实验室废弃物分类 生物物理研究所 2015年

生物安全实验室等级 生物物理研究所生物安全实验室现状 生物安全1级（BSL- 1实验室） 98% 定义： 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。 包含微生物举例：大肠杆菌、格鲁伯耐格里原虫、感染性犬肝炎病毒、枯草杆菌

实验室设计及建造 *实验室应设洗手池（靠近出口处）。 *实验室围护结构内表面应易于清洁。 *地面应防滑、无缝隙，不得铺设地毯。 *实验室中的家具应牢固。应有专门放置生物废弃物容器的台（架）。 *实验室台表面应不透水，耐腐蚀、耐热。 *实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。

生物安全实验室等级 生物物理研究所生物安全实验室现状 生物安全-2级（BSL-2实验室）1% 定义： 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。 包含微生物举例：麻疹病毒、沙门氏菌、弓形体、乙型肝炎病毒、衣原体、志贺氏菌

BSL-2实验室 满足一级实验室（标准微生物操作规程）各款要求，在此基础上特别注意： 制定出入制度。 实验室入口贴上生物危险标志。 制定实验室特定的生物安全操作规则。 每年一次最新培训制度。

实验室废弃物分类 实验室废弃物：是指在实验室日常研究、实验和生活中产生的，已失去使用价值的气态、固态、半固态及盛装在容器内的液态物品。 主要包括实验过程中产生的三废（废气、废液、废固）物质、实验用剧毒物品以及麻醉品、药品的残留物、放射性废弃物和实验动物尸体及器官等。

实验室废弃物特性 量少 种类繁多 具尖端性及前瞻性 形态复杂 具毒性物质 腐蚀性 爆炸性 具感染性

实验室生物性废弃物分类 一、感染性废弃物 1、可燃感染性废弃物 2、不可燃感染性废弃物 3、液态 4、动物尸体 二、非感染性废弃物 1、灭菌 2、不需灭菌

实验室生物性废弃物分类 一、感染性废弃物 1、可燃感染性废弃物 1）实验过程使用或产生的 2）实验中接触过的 3）生物安全-2级实验室 4）其他

国外实验室通常做法： 生物样本废弃物 所有的生物样本（包括工程细菌、动物和人类的细胞、组织）废弃物都必须放置于特定的红色生物样本废弃物袋中，并在高压高温炉里经过高压高温处理，放置于特定的垃圾桶内，由相关环境部门运走进一步处理。 另外，在实验过程中废弃的细胞或组织培养液一律先加入漂白剂(bleach)灭活的后才能倒入水池或下水道。

实验室生物性废弃物分类 一、感染性废弃物 2、不可燃感染性废弃物 1）废弃利器等 利器：尖锐器械废物（如针头、缝合针、刀片、玻璃等），务必放入防穿刺的专用容器内，并在容器外标明“尖锐物品”、实验危险标志、负责人姓名、所属研究组。 2）其他

利器处理 针筒和解剖刀应置于利器盒內 一次性容器：带盖的不易刺破 装量：容量的四分之三 焚烧，或先高压灭菌处理 不能焚烧的，消毒后集中填埋。 某些需作毁形处理

实验室生物性废弃物分类 一、感染性废弃物 3、液态 实验室过程产生的（经处理后） 气体和液体：感染性气体、气溶胶、液体务必经无害化处理后排放,应符合国家相关的要求。

实验室液体废弃物分类 一般废水。指冷却水及清洗用水 实验废液。依性质可分为： （1）化学性实验废液； (2)生化性实验废液； (3)物理性实验废液（过热、过冷…)； (4)放射性实验废液。

化学性废溶液分类 有机废液 油脂类 无机废液类 含卤素有机溶剂 不含卤素有机溶剂 含甲醛有机溶剂 固体废弃物 酸碱废液 含水银废弃物 含金属废液 含氟,氰,六价铬废液 pH ≦ 2 or pH > 12

大量废弃物混合填装前做废液相容性试验

液体废弃物贮存原则 水反应性类需单独贮存 空气反应性类需单独贮存 氧化剂类需单独贮存 氧化剂与还原剂需分开贮存 酸液与碱液需分开贮存 氰系类与酸液需分开贮存 含硫类与酸液需分开贮存 碳氢类溶剂（洗涤剂）与卤素类溶剂需分开贮存

