实验六、兔血细胞的计数及鸭血细胞大小的测量

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1 实验六、兔血细胞的计数及鸭血细胞大小的测量

2 兔血细胞计数 一.实验原理 利用显微镜并借助血细胞计数板，计算单位体积的液体中所含细胞或微小生物的数量。 二.试剂与器械
光学显微镜、血细胞计数板、兔血。

3 血细胞计数板 2 盖玻片 计数室

4 三．实验步骤 1.取血细胞计数板，检查计数板是否清洁，如有污垢，应先洗涤干净。然后将计数板放于低倍镜下，熟悉计数室的构造。然后加盖玻片盖住两边的小槽。 2.充液：用小滴管将一小滴稀释200倍的兔血滴在盖玻片边缘的玻片上，使稀释血液借毛细管现象自动渗入计数室中。 2 盖玻片 计数室

5 三．实验步骤 1.取血细胞计数板，检查计数板是否清洁，如有污垢，应先洗涤干净。然后将计数板放于低倍镜下，熟悉计数室的构造。然后加盖玻片盖住两边的小槽。 2.充液：用小滴管将一小滴稀释200倍的兔血滴在盖玻片边缘的玻片上，使稀释血液借毛细管现象自动渗入计数室中。 注意事项: 如滴入过多,溢出并流入两侧槽内,使盖玻片浮起,体积改变,会影响计数结果，需用滤纸把多余的溶液吸出，以槽内没有溶液为宜。如滴入溶液过少,经多次充液,易产生气泡,应洗净计数室,干燥后重做。

6 三．实验步骤 25X16 计数板 3.计数：充液后静止1-2分钟，待红细胞下沉后，方可进行计数。 计数中央大方格内
四角及中央共5个中方格内的80个小方格中所有细胞数。 25X16 计数板 长x宽x高= 1mm x 1mm x 0.1mm = 0.1mm3 = 10-4ml (25x16 = 400小格子) 细胞浓度计算公式： 细胞浓度(细胞个数/ml)=(80小格内细胞个数÷80) ×400×104×稀释倍数

7 细胞计数原则 计数时为防止重复和遗漏，应按一定的顺序，先自左向右数到最后一格，下一行格子则自右向左，再下一行又自左向右，即呈S形计数。

8 √ 细胞计数原则 X 计数分布在刻线上的红细胞时，依照“计上不计下，计左不计右”的原则，判断标准为是否接触三条边线的中间线。
计算上侧和左侧 接触到中线的细胞 X 排除下侧和右侧 接触到中线的细胞 如发现各中方格的细胞数目相差20个以上，表明血细胞分布不均匀，须重新计数。

9 四. 注意事项： 防止液体滴入过多，否则溢出并流入两侧槽内，会使盖玻片浮起，体积改变，会影响计数结果。 2. 先用低倍镜找到血球计数器的计数区，调节光源亮度以及孔径光阑大小得到清晰的图像。

10 五. 实验结果和作业： 计算出每立方厘米(每毫升)的兔血中所含红细胞的数量。 六. 思考题： 1. 比较鸟类（鸭）与哺乳类动物（兔）血红细胞大小及 形态上的差异。

11 鸭血细胞大小的测量 一、实验目的:利用测微尺测量细胞大小 二、实验器材: 1. 常用显微镜目镜测微尺种类 十字板 分划板 网格板

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13 Fluorescence Microscopy Laser-Scanning Confocal Microscopy(激光扫描共聚焦显微镜)
9.2 Light Microscopy Fluorescence Microscopy Laser-Scanning Confocal Microscopy(激光扫描共聚焦显微镜) For better resolution when imaging thick cells. A mitotic fertilized egg from a sea urchin (海胆) Figure Confocal microscopy produces an in-focus optical section through thick cells.

14 2. 测微尺的使用操作 目镜测微尺 1.取下目镜,将目镜测微尺的刻度面向下放入目镜中,旋上透镜(Olympus显微镜目镜中已安装了测微尺,不必自己安装)； 10 20 30 40 50 2.将镜台测微尺盖片面朝上放在载物台上,用低倍镜观察,调节焦距看清镜台测微尺的刻度； 镜台测微尺 1 mm 1毫米分成100个小格 每一小格长度 = 10微米(10μm)

15 3.移动镜台测微尺,同时转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近,并将两尺的“0”点刻度线或某刻度线对齐，然后从左向右查看两尺刻度线另一重合处,记录重合线间目镜测微尺与镜台测微尺的格数。
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 镜台测微尺 目镜测微尺的100格与镜台测微尺的50格重合 在某一物镜倍数下： 目镜测微尺每格的值 = 目镜测微尺的格数 镜台测微尺的格数x10微米

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17 三、实验步骤:鸭血细胞的观察与测量 1.制作鸭血涂片： a. 将绿豆大小血滴滴于清洁玻片上。
b. 另取边缘平滑的玻片作为推片：推片一端放在血滴的前方，逐渐后移，接触血滴并使血滴沿推片边缘均匀展开，然后将推片与玻片保持 30 － 45 度角，轻轻用力，均匀而迅速地将推片沿玻片表面向前推至玻片另一端，形成头体尾明显的舌形血膜。立即将玻片摇动，使其快速干燥，忌热力干燥。

18 三、实验步骤:鸭血细胞的观察与测量 2.血涂片染色与观察：将已经制备好的鸭血涂片放在染色盘架上,滴几滴瑞氏染液(伊红美蓝混合染料溶于甲醇中制得）于玻片上盖满涂片部分,静置染色1分钟,滴加等量1/15mol/L磷酸缓冲液，轻轻摇动混匀,再静置 染色 5－10分钟，最后用清水缓缓冲洗（从玻片的背面冲洗）1分钟,倾斜放置,凉干后进行观察测量。 3.鸭血红细胞大小的测量：移去镜台测微尺，换鸭血涂片。先用低倍镜观察全片,了解涂片染色、细胞分布情况， 选择细胞分布均匀的部分( 常在血膜体尾交界部), 转高倍物镜按一定顺序检查。

19 涂布均匀的鸭血红细胞 测量10个鸭血红细胞

20 四.注意事项 五.实验结果和作业： 1.不同物镜下目镜测微尺代表的大小不同。
1.分别计算不同物镜放大倍数(10x, 20x, 40x)下 目镜测微尺的单位。 2.用目镜测微尺和镜台测微尺测量一下 鸭血红细胞的长轴和短轴， 分别测量10个鸭血红细胞，求其平均值(多少微米？)。

21 实验分组： 前半部分同学： 1.血球计数:滴稀释的兔血（B413/B414 )镜检（B409）。(血球计数板1片/人）
后半部分同学： 1.鸭血涂片制作:（B413/B414),血细胞大小测量（B409) 镜台测微尺（1片/人）。 2.血球计数:滴稀释的兔血（B413/B414）镜检(B409）。 Olympus显微镜目镜中已安装了目镜测微尺

22 温馨提醒 1.注意保护好血球计数器和镜台测微尺,实验结束时 每人应交回其中一件用品。 2.今天不使用油镜。
1.注意保护好血球计数器和镜台测微尺,实验结束时 每人应交回其中一件用品。 2.今天不使用油镜。 3.实验结束请将所使用的血球计数器，镜台测微尺，载玻片，滴管，离心管及其他物品清洗干净并 归还原位。 清除自己实验过程中所产生的垃圾，等老师检查签字后再离开。 4.请班长安排好值日生。