第19章　药物研究的生物化学基础 主讲教师：卢涛.

Presentation on theme: "第19章　药物研究的生物化学基础 主讲教师：卢涛."— Presentation transcript:

1 第19章　药物研究的生物化学基础 主讲教师：卢涛

2 19.1 生物药物制造的生物化学基础 19.1.1 生物药物制备方法的特点 19.1.2 生物合成技术原理 19.1.3 生物技术原理
19.1　生物药物制造的生物化学基础 19.1.1　生物药物制备方法的特点 19.1.2　生物合成技术原理 19.1.3　生物技术原理 　　生物技术又叫生物工程，是利用生物有机体或其组成部分发展新产品或新工艺的一种技术。生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程。

3 重组DNA技术又称基因工程，其过程包括：
①目的基因的获取； ②基因载体的选择与构建； ③目的基因与载体的拼接； ④重组DNA导入受体细胞； ⑤筛选并无性繁殖含重组体的受体细胞； ⑥细胞的大量培养与目的蛋白的生产。

4 以 质 粒 为 载 体 的 DNA 克 隆 过 程

5 （一）基因载体 定义：为携带目的基因，实现其无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。 常用载体：质粒DNA 　　　　　噬菌体DNA 　　　　　病毒DNA

6 质粒 （plasmid） 特点: 能在宿主细胞内独立自主复制；带有某些遗传信息, 会赋予宿主细胞一些遗传性状。

7

8 （二）目的基因的来源 1．直接从染色体DNA分离 2．人工合成 3．从mRNA合成cDNA 4．基因文库

9 （三）限制性内切酶的应用 定义 限制性核酸内切酶（RE）是识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 Bam HⅠ GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G +

10 Ⅱ类酶识别序列特点—— 回文结构 GGATCC CCTAGG 切口 ：平端切口、粘端切口

11 + + GTCGAC CAGCTG GGATCC CCTAGG GTC CAG GAC CTG GATCC G G CCTAG HindⅡ
Bam HⅠ GTCGAC CAGCTG GGATCC CCTAGG GTC CAG GAC CTG GATCC G + + G CCTAG 平端切口 粘端切口

12 （四）重组体的构建 1．粘性末端连接：包括同一限制酶切割位点连接和不同限制性内切酶位点连接；DNA连接酶催化。方式：同一限制酶切割位点连接和配伍末端连接。 2．平端连接：DNA连接酶催化，适用于限制性内切酶切割产生的平端和粘端补齐或切平形成的平端。 3．同聚物加尾连接：由末端转移酶加同聚物序列再粘端连接。 4．人工接头连接：由平端加上新的酶切位点，再用限制酶切除产生粘性末端，而进行粘端连接。

13 （五）重组体的转化 受体菌条件 安全宿主菌 限制酶和重组酶缺陷 处于感受态（competent） 导入方式 转化 （transformation） 转染 （transfection） 感染 （infection）

14 （六）重组体的筛选与鉴定 1．根据重组体的表型进行筛选 2．限制酶切图谱分析鉴定 3．利用核酸杂交技术鉴定

15 DNA重组技术的主要应用： ①大量生产基因工程药物； ②定向改造生物的基因结构，构建高产菌株，改造传统制药工艺； ③用于基础研究。

16 19.2　药物质量控制的生物化学基础（自学） 19.3　药理学研究的生物化学基础（自学） 19.4　与药物设计有关的生物化学原理 （自学）