水果和蔬菜中101种农药多残留测定方法 —气相色谱-质谱法

Presentation on theme: "水果和蔬菜中101种农药多残留测定方法 —气相色谱-质谱法"— Presentation transcript:

1 水果和蔬菜中101种农药多残留测定方法 —气相色谱-质谱法

2 前 言 由于色谱仪仅靠物质的保留时间进行定性分析，并不能得到分子结构的信息；当样品复杂时，许多组份之间的保留时间只差数秒，甚至重合，就很难判定目标化合物了。 即使分析者用两根色谱柱进一步确认分析对象，“其分析结果对于确认目标化合物的确认能力也是有限”。

3 GC/MS联用技术可以在色谱峰不完全分离的情况下，用质量色谱法和选择离子检测，对其中的化合物分别定量；
目前，国际上要求检测的多种农药，其中很大部分可用气质联机检测。

4 我中心在查阅国外大量相关文献的基础上，引进国外GC-MS农药多残留快速检测技术，根据我国国情做了相应改进，建立了一套适合我国国情的蔬菜和水果中GC-MS农药多残留快速检测技术。

5 1 适用范围 本方法适用于常见蔬菜和水果中（苹果，西红柿，白菜，油菜，胡萝卜，卷心菜，茄子，菠菜，尖椒和韭菜）101种农药残留量的测定。
1 适用范围 本方法适用于常见蔬菜和水果中（苹果，西红柿，白菜，油菜，胡萝卜，卷心菜，茄子，菠菜，尖椒和韭菜）101种农药残留量的测定。 本方法的最低检出限为0.0010mg/kg mg/kg（参见附录A）。

6 2 原理 试样用丙酮和二氯甲烷（4：3）的混合溶液匀浆提取，无水硫酸钠干燥后，经凝胶色谱和固相萃取柱净化，用丙酮+乙酸乙酯（1：1）洗脱农药，采用气相色谱-质谱联用仪检测。

7 3 试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认的分析纯试剂和GB/T 6682中规定的至少三级的水。 3.1 环己烷，色谱纯；
3 试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认的分析纯试剂和GB/T 6682中规定的至少三级的水。 3.1 环己烷，色谱纯； 3.2 丙酮； 3.3 二氯甲烷； 3.4 石油醚； 3.5 乙酸乙酯，色谱纯； 3.6 无水NaSO4 ：450℃烘4h ； 3.7 NaCl：140℃烘4h ； 3.8 内标化合物：Chrysene； 3.9 固相萃取柱：Enxi-Carb 活性炭柱， 6mL, 0.5g或相当柱； 3.11 农药标准品共101种，纯度≥96% 。

8 3.12 农药标准溶液配制 单一农药标准溶液：准确称取一定量农药标准品，用溶剂(丙酮、正己烷和甲醇）稀释，逐一配制成1000 mg/L或2500mg/L的单一农药标准储备液，贮存在-18℃以下冰箱中。 农药混合标准溶液：逐一吸取一定体积的单个农药储备液分别注入同一容量瓶中，用溶剂(正己烷）稀释至刻度配置成同一浓度（10 mg/L)的农药混合标准储备液。使用前用溶剂(环己烷)稀释成所需浓度的标准工作液（1 mg/L) 。

9 4 仪器 4.1 气相色谱—质谱联用仪：配有电子轰击源（EI）；
4 仪器 4.1 气相色谱—质谱联用仪：配有电子轰击源（EI）； HP 6890N/5973 GC-MS，配有四极杆质量分析器 和自动进样器，载气流量或压力控制，工作站及数据处理软件。 4.2 凝胶色谱仪：色谱柱，17×250mm；填料，SX-3， g；流动相，环己烷/乙酸乙酯（1:1，V/V）；定量环，2mL。 天 平：Sartorius分析天平（精确度0.0001g）； 4.3 匀浆机：IKA-WERKE； 4.4 旋转蒸发仪。

10 5 试样的制备与保存 5.1 试样的制备 取不少于1 000g蔬菜水果样品，取可食部分，用干净纱布轻轻擦去样品表面的附着物，采用对角线分割法取对角部分，将其切碎，充分混匀后放入食品加工器粉碎，制成待测试样，密封，标明标记。 5.2 试样的保存 将试样冷冻保存。

