工研院 綠能所 陳范倫 經理 van@itri.org.tw 交通大學 生物實驗室安全管理 工研院 綠能所 陳范倫 經理 van@itri.org.tw 資料參考：臺大醫學院生物實驗安全小組

講習大綱 一、生物安全法規重點、基本知能 二、生物安全管理組織、任務分工 三、生物性實驗室概況、操作規範 四、生物性實驗室廢棄物處理 五、實驗室常見缺失及注意事項

一、生物安全法規重點、基本知能 衛生福利部疾病管制署 (衛生署疾病管制局) 科技部生命科學研究發展司(國科會) 「感染性生物材料管理辦法」103.3.11 「衛生福利部感染性生物材料管理作業要點」104.2.25 「感染性生物材料、傳染病檢體及相關生物材料輸出(入)管理規定」104.9.17 「生物安全第一等級至第三等級實驗室安全規範(第一版)」102.3.5 「動物生物安全第一等級至第三等級實驗室安全規範(第一版)」103.1.7 「實驗室生物保全管理規範」102.7.23 …… 科技部生命科學研究發展司(國科會) 「基因重組實驗守則」93.6 行政院農業委員會動植物防疫檢疫局 「動物傳染病防治條例 」103.12.24 「植物防疫檢疫法」103.6.18 衛生福利部食品藥物管理署 醫療器材、藥品、非感染性生物檢體、食品、化妝品等

生物性危害的認知 1.感染：生物體在宿主個體內進行有害複製、繁殖 2.過敏：生物體以過敏原角色經重覆暴露使人體免疫 系統過度反應 ex.病毒引起的流行性感冒 2.過敏：生物體以過敏原角色經重覆暴露使人體免疫 系統過度反應 ex.真菌孢子、植物花粉引起的過敏性鼻炎、氣喘 3.中毒：暴露於生物體所產生之毒素所致 ex.細菌內毒素引致之肺功能受損 感染性物質：已確知帶有病原體，或合理懷疑帶有 病原體之物質。

感染性生物材料可區分： (衛生福利部感染性生物材料管理作業要點-第二點定義) （一） 具感染性之病原體：指造成人類感染或疾病之病 原微生物（例如：細菌、病毒、真菌及寄生蟲等 ）及其培養物（液）。 （二） 病原體之衍生物：指經純化及分離出病原體組成 成份（例如：核酸、質體、蛋白質等）或其分泌 產物（例如：生物毒素等）。 （三）經確認含有病原體或其衍生物之物質：指經檢驗 確認含有某種病原體、或其組成成份或其分泌產 物之傳染病病人陽性檢體（例如：血液、痰液或 尿液等）。

病原體之危險群分級： (衛生福利部感染性生物材料管理作業要點-第三、四點定義) 感染性生物材料為病原體者，依其致病性、感染 途徑、宿主範圍、有無預防及治療方法等因素， 區分為第一級危險群（Risk Group 1，RG1）至 第四級危險群（Risk Group 4，RG4）微生物。 有關各級危險群微生物名單，如管理作業要點附表一至附表四。 感染性生物材料為生物毒素者，依作為生物戰劑 之可能性，予以分類及管制，如附表五。 可分：一般性生物毒素(RG2)、管制性生物毒素(RG3)

病原體之危險群分級 (衛生福利部感染性生物材料管理作業要點-附表一～附表四) 危險性等級 說明 例子 第一級危險群 Risk group 1 (RG1) 與健康成人疾病無關 lactobacillus lactis Escherichia coli-K12 第二級危險群 Risk group 2 (RG2) 在人類所引起的疾病很少是嚴重的，而且通常有預防及治療的方法。 Hepatitis B virus Salmonella spp. Streptococcus spp. 第三級危險群 Risk group 3 (RG3) 在人類可以引起嚴重或致死的疾病，可能有預防及治療之方法。 SARS-associated Coronaviruses Mycobaterium tuberculosis 第四級危險群 Risk group 4 (RG4) 會引起嚴重或致死的疾 病，通常無預防及治療 的方法！ Ebola virus Marburg virus

生物毒素之分類 (衛生福利部感染性生物材料管理作業要點-附表五) 一般性生物毒素列為RG2管制性生物毒素列為RG3

如何查詢危險群等級的資訊? 可由下列方式尋找病原體的危險群等級： 行政院衛生福利部疾病管制署網站 (感染性生物材料管理作業要點) 食品工業發展研究所之生物資源保存及研究中心資料庫網站 (BCRC) 科技部生命科學研究發展司「基因重組實驗守則」附表二 ATCC（The Global Bioresource Center）網站 由生物材料的供應廠商提供 參考文獻資料或網路搜尋