常用的分类贮存容器 固体有毒废物 无机腐蚀性废液 有机可燃性废液

含EB（Ethidium bromide，溴化乙锭）的废弃凝胶 用途：在电泳实验或其他核酸分离实验中，常用EB作非放射性的Marker，来识别和显示核酸条带。EB是一种深红色不易挥发的晶体，微溶于水。当被紫外线照射时能发出红褐色的荧光。尽管EB是一种高效的显色剂，但它的高危险性要求特殊的安全管理和回收流程。 人体危害  EB是一种强诱变剂（可能造成遗传性危害），直接接触有中等毒性。EB可以通过皮肤吸收，因此应当避免一切与EB的直接接触。EB对皮肤，眼睛，口腔和上呼吸道系统有刺激性作用。应将EB安全密封，并密闭存放于干燥避光处。 需要专门收集专门处理，否则危害极大！！！

实验室生物性废弃物分类 一、感染性废弃物 4、动物尸体 生物物理所规定 教学和科研实验活动所产生的待处置实验动物尸体及其废弃物，应使用统一的塑料袋密封并暂存于专用冰柜中。要求在冰柜显著位置标示“实验动物尸体及废弃物专用”字样并如实填写“动物尸体及废弃物存放登记表”，冰柜内不得放置其它物品。

实验室的垃圾分类 二、非感染性废弃物（一般垃圾处理） 1、灭菌 菌株及接触菌株等耗材 2、不需灭菌 未接触菌株等耗材

采用化学消毒处理技术的地区，医疗废物的包装袋应当符合以下要求： 包装袋分为黄色和红色两种，黄色袋盛装感染性废物及病理性废物，适用于化学消毒处理。红色袋盛装药物性和化学性废物，不适用于化学消毒处理，收集时红色袋应单独收集。 包装袋上应有医疗废物的中文标识，标识内容应包括：医疗废物产生单位、产生日期、废物类别、警示标识等。 包装袋在正常使用时应能够防止破损，并不与盛装设备材质发生化学反应。

医疗实验室废弃物处理流程 生物废弃物 各实验室分类、暂存

中华人民共和国固体废物污染环境防治法（2004修订） 国主席令[2004]第三十一号

生物性废弃物贮存和处理 遵循国家“医疗废物化学消毒集中处理工程技术规范（试行）（2006）” 感染性废物、病理性废物、损伤性废物、药物性废物及化学性废物不能混合收集。少量的药物性废物可以混入感染性废物，但应当在标签上注明 根据生物废物的类别，将生物废物分置于符合《医疗废物专用包装物、容器的标准和警示标识的规定》的包装物或者容器内； 在盛装生物废物前，应当对废物包装物或者容器进行认真检查，确保无破损、渗漏和其他缺陷

Thanks

分子生物学实验安全常识 1.1化学试剂的安全使用 EB EB是一种强诱变剂（可能造成遗传性危害），直接接触有中等毒性。EB可以通过皮肤吸收，因此应当避免一切与EB的直接接触。EB对皮肤，眼睛，口腔和上呼吸道系统有刺激性作用。应将EB安全密封，并密闭存放于干燥避光处。 Trizol 提取组织和细胞RNA的一种重要试剂，在提取RNA时一定要在通风橱进行。如皮肤接触Trizol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，废液埋入地下。

(Diethylprocarbonate) 分子生物学实验安全常识 1.1 化学试剂的安全使用 DEPC (Diethylprocarbonate) (二乙基焦碳酸酯) RNA酶的强抑制剂，一种潜在的致癌物质。操作时戴口罩，在通风橱中进行。沾到手上立即冲洗，废液通过废液道排泄。 CHCl3（Chloroform，氯仿） 常用于DNA和RNA提取，对皮肤、眼睛、黏膜和呼吸道有强烈的刺激作用和腐蚀性，易损害肝和肾。操作时戴手套在通风橱里进行，废液收集后埋入地下。 Acrylamide（丙烯酰胺） DNA测序、SSR及蛋白质分离等技术中作电泳支持物，具神经毒性，聚合后毒性消失。操作时戴手套在通风橱内进行，聚合后的聚丙烯酰胺凝胶没有毒性，可随普通垃圾一起扔掉，千万不要倒入下水道.。

