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Drug Resistance Gene Transferred by Plasmid
Drug Resistant Gene mRNA Plasmid Resistant Strain Plasmid gets out and into the host cell Enzyme Hydrolyzing Antibiotics New Resistance Strain 質體 可以由一種宿主傳到另一種宿主菌，因此抗藥性也可以因此傳播開來，使得很多細菌很快對抗生素產生抗藥性。 遺傳工程也是利用質體的這種傳播功能，把一個被修改過的重組質體，放到宿主細菌中去表現，生產我們所要的物質。 Non-resistant Strain Juang RH (2004) BCbasics
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Target Genes Carried by Plasmid
Restriction Enzyme Restriction Enzyme Chromosomal DNA DNA Recombination Target Gene Recombination Transformation 1 plasmid 1 cell Host Cells Recombinant Plasmid Transformation 質體 用限制脢切開後，可以插入各種外來的 DNA，形成重組質體，後者可以轉形到宿主細胞中。 但是，一個細菌只能接受一種重組質體，而這個轉進去宿主的質體，可以在細菌中大量複製相同的質體。 Juang RH (2004) BCbasics
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1 X100 X1,000 =100,000 Amplification and Screening of Target Gene
Plating 1 cell line, 1 colony Plasmid Duplication X100 Bacteria Duplication X1,000 質體 在細菌中會大量複製，大約每一隻細菌可以累積 5~200 個質體 (以 100 計算)；若把這些轉形菌途佈在培養皿上，則由單一細菌所形成的菌落，將只含有一種轉形菌，也就是只含有一種重組質體。 每一個菌落若有 1000 隻細菌，而每隻細菌含有 100 個重組質體，則每個菌落就有 1×100×1000 個均質的純系重組質體，沒有雜夾其他的質體；因為一個細菌只能包容一種質體，而一個菌落只有一種細菌。 因此這種 分子群殖 (molecular cloning) 手法，有點像在『種植分子』，把一個目標基因，經過上述的 純化 與 放大 的過程，得到數目眾多的複製 DNA，可以抽取出來應用。 最後所得到的群落，可以用探針進行雜合反應，挑選出含有目標基因的菌落 (N3-13)。 Pick the colony containing target gene =100,000 Juang RH (2004) BCbasics
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