使用感染性生物材料之實驗室分級感染性生物材料管理辦法第五條 生物安全第一等級至第三等級實驗室安全規範(第一版) 危險群等級 生物安全等級 實驗室 類型 操作規範 安全設備 RG1 BSL1 基礎教學、 研究 優良微生物學 技術 無，開放式工作檯 RG2 BSL2 初級衛生服務診斷服務 優良微生物學技術加上防護衣、生物危害標誌 開放式工作檯加上防止氣霧外流之生物安全櫃 RG3 BSL3 特殊診斷 服務、研究 同第 2 等級加上特殊防護衣、進入管制及定向氣流 生物安全櫃及（或）其他所有實驗室工作所需要之基本裝置 RG4 BSL4 具危險性之 病原體 同第 3 等級加上氣密門、出口淋浴及廢棄物之特殊處理 Ⅲ級生物安全櫃或Ⅱ級生物安全櫃並穿著正壓防護衣、雙門高壓蒸氣滅菌器（穿牆式）及經過濾之空氣

生物危害標誌 ▲ 生物性實驗室 現行標示

生物材料分級、實驗室生物安全等級區分 病原體危險群所造成之危害程度（WHO） RG4（Risk Group 4）> RG3 > RG2 > RG1 物理性防護(Physical containment) P4 ＞ P3 ＞ P2 ＞ P1 生物性防護(Biological containment) BSL4（Biosafety level 4)＞BSL3＞BSL2＞BSL1 BSL1=Practice + Safety equipment + Personal protective equipment + P1 大量增殖實驗或特殊情形，其防護等級須往上一級!

實驗室生物安全防護(BSL 1)

實驗室生物安全防護(BSL 2)

實驗室生物安全防護(BSL 3)

實驗室生物安全防護(BSL 4)

運送感染性生物材料注意事項 (感染性生物材料管理作業要點第五點、附表六) 內部運送： 1.穿戴合適的個人防護裝備，例如手套、口罩、實驗衣等。 2.將感染性生物材料放入外殼堅固可加蓋密閉的傳送箱內之試管 架上或專用容器內，保持直立狀態，並儘快送至實驗室。 3.傳送箱外需張貼生物危害標示 4.使用推車運送傳送箱時，請注意須牢牢固定好傳送箱，以免運 送途中翻倒。 5.避開人員進出頻繁或擁擠之公共空間、走道或電梯 6.應攜帶適量擦手紙、手套及消毒水，當發生運送意外造成感染 性物質外溢時，可進行初步的除污。 外部運送：請依疾病管制署感染性物質運輸規範指引規定辦理

運送感染性生物材料之包裝規定 (感染性生物材料管理作業要點第五點、附表六) 材料分類及其包裝規定 A類感染性物質：運送過程中萬一洩漏，恐造成人類 永久性失能或殘疾。 例如Bacillus anthracis, Ebola virus 等 B類感染性物質：非屬A類感染性物質之傳染病病原 體、培養物或檢體等。 豁免物質：不含感染性物質或造成人類疾病的可能性 極低。例如癌症檢查切片、用於輸血為 目的之血液等。

運送感染性生物材料之包裝規定 (感染性生物材料管理作業要點第五點、附表六)

運送感染性生物材料之包裝規定 (感染性生物材料管理作業要點第五點、附表六) A類感染性物質 - P620 三層包裝：最為嚴謹 防水、防滲漏 堅固包裝 耐穿刺 耐落地

運送感染性生物材料之包裝規定 (感染性生物材料管理作業要點第五點、附表六) B類感染性物質 - P650三層包裝：次嚴謹

運送感染性生物材料之包裝規定 (感染性生物材料管理作業要點第五點、附表六) 豁免物質 - 一般三層包裝

二、本校生物安全管理組織、任務 分工(需更新) 二、本校生物安全管理組織、任務 分工(需更新) 生物安全會 - 校級 行政支援單位：本校環安衛中心生物性污染防護組 生物實驗安全小組 – 學院級 行政支援單位：院辦或院內的安全衛生單位 國立臺灣大學 生物安全會 行政支援單位：環安衛中心生污組 醫學院 生物實驗 安全小組 公衛學院 生科學院 生農學院 理學院

