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实验十 植物多倍体诱发与鉴定 实验十二
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一、实验目的 了解人工诱发多倍体植物的原理 掌握用Col诱发多倍体植物的方法 练习鉴别植物多倍体的技术
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二、实验原理 多倍体: x≠n 秋水仙素 抑制微管蛋白的组装
物理方法: 温度剧变(高温、低温),机械损伤(嫁接、反复的切断产生愈伤),各种射线照射; 化学方法: 秋水仙素、萘嵌戊烷、异生长素、富民农等,其中以秋水仙素效果最好; 秋水仙素诱发多倍体的作用机制是抑制纺锤丝微管蛋白(microtube protein)的组装,导致不能形成纺锤体,不影响CS复制; 从严格意义上讲,多倍体的配子、合子染色体数目仍分别用n、2n表示; 秋水仙素分子式C22H25NO6 + H2O 秋水仙系百合科秋水仙属植物,多年生草本球根花卉, 8-10月开花
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多倍体的鉴定 直接鉴定法 间接鉴定法 叶片、气孔、保卫细胞及花粉粒
一是直接鉴定法,又叫细胞学鉴定法,即直接计数细胞内的CS数目而鉴定其加倍的倍数; 二是间接鉴定法: 通过测量叶片、气孔、保卫细胞及花粉粒大小等外部形态间接鉴定是否属于多倍体; 图示洋葱2n=8x=64
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三、材料、试剂和器材 大蒜(Allium sativum,2n=16) 0.1%Col、卡式液、醋酸洋红、1mol HCl
水浴锅、显微镜、镊子、刀片、载盖片
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四、实验步骤 1. 生根及诱变处理 大蒜去老根,水培生根至12cm,移到0.1%Col中,直到根尖膨大(23d)
剪下膨大根尖,冲洗几次,Carnoy液624h,置70%alc保存
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2. 多倍体细胞观察 60℃解离5',冲洗 切分生区,碾碎,染色35' 盖片,轻敲,用力压实 显微镜观察
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简要步骤 根尖→指管→冲洗→解离5'→反复冲洗→切分生区→碾碎→染色35'→盖片→吸水纸→轻敲→压片→镜检
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五、作业 P103思考题1 绘制CS加倍的中期分裂相
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