8.3 吸光光度法的灵敏度与准确度 A=  b c  =A/bc (L·mol-1·cm-1)  越大, 灵敏度越高:

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1 8.3 吸光光度法的灵敏度与准确度 A=  b c  =A/bc (L·mol-1·cm-1)  越大, 灵敏度越高:
8.3 吸光光度法的灵敏度与准确度 一. 灵敏度的表示方法:摩尔吸光系数 () A=  b c  =A/bc (L·mol-1·cm-1)  越大, 灵敏度越高:  ～5×104 为中等灵敏度;  >105为高灵敏度;  <104为低灵敏度.

2 例1 邻二氮菲光度法测铁 (Fe)=1.0mg/L, b=2cm , A=0.38 计算 和
解： c(Fe)=1.0 mg/L=1.0×10-3/55.85 =1.8×10-5mol/L

3 c =1.0mg/L=1.0×10-3 g /1000mL = 1.0×10-4g/100mL

4 二. 准确度—仪器测量误差 > < 100 80 60 40 20 T% c1 c2 c3 T T-透光率读数误差 c
T% c1 c2 c3 T T-透光率读数误差 c c1 c2 c3 > < 光度计的读数误差一般为0.2～2％(ΔT),由于T与浓度c不是线性关系，故不同浓度时的ΔT引起的误差不同。

5 浓度测量的相对误差与T(或A)的关系 实际工作中，应控制T在10～70％, A在0.15～1.0之间 (调c, b, ) 10 8 6 4
2 20 40 60 80 0.7 0.4 0.2 0.1 A T% Er (36.8) 0.434 浓度测量的相对误差与T(或A)的关系 实际工作中，应控制T在10～70％, A在0.15～1.0之间 (调c, b, )

6 8.4 显色反应与分析条件的选择 8.4.1 显色剂与显色反应 生色团：－N＝N－，－N＝O，
8.4 显色反应与分析条件的选择 8.4.1 显色剂与显色反应 无机显色剂: SCN- [Fe(SCN)]2+ H2O2 [TiO·H2O2]2+ 有机显色剂: O 生色团：－N＝N－，－N＝O， C=S,－N （共轭双键）πe ： 助色团－NH2，－OH，－X （孤对电子）ne

7 有机显色剂 OO型： CH3－C－C－CH3 NN型： HO－N N－OH ON型： S型： 磺基水杨酸 ＝ 邻二氮菲 丁二酮肟 PAR
COOH SO 3 H OO型： 磺基水杨酸 CH3－C－C－CH3 HO－N N－OH ＝ N NN型： 邻二氮菲 丁二酮肟 N O H OH ON型： PAR N H S 双硫腙 S型：

8 显色反应的选择 *灵敏度高，一般ε>104 *选择性好 *显色剂在测定波长处无明显吸收。 对照性好, λmax>60 nm .
*反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。 *显色条件易于控制，重现性好。

9 8.4.2 显色条件的确定 1. 显色剂用量（c(M)、pH一定） c(R) c(R) c(R) Mo(SCN)32+ 浅红
显色条件的确定 1. 显色剂用量（c(M)、pH一定） c(R) c(R) c(R) Mo(SCN)32+ 浅红 Mo(SCN)5 橙红 Mo(SCN)6- 浅红 Fe(SCN)n3-n

10 2. 显色反应酸度（c(M)、 c(R)一定） pH pH1<pH<pH2

11 邻二氮菲－亚铁反应完全度与pH的关系 FeR3 β3＝1021.3 Fe2++3R c(R)≈[R´]=10-4mol·L-1 柠檬酸 β3
A 柠檬酸 c(R)≈[R´]=10-4mol·L-1

12 pH3～8为适宜 的酸度范围

13 3. 显色温度及显色时间 A T2(℃) T1(℃) t(min) 另外，还有介质条件、有机溶剂、表面活性剂等

14 8.4.3 干扰及消除 1.化学法 测Co2＋(含Fe3+) : (掩蔽法) Co2＋, Fe3+ Co2+ FeF63-
Co(SCN)2 (蓝) ⑴NaF SCN－ Fe2+,Sn4+ (2)Sn2+ Co(SCN)2

15 如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰， 则需采取分离法。
测Co2＋ :(生成络合物性质不同) Co2+, Zn2+, Ni2+, Fe2+ CoR,ZnR NiR,FeR CoR, Zn2+ , Ni2+ , Fe2+ 钴试剂R H+ 测Fe3＋:(控制pH) Fe3+, Cu2+ FeSS （紫红） Cu2+ pH 2.5 SS 如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰， 则需采取分离法。

16 2. 物理法 —选择适当的测定波长 515 655 415 500 钍-偶氮砷III 钴-亚硝基红盐 A 络合物 试剂

17 -- 选择适当的参比溶液 1. 仅络合物有吸收，溶剂作参比。 如 phen—Fe2+ 标准曲线 2.待测液也有吸收，被测液作参比。
3. 显色剂或其他试剂也有吸收，空白溶液作参比 例:邻二氮菲光度法测Li2CO3中的 Fe， 参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂。 4. 干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时： 1）掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比. 2）加入等量干扰组分到空白溶液中,作参比.

