琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 目的与要求： 了解琥珀酸脱氢酶的作用及酶促反应 中的竞争性抑制作用 了解琥珀酸脱氢酶的作用及酶促反应 中的竞争性抑制作用
实验原理： 肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶，能催化琥珀酸脱氢转变为延胡 索酸（三羧酸循环，线粒体）。反应中生成的 FADH 2 可使甲烯蓝 还原为甲烯白。 丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂，与琥珀酸的分子结构 相似，与酶的亲合力高。丙二酸与酶结合后，酶活性受到抑制， 则不能催化琥珀酸的脱氢反应。 本实验以甲烯蓝为受氢体，在隔离空气条件下，以甲烯蓝褪色 程度来观察、判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用。
操作步骤： 酶提取液的制备 酶促反应管的制备 37 ℃酶促反应，观察甲烯蓝褪色程度
实验结果： 间隔 10 分钟，记录各管甲烯蓝褪色程度，解释结果。注意事项： 充分碾磨家兔肌肉，碾磨器械、纱布要及时清洗。 滴加液体石蜡时，倾斜试管，避免产生气泡。 观察结果时不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝。
改良 Mohum 法测定谷 - 丙转氨酶活性 目的与要求： 了解 Mohum 法测定谷 - 丙转氨酶活性的原理及测定方法
实验原理： 利用丙氨酸和 α- 酮戊二酸为底物，在转氨酶作用下生成 丙酮酸和谷氨酸，再利用 2, 4- 二硝基苯肼与丙酮酸反应，生 成棕色的丙酮酸二硝基苯肼，在 520nm 波长测定其光密度， 与经同样处理标准丙酮酸溶液比较，即可计算谷 - 丙转氨酶的 活性。 血清谷 - 丙转氨酶活性单位定义：每毫升血清在 pH 值 7.4 ， 37 ℃保温条件下与底物作用 30min 后，每生成 2.5ug 的丙酮 酸为 1 谷 - 丙转氨酶单位，正常值为 2-40 单位 /ml 。
实验步骤： 见书 Page 77 酶活性测定表格。实验结果： 谷丙转氨酶活性单位 =A 测定管 /A 标准管 * 标准管中丙酮 酸含量 *10/2.5 。
注意事项： 保温温度和时间要精确，即谷丙转氨酶发 挥催化作用环境。 酶活性单位。 微量移液器的使用。