生物安全相關業管單位窗口(需更新) 校級生物安全會 (本校生物安全管理最高指導單位) 校總區環安衛中心：3366-2004 醫學院生物實驗安全小組 (生安小組) 醫學院環安衛中心：院內分機 88070 屬於臺大醫院單位的實驗室請洽 檢驗醫學部：院內分機 65377 實驗動物照護及使用委員會 IACUC 實驗動物中心行政辦公室：院內分機 88475

感染性生物材料管理辦法 感染性生物材料管理辦法 第八條 (異動) 實驗室持有、保存或處分第二級以上危險群微生物或生物毒素，應經生安會或生安專責人員審核通過，始得為之。 (三級以上應報中央主管機關核准) 舉例： 1.校內同一系所內：A實驗室分讓RG2材料給B實驗室 2.校內不同系所間：A實驗室分讓RG2材料給某所C實驗室 3.國內不同機構間：A實驗室由外部機構(中研院、BCRC或 他校)D實驗室購買或索取RG2材料

感染性生物材料管理辦法 感染性生物材料管理辦法 第十二條 (輸出入) 輸出(入)感染性生物材料時，應檢具相關申請文件，向中央主管機關申請之。 罰則：違反輸出(入)規定者，可處新臺幣九萬元 以上四十五萬元以下罰鍰。 輸出(入)情形舉例： (感染性生物材料必須經過海關者) 1.輸出(入)感染性生物材料的同意申請不分危險等級，例如向美國ATCC購買RG1之菌株，要提出申請。(輸入) 2.因學術交流，要贈送RG2感染性生物材料給德國某大學實驗室，要提出申請。(輸出)

感染性生物材料管理辦法 第十一、十八條 BSL2 (以上)實驗室相關規定 感染性生物材料之操作人員應接受教育訓練 實驗室應標示生物安全等級、生物危害標識 、實驗室主管、管理人員姓名、聯絡電話及 其緊急處理措施。 RG2以上感染性生物材料之保存場所，應符合下列規定： 1.由專責人員負責管理 2.設門禁管制 (生物材料保全) 3.備有感染性生物材料保存清單及存取紀錄 (疾病管制署將不定期查核)

三、生物性實驗室概況、操作規範 各級實驗室每年至少進行一次年度內部查核 新設生物性實驗室須依本校規定提出實驗場所設置申請及生物安全等級鑑定，由生物實驗安全小組審核通過後成立。 各級實驗室每年至少進行一次年度內部查核 BSL2實驗室須定期(本校預設每三個月)清查感染性生物材料清冊(包含持有、保存及異動紀錄)，並更新准予進入BSL2實驗室之人員名單。 前述資料須於實驗場所運作管理系統中更新，內部查核時將作為查核項目之一，疾病管制署亦不定期稽查。

無論您是實驗室負責人、管理人或 實驗操作人員，都須注意： 實驗室應依其運作事實，張貼警告標示。 實驗室人員必須接受教育訓練。 保持操作檯面的乾淨，不常使用之化學藥品、試劑及容器應當收妥。 無菌操作檯(Laminar flow)、生物安全櫃(Biological Safety Cabinets)及化學抽氣櫃(Chemical Hood)勿堆置化學藥品或雜物。 地面上及走道上勿堆置不必要的東西，以維持安全暢通的工作場所。 人員必須熟悉水槽、洗眼設備、緊急沖身設備及滅火器等使用方法(滅火器操作口訣：拉拉壓)與位置。 實驗產出之廢棄物必須妥善良好的處理。

實驗操作一般規範(一) 1.遵從實驗室負責人指示及規定 2.實驗前後請洗手，並戴手套、穿著實驗衣進行實驗。 3.實驗室內禁止飲食、抽菸、處理隱形眼鏡、化妝 4.實驗中禁止以口吸取溶液、樣品等 5.小心操作任何程序，以減少噴濺及氣霧產生。(離心機、震盪器) 6.實驗前後之工作檯面須清理消毒 7.所有可能有感染之虞的實驗廢棄物（如培養物、菌株、細胞株等），清除前須進行滅菌，如滅菌是在鄰近實驗室中進行，請置於耐用防漏容器中，以利安全運送。 8.維持環境衛生並防除非實驗用生物，如昆蟲及鼠類。

實驗場所中請防除非實驗用生物（昆蟲、鼠類），並務必防止實驗動物逃脫!! 某校每年花費約20萬元進行鼠患防治工作，請杜絕鼠隻糧食、封除牆面孔洞、垃圾桶加蓋及經常保持環境乾淨整潔。 白色實驗鼠逃脫?!!