11 6 测 定 步 骤 6.1 提 取 6.2 净 化 6.3 浓 缩 6.4 测 定 6.5 平 行 试 验 6.6 空 白 试 验

12 7 结果计算 （1）由工作站按内标法自动计算 ； （2）试样中被测农药残留量以质量分数ω计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按以下公式计算： V1  A  V3 ω= S V2  AS  m S——标准溶液中农药的含量，mg/L； A—— 试样中被测农药的峰面积； AS——农药标准溶液中被测农药的峰面积； V1——提取溶剂总体积； V2——吸取出用于检测的提取溶液的体积； V3——试样定容体积； m——试样的质量。

13 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的15 %。

14 9 准确度 在添加浓度在0.05mg/kg-0.5mg/kg范围内，大多数化合物的平均回收率>70%，相对标准偏差<20%，完全满足多残留快速检测的要求。

15 大白菜中10种农药的添加回收率 A组 B组

16 技术路线 称样 6g氯化钠+140mL丙酮:二氯甲烷 匀浆提取 取70mL上清夜 无水硫酸钠干燥 浓 缩 GPC净化 活性炭净化 浓 缩
GC-MS

17 谢 谢！

18 静置后，将上清液倾倒在装有20克无水硫酸纳的锥型瓶中，干燥30分钟（每隔5分钟摇晃一次） 准确量取提取液70ｍＬ，过装有无水硫酸钠的玻璃漏斗
6.1 提 取 称取20克试样+氯化钠6克+4：3的丙酮和二氯甲烷140毫升 匀浆提取一分钟 静置后，将上清液倾倒在装有20克无水硫酸纳的锥型瓶中，干燥30分钟（每隔5分钟摇晃一次） 准确量取提取液70ｍＬ，过装有无水硫酸钠的玻璃漏斗 用二氯甲烷淋洗无水硫酸钠近无色，合并淋洗液于圆底烧瓶 将提取液浓缩近干（水浴温度≤38℃）

19 6.2 净 化 由于各种蔬菜的性质不同，干扰因素有很大的差别，因此不同的蔬菜要采取不同的净化方法。
6.2 净 化 由于各种蔬菜的性质不同，干扰因素有很大的差别，因此不同的蔬菜要采取不同的净化方法。 （1）对于色素含量较低的蔬菜（苹果、西红柿、大白菜等），经活性炭固相萃取柱净化。 （2）对于色素含量较高的蔬菜（菠菜、韭菜等），先过凝胶色谱，再用活性炭固相萃取柱净化;

20 进样6min后开始接收流出液，20min后（接收60 mL）停止接收
6.2.1 凝胶过滤 将提取液浓缩后用环己烷定容到2.0 mL 上样 用1：1的环己烷和乙酸乙酯淋洗 流速3.0 mL/min 进样6min后开始接收流出液，20min后（接收60 mL）停止接收 将流出液浓缩近干，准备过活性炭小柱

21 6.2.2 固相萃取 固定相活化 Conditioning 上样 Load sample
固相萃取 固定相活化 Conditioning 先用5mL的乙酸乙酯，5mL丙酮和乙酸乙酯混合液（１：１）分别预淋洗小柱，淋洗液弃去 ； 上样 Load sample 用3 mL石油醚溶解提取液上样,流出液接收到KD瓶中； 洗脱 Analyte elution 用1：1的丙酮和乙酸乙酯淋洗液35mL洗脱样品，洗脱液接收到KD瓶中。

22 6.3 浓 缩 用旋转蒸发仪将洗脱液浓缩至〈0.5 mL，添加内标（进样浓度1μg/ｍＬ）并用环己烷定容到0.5mL（在ＫＤ瓶中），混匀，用于GC-MS测定。

23 6.4 测 定 6.4.1 仪 器 条 件 6.4.2 定 性 测 定 6.4.3 定 量 测 定

24 6.5 平 行 试 验 按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。 6.6 空 白 试 验 除不称取试样外，均 按以上步骤进行。

25 6.4.1 仪 器 条 件 a) 色谱柱: HP-5MS柱，30 m×0.25 mm×0.25μm；
仪 器 条 件 a) 色谱柱: HP-5MS柱，30 m×0.25 mm×0.25μm； b) 色谱柱温度程序: 60℃（保持2 min）15℃/ min 150℃ 6℃/ min 280℃（15.33min）； c) 载气：氦气，纯度≥99.999%，流速为1 mL/ min 。

