第九章 维生素类药物的分析.

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1 第九章 维生素类药物的分析

2 维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物质。 人体不能合成维生素。

3 脂溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺 水溶性 VitM VitPP
VitA、D2、D3、 E、K1 等 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺 水溶性 VitM VitPP

4 第一节 维生素 A的分析 -H 维生素A醇 -COCH 维生素A醋酸酯 -COC15H 维生素A棕榈酸酯 R :

5 结构与性质 一、 为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯 （一） 具有UV吸收 存在多种立体异构化合物

6 相对生物效价 维生素A % 新维生素Aa % 新维生素Ab % 新维生素Ac % 异维生素Aa % 异维生素Ab %

7 易发生脱氢、脱水、聚合反应 VitA2 VitA3

8 聚合反应 鲸醇

9 （二） 性质 1 溶解性 不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等

10 2 不稳定性 共轭多烯侧链易被氧化 △或有金属离子存在时氧化↑

11 环氧化物 VitA醛 VitA酸

12 紫外吸收特性 的范围有最大吸收 4 与三氯化锑发生呈色反应 CHCl3

13 鉴别 （一）三氯化锑反应 （Carr-price 反应）
二、 （一）三氯化锑反应 （Carr-price 反应） CHCl3 条件：无水，无醇。

14 蓝色 逐渐变紫红

15 方法 取维生素A油溶液1d， 加氯仿10 ml，振摇溶解，取出两滴，加氯仿2 ml，与25%三氯化梯氯仿液0
方法 取维生素A油溶液1d， 加氯仿10 ml，振摇溶解，取出两滴，加氯仿2 ml，与25%三氯化梯氯仿液0.5 ml反应，成兰色，渐成紫红。

16 UV法 （二） （BP（2000） λmax为326nm 一个吸收峰 λmax为350～390nm 三个吸收峰

17 VitA ↓ 去水VitA（VitA3）

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19 讨论 维生素 A有五个共扼双键，无水乙醇溶液在 326 nm处有最大吸收，盐酸催化加热脱水，成5个双键，故，波长红移，同时在350-390之间出现3个吸收峰。

20 TLC法 （三） BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑 USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值

21 三 含量测定 （一） UV法 立体异构体 氧化产物及光照产物 合成中间体 去氢维生素A（ VitA2） 去水维生素A（ VitA3）

22 三、点校正法（P208） 1. 条件： （1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。

23 2. 波长的选择： （1） 1 VitA的max（328nm） （2）  3 分别在1的两侧各选一点

24 对吸收有影响的杂质见书209液

25 第一法 等波长差法 测定对象：VitA醋酸酯

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27 第二法 等吸收度法(皂化法) 测定对象： VitA醇

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29 测定法 （1）基本步骤: 第一步 A选择 选择依据： 所选A值中杂质的干扰已基本消除

30 第二步 求 注意： C 为混合样品的浓度

31 第三步 求效价 换算因数由纯品计算而得：

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34 第四步：求标示量％

35 （二） (二) 三氯化锑比色法 标准曲线法 优点 简便 快速 呈色不稳定 （5 ~ 10s内） 水分干扰 与标准曲线温差≤1℃ 缺点
(二) 三氯化锑比色法 标准曲线法 λmax 618nm～620nm 优点 简便 快速 缺点 呈色不稳定 （5 ~ 10s内） 水分干扰 与标准曲线温差≤1℃ 专属性差 三氯化锑有腐蚀性

36 注意事项 1 颜色不稳，动作要快。 2 用无水氯仿作溶剂测定,要求无水。 3 温度恒定。 4 非专属性，结果偏高。 5 有腐蚀性。

37 HPLC

38 第二节 维生素B1 HCl Cl- 氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)

39 （二） 性质 1 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性 2 硫色素反应：噻唑环在碱性介质中开环，在与嘧啶环环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。

40 3 盐酸液的246nm波长处测定吸收度，吸收系数为421。
UV 共轭双键 λmax = 246nm 4 碱性 嘧啶环 —— 伯氨 噻唑环 —— 季铵 1、可与酸成盐 2、与生物碱沉淀剂沉淀。 3、含量测定 —— 非水碱量法

41 二、鉴别试验 （一） 硫色素反应，ChP

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43 ＋2H 硫色素

44 方法 取本品约5 mg，加氢氧化钠与正丁醇2.5ml，强烈振摇。放置分层，上面醇层显强烈兰色荧光。加酸消失，再加碱又重现。
专属性反应。

45 （二）沉淀反应 VitB1 H+ H+ H+ H+

46 S元素反应 （三）其他反应 Cl-反应

47 含量测定 （一） 非水滴定法 1 原理 两个碱性的，已成盐的伯胺与季胺的基团，在非水溶液中，醋酸汞存在下，均可与高氯酸作用，根据消耗高氯酸的量进行计算。

48 喹那啶红－亚甲蓝 （紫红→天蓝）

49 2 方法 取本品0.15g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中加冰醋酸，醋酸汞，喹那啶红－亚甲蓝2d，高氯酸滴定。由紫红→天蓝，1ml相当于16.86mg。

