凯氏定氮法 测定奶粉中的蛋白质含量 报告人：严晓文 03081093 2004.12.19.

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1 凯氏定氮法 测定奶粉中的蛋白质含量 报告人：严晓文

2 前不久安徽阜阳等全国各地发生了劣质奶粉事件，不法商家为了谋利，随意降低奶粉中蛋白质含量。
按照国家药品食品监督管理局的规定，0—3个月婴儿食用的奶粉，蛋白质含量必须达到12%，3—6个月婴儿食用的奶粉，蛋白质含量应不低于10%，而这些所谓的婴幼儿专用奶粉蛋白质含量只有2%。 长期饮用蛋白质含量极低的奶粉，首先会导致婴儿严重营养不良，随后会引起各种并发症，在外来细菌的侵袭之下，婴儿几乎完全丧失了自身的免疫能力，病情发展十分迅速，最后婴头部严重水肿，几乎看不清五官，全身皮肤也出现了大面积的高度溃烂，伤口长时间无法愈合，最后导致呼吸衰竭而死亡。

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4 ？ 因此各地工商部门和质检部门都加大了执法力度 那么，怎么才能知道奶粉是否合格呢，蛋白质含量就 是其中一个最重要的指标。
那么，怎么才能知道奶粉是否合格呢，蛋白质含量就 是其中一个最重要的指标。 下面我就给大家介绍一种经典的蛋白质含量的测定方法 当然蛋白质的测定方法很多，如总氮量法，福林—酚试剂法，双缩脲法，紫外吸收法等。近来已有专用的蛋白质分析仪，但经典的凯氏定氮法仍是食品，饲料分析，种子鉴定及营养和生化研究中最广泛应用且具有足够精度的方法。

5 实验原理 : 反应式为： H2SO4==SO2+H2O+[O] R. CH.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3 NH3
1.有机物中的氮在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，消化生成（NH4）2SO4 反应式为： H2SO4==SO2+H2O+[O] R. CH.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3 NH3 R.CO.COOH+[O]==nCO2+mH2O 2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4 2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于 H3BO3 溶液中。 反应式为: 2NH4++OH-==NH3+H2O NH3+H3BO3==NH4++H2BO3-

6 实验试剂 反应式为： H2BO3-+H+==H3BO3
3. 再用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量。 反应式为： H2BO3-+H+==H3BO3 实验试剂 HCI标准溶液（0.05 mol.L-1 ） H3BO3溶液(2%) H2SO4(浓) NaOH溶液(50%) K2SO4(固体) CuSO4.5H2O(固体) 甲基红—次甲基蓝混合指示剂或甲基红—溴甲酚绿混合指示剂

7 实验仪器: 凯氏烧瓶（100ml）:1个 凯氏定氮装置 移液管(10ml): 1支 酸式滴定管(10ml): 1支 凯氏定氮装置图
1.安全管 2.导管 3.汽水分离管 4.样品入口 5.塞子 6.冷凝管 7.吸收瓶 8.隔热液套 9.反应管 10.蒸汽发生瓶

8 实验步骤 一、 消化液的制取      准确称取奶粉样品0.5g，置于凯氏烧瓶内，加入8—9gK2SO4,0.4gCuSO4.5H2O及15ml浓H2SO4，加数粒玻璃珠，缓慢加热，并小心地尽量减少泡沫产生，防止溶液外溅，使样品全部浸于H2SO4内。样品中泡沫消失后，即加大火力至溶液澄清，再继续加热约1h，冷却至室温。沿瓶壁加入50ml纯水，溶解盐类，冷却，转入100ml容量瓶中，以纯水冲洗烧瓶数次，洗液并入容量瓶中，加水至刻度，摇匀。 二、NH3的固定 1、按图装好凯氏定氮装置。向蒸汽发生器中的水中加数滴甲基红指示剂、几滴H2SO4及数粒沸石

9 在整个蒸馏过程中需保持此液为橙红色，否则补加H2SO4。接收液为20ml 2%的H3BO4溶液，其中加2滴混合指示剂，接收时使装置的冷凝管下口浸入吸收液的液面之下。
2、移取10.0ml样品消化液，经进样口注入反应室内，用少量水冲洗进样口，然后加入10ml 50% NaOH溶液于反应室内，塞好玻璃塞，防止氨的逸出。从开始回流记时，蒸馏4min，移动冷凝管下口使其离开接收液面。再蒸馏，用纯水洗冷凝管下口，洗液流入吸收液内。 三、NH3的标定 用0.05mol.L-1HCl标准溶液滴定至暗红色为终点。 四、蛋白质含量的计算

10 参考书目： 蛋白质（%）=总氮量（%）*K
本实验为测定奶粉中的蛋白质含量，换算因数为6.38 参考书目： 1、《基础分析化学实验》 北京大学化学系分析化学教研室编 北京：北京大学出版社，1993.5 2、《基础化学试验 一》 厦门大学化学系（无机 与分析） 2001.8

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