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实验四 植物细胞微丝束的观察 一、实验目的 掌握考马斯亮蓝R250染植物细胞内微丝束的方法。.

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1 实验四 植物细胞微丝束的观察 一、实验目的 掌握考马斯亮蓝R250染植物细胞内微丝束的方法。

2 二、实验原理 真核细胞胞质中错综复杂的纤维网络称为细胞质骨架,按纤维直径、组成成分和组装结构的不同分为微丝、微管和中间纤维。微丝是肌动蛋白亚单位组成的螺旋状纤维,在细胞中它们又与某些结合蛋白一起形成不同的亚细胞结构,如应力纤维(又称微丝束)。本实验利用考马斯亮蓝R250染色法来观察植物细胞中由微丝组成的微丝束。考马斯亮蓝R250是一种蛋白质染料,它可以使各种细胞骨架蛋白着色,并非特异地显示微丝,但由于有些细胞骨架纤维在该实验条件下不够稳定,如微管;还有些类型的纤维太细,在光学显微镜下无法分辨,因此我们看到的主要是由微丝平行排列组成的微丝束。

3 三、实验用品 1、实验材料 2、实验试剂 3、器材 洋葱鳞茎
(1) M-缓冲液:咪唑50mmol/l, KCL 50mmol/l, MgCL mmol/l, EGTA 1mmol/l, EDTA 0.1mmol/l, 巯基乙醇1mmol/l, 甘油4 mmol/l, 用1mol/l HCL调pH7.2。 (2)磷酸缓冲液 (3)1% Triton X-100/ M-缓冲液 (4)0.2%考马斯亮蓝R250 染液: 0.2g考马斯亮蓝R250溶于甲醇46.5ml, 冰醋酸7ml, 蒸馏水46.5ml。 3、器材 显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、培养皿

4 四、实验步骤 1、取洋葱鳞茎内表皮(大小约1cm2),置于盛有磷酸缓冲液(pH6.8)的培养皿中。
2、吸去缓冲液,用Triton X-100处理20min。 3、除去Triton X-100,用M-缓冲液漂洗2次,每次10min。 4、3%戊二醛固定液中固定20-30min。 5、在磷酸缓冲液中洗三次,每次3min。 6、0.2%考马斯亮蓝R250染色15-20min。 7、小心地用水漂洗数次,将样品置于载玻片上,盖好盖玻片,在显微镜下观察。

5 五、作业 描绘你所观察到的植物细胞中微丝平行排列 组成的微丝束的图像。 六、思考题 实验中试剂Triton X-100的作用是什么?


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