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51 二 紫外光谱法 维生素B1片的测定，取20片称定。严细。称取细粉适量，相当于25 mg，置100ml量瓶中，取5ml，在定溶于100ml，246nm测。标准吸光系数421。注意所使用的溶剂。

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53 g/100ml ChP片剂 = 421 A = ECL （每片）相当于标示量的%= g 规格 g/片

54 维生素B1注射液的测定 取本品相当于B1 50mg，置200ml量瓶中，加水置刻度，取5ml，用盐酸定溶于100ml，246nm测。标准吸光系数421。

55 注射剂（每ml）相当于标示量的%= 规格 g/ml ml

56 （三） 硫色素荧光法 原理 1、 NaOH

57 方法与计算 2、 激发波长365nm 发射波长435nm

58 S + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇 对照液 d + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇 A 供试液 b

59 特点 3、 （1）灵敏度高，线性范围宽 （2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析

60 第三节 维生素C L－抗坏血酸

61 （一）结构 为L-抗坏血酸，在化学结构上和醣类似。有4种光学异构体，L右旋活性最强。具有二稀醇的结构，具有内酯环，具有两个手性碳（C4，C5），性质活泼。

62 （二）性质 溶解性 易溶于水 水溶液呈酸性

63 2 酸性 C3－OH的酸性较强。pKa = 4.17，C2－OH的酸性较弱pKa = 11.57。故表现为一元酸的性质。能与碳酸氢钠成钠盐。

64 强还原性 二烯醇结构的还原性极强。 二酮基结构 二烯醇结构

65 有活性 无活性 有活性

66 光学活性 L(+)－抗坏血酸 活性最强手性C（C4、C5） * *

67 5 水解反应与碱反应

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69 6 具糖的性质 结构与糖类相似 有糖类的显色反应 △ 50℃

70 7 紫外特征

71 二、鉴别反应 （一）与AgNO3反应 (ChP2000) 具有强还原性]：
取本品0.2 g, 加水10 ml溶解，取5 ml，加硝酸银0.5ml，成--

72 （二）、与2，6 - 二氯靛酚反应 氧化型 还原型 玫瑰红色 蓝色 OHˉ (ChP2000)

73 （玫瑰色） （无色）

74 取本品0.2 g, 加水10 ml溶解，取5 ml，加2，6 - 二氯靛酚2d，成--

75 （三）与其他氧化剂的反应

76 与碱性酒石酸铜反应 USP 与KMnO4反应

77 （四）糖类的反应 USP 或盐酸 吡咯 50℃

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79 戊糖 (糠醛) 50℃ (吡咯) （蓝色）

80 （四） UV 0.01mol/L HCl

81 杂质检查 （一） 溶液的澄清度与颜色检查 注射液 取本品适量，加水成50mg/ml的溶液，420nm 测，吸收度不得超过0.06。

82 片剂 取片粉适量（相当于1.0g），加水20ml溶解，滤过。成50mg/ml的溶液，440nm 测，吸收度不得超过0.07。
在加工过程中有色杂质略有不同，故波长不同。

83 （二） 铁，铜离子的检查

84 四、含量测定 （一）碘量法 1 原理 指示剂 淀粉指示液

85 H+

86 2、方法 取本品约0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝 色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6

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88 4、讨论 （1）酸性环境 d . HCl 减慢VitC被O2氧化速度 （2）新沸冷H2O 赶走水中O2 （3）立即滴定 减少O2的干扰

89 （4）附加剂干扰的排除 片剂 —— 滑石粉 —— 过滤 丙酮 注射剂 —— 抗氧剂 —— 甲醛 Na2SO3 NaHSO3
Na2S2O3 Na2S2O5 一缩二亚硫酸

90 O a S 3 + H 2 N 5 C H O 2 H O N C S 3 a

91 （二）2，6 - 二氯靛酚钠滴定法法 1、原理

92 2、方法 自身指示终点法

93 （4）缺点 不稳定 需经常标定 贮存≤一周 干扰多 氧化力较强

94 （三） HPLC法

95 例 多种维生素片中VitA、 VitB1、 VitB2 、VitB6 、烟酰胺、VitC、 VitE的含量测定 色谱柱 ODS 流动相 A、水 -甲醇（4 ：1） B、甲醇 （梯度洗脱） 抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠

96 水溶性维生素 离子对色谱法（樟脑磺酸） 内标法 + 校正因子 内标物——苯酚 脂溶性维生素 外标法