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生物化學實驗 蛋白質濃度定量法 Biochemistry Lab 2016 陳威戎 2016. 11. 30
純化酵素是一件非常基本的工作，很多重要的研究，都脫不開酵素的純化工作。而大多數酵素的純化，基本上也脫不開一些最基本的原則。 首先，建立一個完善的酵素實驗室是很必要的；我們把許多實驗室內的運作細節一一交代，期望同學能認知這些經驗，確實接收並養成習慣，且期望應用到將來每個人的研究工作上。 最先遇到，但是最容易被忽視的步驟，就是材料處理及總蛋白質的抽取。將提醒你小心選擇採料的種類、時期、部位等，並選擇一個良好的粗抽取方式，以便有一個良好的開始。 蛋白質濃度定量法 陳威戎
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a N-C-C-N-C-C-N-C-C ■ 蛋白質構造的骨架： O R R O O N C O R O - R R + O R
H R O O N C O R O - R R H + O R 說明文字 O O R O R COO - H3N + O O O a H N-C-C-N-C-C-N-C-C R group
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4 5 1 3 2 ■ 各 種 蛋 白 質 定 量 法 原 理 ： Coomassie Brilliant Blue G
HN NH2 NH2+ Specific Binding Group -N=N- -NH- -OH -SO3- SO3- Arg Heme C NH3+ Lys Fe -N=N- -NH- -OH -SO3- SO3- R O H + N C - 活性區 Metal 說明文字 M 206 nm (carbonyl) C O NH2 H2N 1 C OH.. Tyr Cu2+ Cu+ 3 尿素 urea 280 nm (aromatic) Biuret Methods (carbonyl) Phosphomolybdic- phosphotungstate 2 UV Absorbance Lowry Methods
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Coomassie Brilliant Blue G-250
■ Bradford Method： Coomassie Brilliant Blue G-250 470 nm CBG 是一種指示劑 595 nm 說明文字 加入蛋白質 酸性環境下呈茶色 與蛋白質結合變藍色
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■ BCA (bicinchoninic acid) method：
說明文字
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