第3章 消毒、灭菌与兽医微生物 实验室的生物安全

消毒与灭菌是兽医微生物学实践中最常用的措施之一。 常用的火焰灭菌法、热空气灭菌法、高压蒸汽灭菌法、巴氏消毒法及煮沸灭菌法，各有特点和实用范围。 可见光中的紫外线及红外线有杀菌作用。射线、微波等也常用于灭菌。滤过除菌应用广泛,。化学消毒剂的功效易受环境因素的影响，抗生素等用于细菌感染动物的治疗。细菌素对同种或类似细菌有一定的抑杀作用。

消毒(disinfection)：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant)。 灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。 防腐(antisepsis)：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。 无菌(asepsis)：不存在活菌。 抑菌(bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素。

第1节 物理消毒灭菌法 热力灭菌法 辐射杀菌法 超声波杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法

一. 热力灭菌法 1 干热灭菌法— 包括火焰、热空气和红外线灭菌。 火焰分为焚烧和灼烧两种。焚烧：废弃物、尸体；灼烧：接种环、试管口。 1 干热灭菌法— 包括火焰、热空气和红外线灭菌。 火焰分为焚烧和灼烧两种。焚烧：废弃物、尸体；灼烧：接种环、试管口。 热空气灭菌：玻璃器皿等。 红外线：医疗器械 2 湿热灭菌法— 巴氏消毒法：61.6-62.8 ℃30min或71.7 ℃15-30s,主要用于牛乳消毒。 煮沸法 流通蒸汽消毒法 流通蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌法

热力灭菌法比干热灭菌法的效力好，原因如下： 1、湿热中菌体蛋白较易凝固：蛋白质含水量愈高，凝固所需的温度愈低。 2、湿热的穿透力比干热强，而且蒸汽变为液态时释放大量潜热，可迅速提高被灭菌物体的温度。

干热灭菌法 火焰灭菌：焚烧和灼烧。 热空气灭菌：160℃，2小时~3小时。

湿热灭菌法 煮沸法：一般10-20min，芽胞需煮沸1-2h 巴氏消毒法：63-65 ℃30min或71-72℃15-30s,或132 ℃1-2s，主要用于啤酒、牛乳消毒。 流通蒸汽消毒法：101.3kPa，30min 流通蒸汽灭菌法：又称间歇灭菌法。 高压蒸汽灭菌法：应用最广泛、最有效。103.4kPa,121 .3℃，15-20min

高压蒸气灭菌 121.3℃ (15磅压力/英寸2 ) 20-30分

二. 辐射杀菌法 包括电磁波辐射和粒子辐射。 根据对微生物的灭活作用，分为电离辐射和非电离辐射。 电离辐射：高速电子、X射线、γ射线 非电离辐射包括：可见光、日光、紫外线和微波等。 紫外线 ：波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用。其主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合形成二聚体，干扰DNA复制与转录时的正常碱基配对，导致细菌变异和死亡。 微波：波长1mm~1m的超高频电磁波，不能穿透金属表面。 可见光线：红、紫外线之间的肉眼可见的光线，微弱杀菌作用。 阳光：天然杀菌因素。

三. 超声波杀菌法 一种机械的作用因素，每秒超过2万次振动的声波即为超声波。常用的超声波发生器能产生20-100千赫的声波。可使细菌细胞壁裂解而死亡。但小型病毒不敏感，费用大，有残存，故未应用。 目前主要应用于裂解细胞。

四. 滤过除菌法 通过机械、物理阻留作用将液体或空气中的细菌等微生物除去的方法。但不能除去病毒、支原体及细菌L型等小颗粒。 常用：薄膜滤器、素陶瓷滤器、玻璃滤器等。 空气滤器可应用于控制药品、食品、疫苗及生物制品生产中洁净厂房空气洁净度的控制。如兽药GMP（兽药生产质量管理规范）对空气洁净度划分为四个级别：100、10000、100000、300000级。

核孔滤膜上的细菌扫描电镜图

微型滤器

滤 器

五. 干燥及低温抑菌法 干燥法：结核杆菌耐受干燥90d。芽胞对干燥的抵抗力强大，如破伤风梭菌。还有霉菌的孢子等。 低温法：低温可使细菌的新陈代谢减慢，常用作保存细菌菌种。 冷冻真空干燥法：是保存菌种、疫苗、补体、血清等的良好方法。

第2节 化学消毒灭菌法 消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧化剂、表面活性剂、烷化剂。 第2节 化学消毒灭菌法 消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧化剂、表面活性剂、烷化剂。 消毒剂的应用：病人排泄物与分泌物、皮肤、粘膜、饮水、厕所、空气、手。 消毒剂：用于杀灭病原微生物的化学药品。 防腐剂（抑菌剂）：用于抑制微生物生长繁殖的化学药品。

消毒剂的选择： 应具有强大的杀菌力 易溶水，使用方便，价格低 性质稳定，便于长期贮存，安全 对动物体应毒性小、无残留 杀菌力不受有机物影响

影响消毒剂作用的因素： 消毒剂的性质、浓度和作用时间：一般浓度愈大，对微生物毒害作用愈强，但酒精有一定限度 微生物的种类与数量： 温度：温度越高，增强效果 pH有机物的存在 药物的相互拮抗 其他因素：湿度、穿透力、表面张力等。

第3节 抗生素和细菌素的杀菌作用 抗生素：某些微生物在代谢过程中产生的一类能抑制或杀死另一些微生物的物质。 主要来源于放线菌（如链霉毒），少数来源于霉菌（如青霉素），有些可化学合成。

抗菌素的作用： 抗菌作用主要是：干扰细菌的代谢过程，达到可抑制其生长繁殖或直接杀灭的目的。 作用原理概括为4种类型： 干扰细菌细胞壁的合成；损伤胞浆膜而影响其通透性；影响菌体蛋白质的合成；影响核酸的合成。

细菌素：某种细菌产生的一种具有杀菌作用的蛋白 质。只能作用于与它同种不同菌株的细菌及亲缘关 系相近的细菌。 分为三类：多肽细菌素、蛋白质细菌素、颗粒细 菌素。

第4节 兽医微生物实验室的生物安全 三层含义： 1 主要指防止病原微生物等及其他有害生物或物质传入实验室； 第4节 兽医微生物实验室的生物安全 三层含义： 1 主要指防止病原微生物等及其他有害生物或物质传入实验室； 2 主要指防止病原微生物等传出实验室； 3 实验室人员的自身安全防护。

兽医微生物实验室的安全要点： 处理临床样本：均被视为传染性； 实验室人员应具备防范生物危害的知识：人员的数量及流动、安全防护服、卫生习惯等； 所有污染材料及水的消毒：推荐含氯消毒剂 最主要的防护并非设施而是人员本身。

兽医生物实验室的生物安全分类： 分为4级：BSL-1～BLS-4，俗称P1 ～ P4。

动物病原微生物的分类： 我国农业部将动物病原微生物分为四类，一类危害最大。 一类：口蹄疫病毒、高致病性禽流感病毒等 二类：鸡新城疫病毒、猪瘟病毒、布氏杆菌等 三类：低致病性禽流感病毒、沙门氏菌、破伤风梭菌等 四类：危险性小、低致病力、实验室感染机会少 的兽用生物制品、疫苗生产用的弱毒等。