最高，近年来由于疫苗应用， 流行强度减弱，发病年龄后移。
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重症和免疫功能低下患儿可出现并发 症肺炎，占死因的90％以上，远期并 发症是亚急性硬化性全脑炎(SSPE)。
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微生物特征 麻疹病毒呈球形，直径100—150nm，单负 链RNA，螺旋对称，三种衣壳蛋白(L、P、 N)组成核衣壳，外被脂质双层包膜，包膜
内面为M蛋白，包膜表面有血凝素(H蛋白) 和融合蛋白(F)。H蛋白与细胞表面病毒受 体(CD46)结合，有血凝功能，而F蛋白有 融合功能。
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对原代人胚肾、传代狗肾细胞等敏感， 出现CPE。抵抗力不强，56℃30min可灭 活，对消毒剂敏感．紫外线、pH4．5可 灭活病毒。对乙醚和丙酮均敏感：病毒 耐寒，耐干燥，-70℃可长期保存。
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微生物检验 标本直接镜检：取鼻咽分泌物、尿 沉渣脱落细胞涂片，检查受染细胞 产生细胞融合和多核巨细胞，观察 胞质和胞核内嗜酸性包涵体。
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2) 抗原检测：用免疫荧光法和ELISA 法早期快速检查病毒抗原。 3) 核酸检测：用标记的麻疹病毒cDNA 探针与病人细胞内麻疹病毒RNA进 行核酸杂交，或PCR法，扩增RNA， 然后进行核酸电泳和核酸杂交。
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4）病毒分离与鉴定 用鼻咽拭子或洗液，经处理后接种原代人胚肾细胞分离麻疹病毒，出现CPE或血球吸附试验阳性时，采用免疫荧光试验、ELISA法、核酸杂交法等进行鉴定。麻疹病毒仅一个血清型。
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5）抗体检测 取双份血清用ELISA法或CF法等 检测，抗体效价有4倍增高。 ELlSA法可检测IgM抗体，可协 助早期诊断。
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微生物检验 1.抗原检测：常用直接或间接IF试验，用 抗六邻体抗体作用，然后用荧光标记抗 抗体染色，再于荧光显微镜下发现致密
的核上与胞质中有荧光闪烁，则为腺病 毒。也用ELlSA法检测出病毒的抗原(或 lgM抗体)。 2.核酸检测：用PCR检出特异性DNA。根据 六邻体基因保守序列设计引物进行PCR扩 增，扩增产物用核酸探针作杂交鉴定。
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3.病毒分离 用Hela、HEP-2等传代细胞，可引起典型 CPE，细胞变圆，聚集成葡萄串状，将感 染细胞冻融三次，经2000r／min离心
鉴定。
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4.病毒鉴定 1.用特异性六邻体单克隆抗体对其抗 原表位进行检测,进行属特异性鉴定。 2.用HI试验鉴定血清型。型特异性免
疫血清能抑制血凝，即用血凝抑制 效价来鉴定血清型，方法简易，特 异性强，优于传统的中和试验。
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5．抗体检测 常用ELISA法，将腺病毒抗原加96孔 板，平行滴加双份血清，37℃孵育 和洗涤后，再加酶标记抗人lgG抗体，
孵育后加入酶底物显色，检测OD值， 抗体效价有4倍升高，具有意义。
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微生物检验 1．标本采集 患者的咽拭子、皮疹液、尿液, 测抗体需采集双份血清。 2．标本直接检测 利用风疹病毒特异引物进行
1．标本采集 患者的咽拭子、皮疹液、尿液, 测抗体需采集双份血清。 2．标本直接检测 利用风疹病毒特异引物进行 RT-PCR，扩增出病毒特异性片段进行电泳分 析或测序；核酸杂交技术是直接从标本中提 取出基因组核酸，用特异性探针进行核酸杂 交。 3．分离培养与鉴定 标本接种原代人胚肾、非 洲绿猴肾等细胞，出现CPE后收集病毒液，用 酶标或荧光素标记单克隆抗体进行病毒鉴定。
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4．抗体检测 1.采取HI试验，取病人双份血清，根据HI抗 体效价有4倍升高，来判定结果。用ELISA
法捕获IgM抗体，出现皮疹时就能测出。 2.先天性风疹综合征患儿血清中测出抗风疹 病毒lgM抗体和从母体获得的IgG抗体, 均 可判定为先天性风疹综合征。
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微生物检验 病毒量在分泌液中,于感染后2—3天后达 高峰，采集鼻咽拭子标本，用人二倍体 细胞系分离病毒，根据病毒性状，特别是
对酸稳定性试验以及中和试验鉴定血清型。 抗体检测用双份血清，抗体效价呈4倍增长， 则认为是鼻病毒感染。
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微生物检验 1.取鼻咽拭子标本,制成超薄切片,在电镜下直接观察呈日冕状的病毒颗粒，或用ELISA法直接检测病毒抗原，进行快速诊断。
2.病毒分离可用人胚肾细胞接种，有病毒生长时出现CPE,可用免疫电镜观察并鉴定病毒。抗体检测可用中和试验、HI 和ELISA法检测，如双份血清抗体效价有4倍增高，则可诊断。
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可在鸡胚尿囊膜、尿囊以及猴、狗、豚鼠 等动物内增殖，对Hela细胞敏感。但与疾 病关系未能最终肯定。轻型上呼吸道感染 和胃肠道疾病患者中均可分离到病毒。呼 肠病毒具有补体结合抗原，其血凝素可凝 集人O型红细胞，HI抗体和中和抗体具有 型特异性。
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