分子生物学实验安全常识 1.1 化学试剂的安全使用 DMSO（二甲亚砜） 是一种既溶于水又溶于有机溶剂的非质子极性溶剂，常用作细胞的冻存液和配制AS。皮肤沾上之后用大量的水洗及1%~5%稀氨水洗涤。 十二烷基硫酸钠(SDS) 有毒，易损害眼睛。质粒提取时作裂解液破坏细胞膜和Southern杂交时的洗膜液中的去垢剂。戴合适的手套和安全护目镜，不要吸入其粉末。 TEMED 强神经毒性，防止误吸，操作时快速，存放时密封。

分子生物学实验安全常识 1.1化学试剂的安全使用 DTT 二硫苏糖醇 很强的还原剂，散发难闻的气味。可因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。当使用固体或高浓度储存液时，戴手套和护目镜，在通风橱中操作。 PMSF 苯甲基磺酰氟 一种高强度毒性的胆碱酯酶抑制剂。它对呼吸道黏膜、眼睛和皮肤有非常大的破坏性。可因吸入、咽下或皮肤吸收而致命。戴合适的手套和安全眼镜，始终在化学通风橱里使用。在接触到的情况下，要立即用大量的水冲洗眼睛或皮肤，已污染的工作服作为有害废物处理。 Triton X-100 引起严重的眼睛刺激和灼伤。可因吸入、咽下或皮肤吸收而受害。戴合适的手套和护目镜。

分子生物学实验安全常识 1.1化学试剂的安全使用 过硫酸铵 (NH4)2S2O8 对黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。操作时戴合适的手套、安全眼镜和防护服。始终在通风橱里操作，操作完后彻底洗手。 叠氮钠（NaN3） 毒性非常大。它阻断细胞色素电子运送系统。含有叠氮钠的溶液要标记清楚。可因吸入、咽下或皮肤吸收而损害健康。戴合适的手套和安全护目镜，操作时要格外小心。 吉姆萨（Giemsa） 染料咽下可致命或引起眼睛失明，通过吸入和皮肤吸收是有毒的。其可能的危险是不可逆的效应。戴合适的手套和安全护目镜。在化学通风橱里操作，不要吸入其粉末。

分子生物学实验安全常识 1.2微生物的危害及处理 生物安全 重点任务：实验室感染的控制、实验室对周围环境影响的控制以及实验室和感染性实验材料的管理控制。 生物安全 世界大多国家都是以致病微生物的危害程度进行分类，形成不同的实验室安全防护等级。我国一般以BSL-1 、BSL-2 、BSL-3 、BSL-4 表示实验室的相应生物安全防护水平;以ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3、ABSL-4 表示动物实验室的相应生物安全防护水平。 《病原微生物实验室生物安全管理条例》 《中华人民共和国传染病防治法》 《中华人民共和国传染病防治法实施办法》 《中华人民共和国国境卫生检疫法》 《中华人民共和国进出境动植物检疫法》 中华人民共和国卫生行业标准《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》 《实验室生物安全通用要求》 《动物病原微生物菌（毒）种保藏管理办法》 《高致病性动物病原微生物实验室生物安全管理审批办法》 我国实验室生物安全法规 随着生物学研究的不断深入，实验室工作人员不可避免地会接触或使用生物病原体。

动物病原微生物分类名录（2005年农业部令第53 号） 分子生物学实验安全常识 1.2微生物的危害及处理 动物病原微生物分类名录（2005年农业部令第53 号） 第三类： 多种动物共患病病原微生物：低致病性流感病毒、伪狂犬病病毒、破伤风梭菌、气肿疽梭菌、结核分支杆菌、副结核分支杆菌、致病性大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌、致病性链球菌、李氏杆菌、产气荚膜梭菌、嗜水气单胞菌、肉毒梭状芽孢杆菌、腐败梭菌和其他致病性梭菌、鹦鹉热衣原体、放线菌、钩端螺旋体。 水生动物病病原微生物：流行性造血器官坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、马苏大麻哈鱼病毒、病毒性出血性败血症病毒、锦鲤疱疹病毒、斑点叉尾鮰病毒、病毒性脑病和视网膜病毒、传染性胰脏坏死病毒、真鲷虹彩病毒、白鲟虹彩病毒、中肠腺坏死杆状病毒、传染性皮下和造血器官坏死病毒、核多角体杆状病毒、虾产卵死亡综合症病毒、鳖鳃腺炎病毒、Taura综合症病毒、对虾白斑综合症病毒、黄头病病毒、草鱼出血病毒、鲤春病毒血症病毒、鲍球形病毒、鲑鱼传染性贫血病毒。