防除非實驗用生物 實驗動物請勿飼養在實驗室或隨處置放 請向實驗動物照護及使用委員會申報核准 短期留置

實驗操作一般規範(二) 9.如有BSL2實驗室，與實驗無關之人員應禁止進出。 10.操作生物安全等級第二級實驗前，須接受實驗室負責人或 資深人員指導，備有了解該生物材料危險性及洩漏處理方 式等知識，始可進行相關實驗。 11.操作生物安全等級第二級實驗須於BSL2實驗室內之生物安 全櫃中進行 12.BSL2實驗室需設有可用腳或肘操作或自動洗手裝置，另宜 置有UV燈及雙重門，如無雙重門，則門必須為密閉式。 13.同時於BSL2實驗室內操作BSL1實驗時，須明確劃分區域。 14.BSL2實驗室之冰箱、冷凍櫃、實驗室入口應標示BSL2級， 操作BSL2實驗時需掛上「BSL2實驗進行中」之標示。

生物安全櫃? 無菌操作檯? 生物安全櫃(Biological Safety Cabinets)屬初級屏障， 為操作人員與材料直接接觸的平台，而無菌操作檯 (Laminar Flow Hoods)不屬於生物安全櫃。

無菌操作檯

生物安全櫃 BSL2實驗室須採用通過國際認證 檢測標準之生物安全櫃，且裝設 位置要遠離供/排氣口、門窗與 人員進出頻繁之區域。

(國際認證標準例如美國NSF49標準、歐盟EN12469) 使用符合國際認證標準之生物安全櫃 (國際認證標準例如美國NSF49標準、歐盟EN12469) HEPA過濾網設置後每年施行一次安全櫃檢測 生物安全櫃應備有定期檢查紀錄及使用登記表 使用前應先照射UV光至少30分鐘，使用後應進行櫃內消毒工作（酒精擦拭及UV光照射）。 UV燈請勿長時間開啟或隔夜未關閉

× × 拉門 過高 1.操作時不可將拉門拉開超過警戒高度，否則會導致 inflow進風量不足，以致安全櫃內危險物質擴散至 外面。 雜物過多 擋住氣柵 × 1.操作時不可將拉門拉開超過警戒高度，否則會導致 inflow進風量不足，以致安全櫃內危險物質擴散至 外面。 2.不可有雜物阻擋生物安全櫃內之氣柵(Grills)， 否則將使內部氣流無法循環造成污染。

生物安全櫃及無菌操作檯應避免使用明火，以免火焰擾亂櫃內氣流或損壞濾網（HEPA）! 依據世界衛生組織實驗室生物安全手冊（Laboratory biosafety manual）及美國疾病管制局之Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories： Open flames should be avoided in the near microbe-free environment created inside the BSC. They disrupt the airflow patterns and can be dangerous when volatile, flammable substances are also used. To sterilize bacteriological loops, microburners or electric “furnaces” are available and are preferable to open flames.

濾網燒破、變形!!

如絕對需要在櫃內使用火源，請務必改用低危險性的微燃燒器，以取代危險性較高的玻璃酒精燈。

高溫高壓滅菌鍋 專人管理並備有標準作業程序，要求操作人員嚴格遵守。 使用前先確認滅菌鍋是否使用中，並填寫使用記錄表。 滅菌物不可過滿，且待滅菌容器不可密封。 請貼滅菌指示帶 滅菌完成必先確認壓力歸零及溫度下降始可開啟鍋門。 定期清洗 建立年度安全檢查及維修紀錄制度

注射針（儘量少用）-使用感染性物質時 危害風險： 防範重點： 1.針扎意外 2.產生氣膠 3.有害物質溢出 1.請勿回套使用過之針頭 2.減少氣泡與泡沫產生 3.操作時戴手套並儘量在生物安全櫃內 4.不可反覆吸放進行混合動作 5.廢棄針頭針筒(不需拆開)依生物醫療廢棄物 規定妥善處理