26 仪 器 条 件 d) 进样口温度： 260℃ ； e) 进样方式 ：不分流进样，由自动进样器进样； f) 进样量： 1μL ；

27 6.4.1 仪 器 条 件 g) 离子源温度: 230 ℃； h) 分析器温度: 150℃； i) GC-MS接口温度: 280℃；
仪 器 条 件 g) 离子源温度: 230 ℃； h) 分析器温度: 150℃； i) GC-MS接口温度: 280℃； j) 电子轰击源: 70eV ;

28 6.4.1 仪 器 条 件 k) 扫描方式：选择离子（SIM） 。 每种化合物分别选择1个定量离子，2个- 3个定性离子。
仪 器 条 件 k) 扫描方式：选择离子（SIM） 。 每种化合物分别选择1个定量离子，2个- 3个定性离子。 根据保留时间将 101种农药分成两组，每组所需检测的离子按照出峰顺序，分时段分别检测。 溶剂延迟5min。 每组化合物的保留时间、定性离子、定量离子参见附录B；

29 6.4.2 定 性 测 定 保留时间 保留时间误差小于0.02min ； 选择特征离子 所选特征离子的相对丰度变化在规定范围内； 质谱定性
定 性 测 定 保留时间 保留时间误差小于0.02min ； 选择特征离子 所选特征离子的相对丰度变化在规定范围内； 质谱定性 质谱图库检索匹配应在70%以上。

30 101种标样选择离子色谱图

31 苹果中101种农药选择离子色谱图

32 西红柿中101种农药选择离子色谱图

33 大白菜中101种农药选择离子色谱图

34 6.4.3 定 量 测 定 本方法采用内标法单离子定量测定，利用选择特征离子进行定量分析 ； 内标物为 Chrysene ；
定 量 测 定 本方法采用内标法单离子定量测定，利用选择特征离子进行定量分析 ； 内标物为 Chrysene ； 注：标准溶液的浓度应与待测化合物的浓度相近。 基质效应强的试样，用空白基质提取液配制基质混合标准工作溶液。

35 附 录 A 101种农药中英文名称和方法检出限 序号 中文名称 英文名称 检出限/ （mg/kg） 1 敌敌畏 dichlorvos
0.0046 2 乙酰甲胺磷 acephate 0.0269 3 速灭威 mevinphos 0.0105 4 氧化乐果 omethoate 0.0661 5 残杀威 isocarb 0.0082 6 丙线磷 ethoprophos 0.0051 7 二溴磷 dibrom 0.0481 8 久效磷 monocrotophos 0.0467 9 甲拌磷 phorate 0.0014 10 氯硝胺 dichloran 0.0117 11 西玛津 simazin 0.0028 12 莠去津 atrazine 0.0025 13 γ-666 3-BHC 0.0056 14 特丁磷 terbufos 0.0069 15 地虫磷 fonofos 0.0050 16 二嗪磷 diazinon 0.0139 17 乙拌磷 disulfoton 18 百菌清 chlorthalonil 0.0011 19 抗蚜威 pirimicarb 0.0049 20 除线磷 diclofenthion 0.0400 21 乙烯菌核利 vinclozolin 0.0013 22 甲基对硫磷 methyl-parathion 23 西维因 carbaryl 0.0042 24 对氧磷 paraoxon 0.0022 25 杀螟硫磷 fenitrothion 0.0035 26 抑菌灵 dichlofluanid 0.0032 27 艾氏剂 aldrin 0.0024 28 毒死蜱 chlorpyrifos 0.0370 29 三氯杀螨醇 dicofol 0.0071 30 三唑酮 triadimefon 0.0089 31 溴硫磷 bromophos 32 敌菌灵 anilazine 0.3488 33 甲基硫环磷 mephosfolan 0.0083 34 喹硫磷 quinalphos 0.0087 35 乙基溴硫磷 bromophos-ethyl 0.0018 36 α-硫丹 Thiodan-1 0.0088 37 丁草胺 butachlor 0.0085 38 丙溴磷 profenofos 39 狄氏剂 dieldrin 0.0044 40 b-硫丹 0.0153