分子生物学实验安全常识 1.2 微生物的危害及处理 第三类病原微生物是指能够引起人类或者动物疾病，但一般情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。 高致病性动物病原微生物是指来源于动物的、《动物病原微生物分类名录》中规定的第一类、第二类病原微生物。

分子生物学实验安全常识 1.2 微生物的危害及处理 重组核酸技术和生物安全 采用遗传工程技术人为设计出更多带有新型遗传物质的生物，既涉及到有生命活性的载体自身对实验室人员的生物安全，还存在大量投放于环境后的生物污染问题——此类问题造成的影响更是深远而不易觉察。 当考虑要构建或使用遗传修饰生物时，对实验室工作的危害度评估可能比从事遗传学正常生物（未修饰）工作的危害度评估更为重要，不能仅凭经验或未经验证的文献来评估此类生物的潜在危害。 例如：构建转基因动物常用的逆转录病毒载体，重组将外源基因转入体内的同时，伴随有致病性增强的过程。 必须经过验证明确所必需的生物安全级别，并对供体生物的特性、将要转移的核酸序列的性质、受体生物的特性以及环境特性做一综合评估，才能确定遗传修饰生物体所要求的生物安全水平，并做到安全操作目标基因。 重组核酸技术已经对生物学和医学产生巨大影响，且其影响正在加速扩大。利用原核生物、酵母、昆虫细胞等生命载体体外表达外源细胞因子或免疫物质，或者建立转基因生物，经过工厂式生产后，获得高浓度、高纯度的人用、动物用治疗或免疫预防制剂，是重组核酸技术遍及各个生命科学实验室的主要目的。而基因治疗领域的研究亦如火如荼，人们希望在将来其能成为一种可接受的治疗方法，为攻克某些顽疾建功立业。所有这些都涉及到

分子生物学实验安全常识 1.2 微生物的危害及处理 重组核酸技术和生物安全 生物表达系统：由符合一系列标准并可安全使用的载体和宿主细胞组成。如果所要插入的外源基因序列不要求更高级别的生物安全水平，大部分常规遗传工程实验可以按BSL-1安全操作大肠杆菌工程菌。用于基因治疗和有效转移基因到组织培养细胞的病毒载体，大多是复制缺陷型的，但操作时应采用与构建这些载体时的亲本病毒相同的生物安全水平。携带外源性遗传信息的动物（转基因动物）应当在靶基因编码产物特性的防护水平下进行操作，定点缺失特性基因的动物（基因敲除动物）一般不表现特殊的生物危害。 基因产物是否具有潜在的药理学活性是必须考虑的一项重要因素。比如，克隆、表达编码毒素的基因就需要较高的生物安全水平，因为当采用病毒载体过量表达这些毒素蛋白时有可能产生难以预料的后果。 危害度评估：一种动态过程，必须密切跟踪该生物因子研究的最新进展，一旦获得载体/宿主的新信息时，需要随时将相关工作归入更高或更低的生物安全水平。 重组核酸技术已经对生物学和医学产生巨大影响，且其影响正在加速扩大。利用原核生物、酵母、昆虫细胞等生命载体体外表达外源细胞因子或免疫物质，或者建立转基因生物，经过工厂式生产后，获得高浓度、高纯度的人用、动物用治疗或免疫预防制剂，是重组核酸技术遍及各个生命科学实验室的主要目的。而基因治疗领域的研究亦如火如荼，人们希望在将来其能成为一种可接受的治疗方法，为攻克某些顽疾建功立业。所有这些都涉及到采用遗传工程技术人为设计出更多带有新型遗传物质的生物。这既涉及到有生命活性的载体自身对实验室人员的生物安全，还存在大量投放于环境后的生物污染问题——此类问题造成的影响更是深远而不易觉察[10]。