(依環保署有害事業廢棄物認定標準第三條規定) 四、生物性實驗室廢棄物處理 生物醫療廢棄物 (依環保署有害事業廢棄物認定標準第三條規定) 一、 基因毒性廢棄物 二、 廢尖銳器具 三、 感染性廢棄物 四、 其他經中央主管機關會商中央目的事業主管機關認定對人體或環境具危害性，並經公告者。 (一)屬致癌之 細胞毒素 或其他 藥物 指對人體會造成刺傷或切割傷之廢棄物品，包括注射針頭、與針頭相連之注射筒及輸液導管、針灸針、手術縫合針、手術刀、載玻片、蓋玻片或 破裂之玻璃器皿等 (一)廢棄之微生物培養物、 菌株及相關生物製品 (二)病理廢棄物 (三)血液廢棄物 (四)受污染動物屍體、殘肢 及墊料 (五)手術或驗屍廢棄物 (六)實驗室廢棄物 (七)透析廢棄物 (八)隔離廢棄物 (九)受血液及體液污染廢棄物 (二)可能致癌 之細胞毒 素或其他

生物醫療廢棄物處理、暫存 1.應以防漏、不易破之紅色可滅菌塑膠袋盛裝，並張貼標示。 廢棄物產出前須滅菌，紅色可滅菌塑膠袋須自行購買。 2.暫存時限：於攝氏五度以上(常溫下)貯存者，以一日為限； 於攝氏五度以下至零度以上冷藏者，以七日為限； 於攝氏零度以下冷凍者，以三十日為限。 3.生物醫療廢棄物垃圾桶必須加蓋，垃圾不可直接落地。

生物醫療廢棄物運送過程請注意： 垃圾袋不落地，容 器張貼標示並加蓋 密封! 運送人員須戴口罩及 手套，穿著實驗衣。

廢尖銳器具 種類：針頭、與針頭相連之注射筒及輸液導管、針筒、針 收集及清運： 灸針、手術縫合針、手術刀、載玻片、蓋玻片等等 (不論是否有使用過，都屬於生物醫療廢棄物!) 收集及清運： 1.使用完畢後，必須收集在不易 穿透之鐵桶內。 (針頭及針筒不要拆開!) 2.鐵桶外需張貼生物醫療廢棄物 標示(鐵桶可至醫學院環安衛 中心領取) 3.暫存以一年為限，依本院生物 醫療廢棄物清運方式處理。

違規實例 不該以一般垃圾來處理!! 不該用紙箱收集!!

一般實驗廢棄物 (除生物醫療廢棄物及廢尖銳器具外) 種類： 1.經滅菌後之BSL1級（含）以下實驗室之菌株、活性 疫苗及培養皿 2.實驗動物在未暴露有害物質環境下 所產生之排泄物、墊料、裝小動物 之紙籠（盒） 3.清洗乾淨之實驗耗材 (須完全未接觸生物材料) 4.其他包括未接觸生物材料與化學藥品等有害物質之塑膠滴管、口罩、濾紙、擦手紙、手套等。

違反廢棄物清運規定之罰則 依環保署「廢棄物清理法」規定，違者可處新台幣六萬元以上三十萬元以下罰鍰，如因系所單位未確實依規定辦理，導致本校遭受罰款，則罰款由違規系所單位全額負擔。 依「公民營廢棄物清除處理機構許可管理辦法」，違規清運事業廢棄物進入台北市環保局垃圾處理廠(場)遭告發處分累計達三次，予以廢止清運許可證。屆時將影響全體臺大教職員工生清除一般廢棄物之權益。

五、實驗場所現場常見缺失 垃圾桶標示錯誤 一般生活廢棄物不應標示為感染性垃圾

實驗場所現場常見缺失 實驗垃圾置於學生休息室 實驗廢棄物不應置於休息室內，需明確區隔休息室與實驗室。

實驗場所現場常見缺失 生物醫療廢棄物垃圾桶沒有蓋子

實驗場所現場常見缺失 生物醫療廢棄物未防洩漏 不得以紙箱盛裝或直接落地

實驗場所現場常見缺失 生物醫療廢棄物未定時清運

實驗場所現場常見缺失 未穿實驗衣-做實驗時一定要穿實驗衣 正在進行病毒學實驗?!

實驗場所現場常見缺失 個人防護不夠周全-足部裸露

實驗場所現場常見缺失 BSL2(P2)專用實驗衣，請務必與其他衣物區分！ 外套請勿吊掛於 P2實驗衣專用處!!!

實驗場所現場常見缺失 於實驗場所中飲食、保存食物 冰箱同時存放食物與藥品?!!

實驗場所現場常見缺失 實驗室內吸菸、喝酒?!

實驗場所現場常見缺失 未經常維持實驗場所之環境整潔

簡報完畢，敬請指教。