36 ethyl-azinphosmethyl chlorpyriphos-methyl
序号 中文名称 英文名称 检出限/ （mg/kg） 41 PP-DDD pp'-ddd 0.0047 42 乙硫磷 ethion 0.0024 43 伐灭磷 famphur 0.0015 44 PP-DDT pp'-DDT 0.0084 45 亚胺硫磷 phosmet 0.0050 46 苯硫磷 EPN 0.0052 47 联苯菊酯 Bifenthrin 0.0016 48 甲氰菊酯 fenpropathrin 0.0156 49 伏杀磷 phosalone 0.0051 50 乙基谷硫磷 ethyl-azinphosmethyl 0.0230 51 二氯苯醚 Cis-permethrin 0.0847 52 trans-permethrin 0.0022 53 氟氯氰菊酯 cyfluthrin-1 0.0222 54 cyfluthrin-2 0.0058 55 cyfluthrin-3 0.0057 56 cyfluthrin-4 0.0430 57 氰戊菊酯 trans-fenvalerate 0.0196 58 cis-fenvalerate 0.0802 59 甲胺磷 methamphetamine 0.0304 60 速灭磷 mevinphos 0.0038 61 异丙威 etrofolan 0.0045 62 仲丁威 baycarb 0.0040 63 氯苯胺灵 DOW-K-6882 0.0137 64 百治磷 dicrotophos 0.0135 65 治螟鳞 sulfotep 66 α-666 a-BHC 0.0092 67 六氯苯 hexachlorobenzene 68 乐果 dimethoate 0.0145 69 克百威 carbofuran 0.0019 70 β-666 b-BHC 0.0055 71 五氯硝基苯 quintozene 72 巴胺磷 propetamphos 0.0122 73 磷胺-1 phosphamidon-1 0.0233 74 δ-666 4-BHC 0.0111 75 敌稗 propanil 0.0099 76 磷胺-2 phosphamidon-2 0.0097 77 甲基毒死蜱 chlorpyriphos-methyl 0.0017

37 附 录 A（续） 序号 中文名称 英文名称 检出限/ （mg/kg） 78 3-羟基克百威 3-hydrxy cabofuran
中文名称 英文名称 检出限/ （mg/kg） 78 3-羟基克百威 3-hydrxy cabofuran 0.0655 79 七氯 heptachlor 0.0030 80 皮蝇磷 fenchlorophos 0.0039 81 甲基嘧啶磷 pirimiphos-methyl 0.0480 82 马拉硫磷 malathion 0.0089 83 倍硫磷 fenthion 0.0018 84 对硫磷 parathion 0.0014 85 毒壤磷 trichloronate 0.0026 86 嘧啶硫磷 pirimiphos 87 硫环磷 phosfolan 0.0052 88 异柳磷 isophenphos 0.0192 89 杀扑磷 methidathion 0.0091 90 OP-DDE op.-DDE 0.0110 91 杀虫畏 tetrachlorvinphos 92 灭菌磷 plondrel 93 PP-DDE pp'-DDE 94 OP-DDD op'-DDD 0.0010 95 异狄氏剂 endrin 0.0063 96 乙酯杀螨醇 chlorobenzilate 0.0073 97 OP-DDT op'-DDT 0.0011 98 三唑磷 Hostathion 0.0065 99 克瘟散 ediphenphos 0.0056 100 异菌脲 iprodione 0.0023 101 胺菊酯 Tetramethrin-1 0.0186 102 Tetramethrin-2 0.0025 103 谷硫磷 Azinphosmethyl 0.0103 104 三氟氯氰菊酯 lambda-cyhalothrin 0.0114 105 定菌磷 pyrazophos 0.0105 106 蝇毒磷 coumaphos 107 氯氰菊酯 cypermethrin-1 0.0246 108 cypermethrin-2 0.0228 109 cypermethrin-3 0.0221 110 cypermethrin-4 0.0429 111 氟胺氰菊酯 fluvalinate-1 0.0048 112 fluvalinate-2 0.0137 113 溴氰菊酯 deltamethrin-1 0.0165 114 deltamethrin-2 0.0183

38 附 录 B 101种农药和内标化合物的保留时间 、 定量离子 、 定性离子
编号 药名 保留时间 定量离子 定性离子1 定性离子2 定性离子3 1 敌敌畏 8.082 185 109 145 2 乙酰甲胺磷 10.064 136 94 183 3 速灭威 10.414 108 79 77 4 氧化乐果 12.118 156 110 141 5 残杀威 152 6 丙线磷 12.745 158 139 200 242 7 二溴磷 13.1 8 久效磷 13.437 164 127 192 9 甲拌磷 13.614 260 231 121 97 10 氯硝胺 14.06 206 176 124 160 11 西玛津 14.254 201 186 173 12 莠去津 14.408 215 13 γ-666 14.665 181 221 14 特丁磷 14.837 153 288 15 地虫磷 14.922 246 137 16 二嗪磷 15.203 304 179 17 乙拌磷 15.311 274 142 18 百菌清 15.505 266 268 19 抗蚜威 15.963 166 238 72 20 除线磷 16.288 279 251 223 21 乙烯菌核利 16.557 285 212 198 22 甲基对硫磷 263 125 109.1 23 西维因 16.7 144 115 116 24 对氧磷 16.957 275 149 247 25 杀螟硫磷 17.385 277 26 抑菌灵 17.614 224 167 226 27 艾氏剂 17.757 293 329 331 28 毒死蜱 18.031 314 286 258 29 三氯杀螨醇 18.065 250