分子生物学实验安全常识 1.3 废弃物的处理 含有EB的废弃物！！ 废液 描述 废弃处理方法 缓冲液 ＥＢ浓度较低 （< 0.5mg/L） 在排入下水道之前，缓冲液请先用过滤器或“茶包”处理。确定缓冲液中在紫外灯下无荧光方可下排。 储备溶液，氯化铯溶液 ＥＢ浓度较高 （ 1-10mg/mL） 浓度之高，使得处理EB的过滤和吸收方法都无法适用。将这些储液交由相关部门专业人员处理。 处理用过的过滤器和“茶包” ＥＢ在（过滤/吸收过程）污染 将已用的过滤器和茶包明确标记。用过的过滤器和茶包交由相关部门处理。 凝胶 ＥＢ浓度低 （ 3-5mg/L） 先将凝胶晾干，装入指定的袋子中做好标记后，再交由相关部门处理。 污染的物件 手套，清理洒落EB用过的材料，以及实验室中污染ＥＢ的物品 破碎的玻璃和锐器必须放入坚固的容器，其他材料可摆放整齐后装入袋中做好标记，交由相关部门处理。 晶体及粉末 含有较纯或浓缩过的EB 交由相关部门处理。

分子生物学实验安全常识 1.3 废弃物的处理 含有EB的废弃物！！ Qbiogene 公司： Sigma公司： Ethidium bromide/SYBR® green replacement cartridges 5 replacement cartridges for decontamination of solutions containing Ethidium bromide or SYBR® Green; binding capacity for above mentioned fluorescent stains: 50 mg price： 约700RMB Qbiogene 公司： EtBr GreenBag™ Disposal The EtBr GreenBag™ Kit allows rapid and trouble-free concentration of ethidium bromide from large volumes of solutions into a small "tea bag" which is then conveniently disposed along with other solid hazardous wastes. One kit has the capacity to remove 500 mg of ethidium bromide from solutions (10 mg EtBr/bag). Price：约1608 RMB

分子生物学实验安全常识 1.3 废弃物的处理 含有微生物的废弃物！！ 大肠杆菌(Escherichia coli, E.coli)是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，主要寄生在大肠内。它侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的，尤其是对孩子及老人。该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。大肠杆菌废弃物应分类收集进行消毒、烧毁处理，对大肠杆菌废弃物处理有如下方法： 1. 固体废弃物： 固体含菌培养基及一次性使用废弃物如枪头、塑料管、手套、帽子、口罩等使用后放入专用垃圾袋内集中烧毁。可重复利用的玻璃器材如试管、玻瓶等或塑料制品，可以先用朗索消毒片溶液浸泡(3片/1000ml水，浸泡3小时以上)，然后清洗，再高压蒸汽灭菌后使用。 2. 液体废弃物： 液体含菌培养物加朗索消毒片处理后(5片/1000ml水，浸泡3小时以上，根据菌液浓度可酌情增加消毒片剂量或延长浸泡时间)或者直接将菌液煮沸30min后方可倒入下水道，切勿直接将未处理含菌废液排入下水道。实验室大肠杆菌多为带抗性菌体，为防止实验室大肠杆菌实验废弃物随意排放对环境造成污染以及确保实验室工作人员安全，请各实验室积极配合，做好。

分子生物学实验安全常识 1.3 废弃物的处理 分子生物学实验操作常见废弃物  移液器吸头 使用过的移液器吸头应放入含有10%次氯酸钠溶液的容器内浸泡，浸泡时间不宜少于24 h。  PCR产物 含有PCR产物的所有液体及废弃物应放入含有1 mol/L HCl的容器中浸泡，浸泡时间不宜少于6 h；采用PCR-ELISA方法检测时洗板机洗板所产生的废液应收集至1 mol/L HCl溶液中。  阳性样品和质粒 阳性质粒宜放入1 mol/L HCl溶液中浸泡，浸泡时间不宜少于6 h。