18 8.5 吸光光度法的应用 1. 单一组分测定 H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3
8.5 吸光光度法的应用 1. 单一组分测定 1) 金属离子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟, Co-钴试剂 2) 磷的测定: DNA中含P～9.2%, RNA中含P～9.5%, 可得核酸量. H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3 =(NH4)3PO4·12MoO3+12NH4NO3+12H2O Sn2+ 磷钼黄(小) 磷钼(V)蓝(大)

19 3) 蛋白质测定—溴甲酚绿、考马司亮蓝等 4) 氨基酸测定—茚三酮(紫色化合物) 5) 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+---- 6) 药物含量测定—比吸光系数定量；荷移光谱法测定. 7) 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等。

20 2. 多组分的测定 在1处测组分x, 在2处测组分y b) 在1处测组分x; 在2处测总吸收,扣除x吸收,可求y
c) x,y组分不能直接测定 A1=exl1bcx+ eyl1bcy(在1处测得A1) A2 =exl2bcx+ eyl2bcy(在2处测得A2) xl1, eyl1, exl2, eyl2由x,y标液 在1, 2处分别测得

21 3. 光度滴定 NaOH滴定 对硝基酚 pKa=7.15 间硝基酚 pKa=8.39  pKa =1.24 对硝基酚 间硝基酚
V1 V2 V(NaOH)/mL 对硝基酚 间硝基酚 酸形均无色. 碱形均黄色

22 典型的光度滴定曲线 依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点的滴定分析方法。 Vsp Vsp Vsp Vsp 被滴物吸收 滴定剂吸收
滴定剂与待测物均吸收 Vsp 产物吸收

23 4. 络合物组成的测定 (1)摩尔比法: 固定cM ,改变cR 1:1 3:1 c(R)/c(M) A ,0

24 (2)等摩尔连续变化法: M:R=1:1 0.5 0.33 cM/c M:R=1:2

25 表观形成常数的测定 (设M、R均无吸收) 0.5 cM/c M:R=1:1 A0A c(M)=c(R)=c MmRn型 ?

26 5.一元弱酸离解常数的测定 p330 Ka＝[H+][L]/[HL] HL H＋＋L 配制一系列c相同,pH不同的溶液,测A.
高酸度下，几乎全部以HL存在，可测得AHL＝εHL·c(HL)； 低酸度下，几乎全部以L存在，可测得AL ＝εL·c(HL). 代入整理： [HL] [L] 或

27 MO吸收曲线 Aa(HL) Ab (L) Aa 350 400 450 500 550 600 /nm A
1 2 3 4 5 6 Aa 350 400 450 500 550 600 /nm A 曲线 pH 1 1.10, 1.38 2 2.65 3 3.06 4 3.48 5 3.98 6 5.53,6.80 由每份溶液的一对pH、A，可求得一个Ka, 取平均值即可.

28 MO离解常数的测定 作图法 AHL 3.32(pKa) A pH=pKa pH AL 3.0 4.0 pH 3.34 1 2 3 4 5 6
0.6 0.4 0.2 -0.2 -0.4 -0.6 3.0 4.0 pH 3.34

29 6. 双波长分光光度法消除干扰(不要求) 在2， A2 = Ax2+Ay2 在1， A1= Ax1+Ay1 Ay2 ＝ Ay1
/nm Ay2 ＝ Ay1 A= A2 - A1 = Ax2+Ay2 –(Ax1+Ay1) = Ax2 –Ax1 = Ax Ax =(x2－ x1)bcx 消除了y的干扰

30 双波长分光光度法消除浑浊背景干扰 A A 1 -A 2 = △A △A∝c 例 牛奶中微量Fe的测定  2

31 7. 导数分光光度法(不要求) 混合物导数光谱 A~图 4 3 2 1

32 常药降压片中氢氯噻嗪含量的测定 1.氢氯噻嗪. 2.硫酸双肼肽嗪 3. 盐酸可乐定 4.常药降压片 4 A 1 2 3
 4 1 2 3 A 1.氢氯噻嗪. 2.硫酸双肼肽嗪 3. 盐酸可乐定 4.常药降压片

33 肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取 a.空白肝普通光谱 b.2.5 mg/L敌鼠溶液的普通光谱 c.空白肝二阶导数光谱
0.0 c d a b D 方法：肝匀浆用乙腈浸提，浸提液用6％的HClO4稀释，然后用GDX100大孔树脂萃取，用二氯甲烷5mL洗脱杀鼠剂，40℃挥干，剩余物用0.1mol·L-1NaOH4mL溶解后，紫外导数光谱测定。 a.空白肝普通光谱 b.2.5 mg/L敌鼠溶液的普通光谱 c.空白肝二阶导数光谱 d.2.5 mg/L敌鼠溶液的二阶导数光谱

34 第八章 小 结 8.1 了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系. 吸收曲线—定性分析的基础。
第八章 小 结 8.1 了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系. 吸收曲线—定性分析的基础。 定量分析的基础—朗伯-比尔定律：A=bc=-lgT 式中各参数的物理意义，定量计算。 8.2 了解目视比色法、分光光度法的特点，分光光度计的基本部件。 8.3 灵敏度的表示—摩尔吸光系数的意义和计算； 准确度—适宜的测量范围、偏离比尔定律的原因。 8.4 显色反应及条件的确定: 显色剂用量、酸度、时间、温度、干扰及消除。 8.5 应用: 单一组分测定示例、多组分测定、光度滴定、络合物组成的测定、酸碱离解常数的测定。

35 新年快乐！