39 附 录 B （续） 编号 药名 保留时间 定量离子 定性离子1 定性离子2 定性离子3 30 三唑酮 18.391 208 181 293
31 溴硫磷 18.534 331 329 125 32 敌菌灵 19.008 239 241 178 33 甲基硫环磷 19.225 196 168 140 34 喹硫磷 19.34 146 157 298 35 乙基溴硫磷 19.825 359 303 36 α-硫丹 20.043 339 341 265 37 丁草胺 20.191 176 160 188 237 38 丙溴磷 20.7 374 297 39 狄氏剂 20.808 345 263 277 40 b-硫丹 21.732 41 PP-DDD 22.026 235 165 42 乙硫磷 22.22 231 153 384 43 伐灭磷 22.79 218 217 44 PP-DDT 23.123 199 45 亚胺硫磷 24.528 133 161 内标物 24.568 228 46 苯硫磷 24.66 169 323 47 联苯菊酯 24.774 166 48 甲氰菊酯 24.946 349 49 伏杀磷 25.688 367 182 154 50 乙基谷硫磷 26.711 132 105 51 二氯苯醚 27.488 183 163 184 52 27.706 53 氟氯氰菊酯 28.46 226 206 54 28.62 55 28.746 56 28.797 57 氰戊菊酯 30.443 225 167 419 58 30.814

40 附 录 B （续） 编号 药名 保留时间 定量离子 定性离子1 定性离子2 定性离子3 59 甲胺磷 7.865 141 94 126 60
60 速灭磷 10.048 192 164 127 61 异丙威 11.425 121 136 91 62 仲丁威 12.38 150 107 63 氯苯胺灵 12.957 213 171 154 64 百治磷 13.277 193 237 65 治螟鳞 13.494 322 294 266 66 α-666 13.734 219 181 183 67 六氯苯 13.94 284 286 282 68 乐果 14.122 87 125 229 69 克百威 14.323 149 131 70 β-666 14.494 217 254 71 五氯硝基苯 14.86 295 265 72 巴胺磷 14.81 236 194 138 73 磷胺-1 15.254 264 74 δ-666 15.357 75 敌稗 16.254 161 163 76 磷胺-2 16.334 77 甲基毒死蜱 16.551 288 78 3-羟基克百威 16.6 137 180 151 79 七氯 16.751 272 337 80 皮蝇磷 16.985 285 109 81 甲基嘧啶磷 17.465 290 305 276 82 马拉硫磷 17.734 173 158 83 倍硫磷 17.96 278 153 84 对硫磷 17.957 291 263 235 85 毒壤磷 18.123 297 269

41 附 录 B （续） 编号 药名 保留时间 定量离子 定性离子1 定性离子2 定性离子3 86 嘧啶硫磷 18.723 333 318 304
109 87 硫环磷 19.134 255 182 210 88 异柳磷 19.277 213 185 89 杀扑磷 19.734 145 157 302 90 OP-DDE 19.843 316 176 91 杀虫畏 20.071 329 331 92 灭菌磷 20.248 299 243 148 130 93 PP-DDE 20.803 246 94 OP-DDD 21.043 235 165 237 95 异狄氏剂 21.448 345 317 265 96 乙酯杀螨醇 21.763 251 139 253 97 OP-DDT 22.031 98 三唑磷 22.597 162 172 257 99 克瘟散 22.934 310 173 100 异菌脲 24.357 314 245 187 101 胺菊酯 24.551 164 123 135 内标物 24.568 102 24.763 103 谷硫磷 25.683 160 132 125 104 三氟氯氰菊酯 26.386 181 197 141 105 定菌磷 26.717 373 221 232 106 蝇毒磷 27.82 362 226 334 107 氯氰菊酯 28.957 180 152 108 29.111 29.231 110 29.289 111 氟胺氰菊酯 30.826 250 252 112 30.951 113 溴氰菊酯 31.44 114 31.883

42 苹果空白

43 大白菜空白

44 西红柿空白