動物疫苗品質管制技術 林家修 1020716 高生製藥股份有限公司 施懷哲維克生物科技(股)公司

生物體的免疫系統 初級淋巴器官 次級淋巴器官 骨髓(Bone Marrow) 胸腺(Thymus) 法氏囊(Bursa of Fabricius) 次級淋巴器官 淋巴結(Lymph Nodes) 脾臟(Spleen) 黏膜層淋巴組織 (Mucosa-Associated Lymphoid Tissue; MALT) 表皮免疫組織

M 細胞 M細胞表面只有稀疏的絨毛狀結構 內凹結構內有B和T淋巴細胞,樹突狀細胞以及巨噬細胞。

黏膜免疫 並非所有的疫苗都可以 The most common types of bacteria used as probiotics are Lactobacillus and Bifidobacterium. The most well known Lactobacillus is Lactobacillus acidophilus and it is often referred to as L acidophilus or just as Acidophilus. Historically, Lactobacillus acidophilus was believed to be the most effective of the Lactobacillus in contributing to good health and well-being. The other well known Lactobacillus was Lactobacillus bulgaricus and this is the one used in yogurt production. Today a number of Lactobacillus strains are used as probiotics. Our next step in understanding probiotics is to appreciate that for each species, such as Lactobacillus acidophilus there are very many strains and these differ dramatically in their effectiveness as probiotics. We all know that even though we are all Homo sapiens and all seem similar, it is obvious that we do differ in how well we can do specific tasks. So too do the Lactobacillus. We need to look more closely for the particular strain of Lactobacillus in order to appreciate how effective that particular strain will be as a probiotic. The discerning consumer needs to look closely at a probiotic product to determine the particular strain of Lactobacillus used. It is then possible to learn from scientific studies just how effective that particular strain is as a probiotic. Not all probiotic products are the same, and in fact not all probiotics are acidophilus.

細菌 病毒 HIV-1, SIV and Other Retroviruses

剪除 E.coli 減毒活疫苗 Sal--, PR gI-TK- 載體疫苗 PR+GH 次單位疫苗:Toxin 致病基因 抗原基因 轉入他源基因 抗原基因 載體疫苗 PR+GH E.coli 次單位疫苗:Toxin

BelloCell  & TideCell 

影響疫苗篩選的因子 Vaccine System Antigen 抗原 Adjuvant 佐劑 Vehicle 載體 Immune stimulant 免疫促進劑

生物/免疫系統 病原 抗體 細胞免疫 記憶 保護力 抗原 辨認/ 呈現 1O 免疫反應 2O 免疫反應 生病 驚險過關 無症狀耐過

內容摘要 養殖,動物藥品,動物疫苗產業現況 疫苗品質管制 許可制, 法律規範, GMP ; QA,QC, 公告標準, 藥品逐批檢驗 安全,效力, in vitro/in vivo

內容摘要 養殖,動物藥品,動物疫苗產業現況 疫苗品質管制 許可制, 法律規範, GMP ; QA,QC, 公告標準, 藥品逐批檢驗 安全,效力, in vitro/in vivo

台灣農業產值概況(102年) 農產 42% 林漁 27% 畜產 31% 合計 在養 豬 51% 家禽 32% 產 值 2,200 億元 產　值 農產 2,200 億元 42% 林漁 1,000 億元 27% 畜產 1,500 億元 31% 合計 4,700 億元 在養 豬 　600 萬頭　 667 億元 51% 家禽 1.00 億隻 440 億元 32% COA畜禽統計調查結果（102年1季）

原料藥 化學藥品 動 物 生物製劑 用 藥 品 補助飼料 含藥物飼料 添加物 治療用散劑、注射劑 口服液劑、外用液劑 其它(例如:軟膏劑…...) 生物製劑固體 生物製劑液體 散劑 顆粒劑 動 物 用 藥 品

動物用藥品產業現況 --國際地位 2010年 全球動物用藥品總產值 6000億元 1500 億元 工研院 IEK 2010

動物用藥品產業現況 60億 --國內地位 2010年 製藥業總產值 600億元 國產 20% 生物藥品 20%, 12億元 化學工業 億美元 製藥業總產值 600億元 生物藥品 20%, 12億元 國產 20% 60億 化學工業 億美元 %

農業生物科技-產業地位 國內潛在產值:億元 資料來源: 91.11.21, COA 農業生物技術中長期發展目標 屏科園區

家衛所 大豐 全亞洲 台生 高生/施懷哲維克 縣農會 瑞寶基因 德羅曼

產業國際化趨勢 國內現況(8家疫苗廠) 外資建廠 1 羅曼/卜蜂(國際合作) 自有品牌 2 台生,瑞寶(國資自建) 外資建廠 1 羅曼/卜蜂(國際合作) 自有品牌 2 台生,瑞寶(國資自建) 策略聯盟 2 拜耳/大豐(產銷合作) 高生/施懷哲,維克(合併)

動物疫苗產業-特性 必要之地域性產業 與企業化養殖息息相關 關鍵技術密集 基因重組,組織培養,發酵‘純化工技 高附加價值,高法規風險

內容摘要 養殖,動物藥品,動物疫苗產業現況 疫苗品質管制 許可制, 法律規範, GMP ; QA,QC, 公告標準, 藥品逐批檢驗 安全,效力, in vitro/in vivo

疫苗產業是特許行業 經濟部/財政部…. 公司執照—工廠登記證—營利事業登記證 技術 法規 農委會 GMP查廠 產品製造許可證 產品逐批檢驗 技術 法規 農委會 GMP查廠 產品製造許可證 產品逐批檢驗 實驗動物管理驗證

新藥要做委託試驗 新藥 產品 活菌毒 全部 基因工程(L) 基因工程(K) 依狀況 新產品 第一家 3年內 新劑型 新多價產品 不可以發生: 排毒,同居感染及毒力回歸, 新藥要做委託試驗

任何生物製劑 取得製造許可證前, 需要通過官方核准之驗證 產品特性 檢驗方法確認 實驗室安全效力:毒力回歸, 排毒 田間安全效力:群體保護, 育成, 增重 其他特別要求:Virus污染

動物用生物藥品檢驗標準 活(菌毒)成品品管規範 一、特性試驗： 二、無菌試驗：Bact., Fungi, Myco 三、真空,含濕度試驗：Live 四、抗原含有量試驗：Direct or indirect 五、認定試驗：Unique ID test 六、病毒迷入試驗： Ag-Ab test or PCR 七、安全效力試驗： Target animal or other, Challenge, Efficacy or PI, PD50 八、抗體力價, 發痘 九、福馬林殘留量

貼合格證

制定動物用藥品法規及標準 行政院農業委員會 動植物防疫檢驗局 藥品審議委員會 專家 長官 行政院農業委員會 家畜衛生試驗所 藥品檢定分所

疫苗品質管制-源自法規要求 動物用藥品管理法 動物用藥品管理施行細則 動物用藥品製造場所設廠標準 優良藥品製造標準(GMP) 動物用生物藥品查驗辦法 動物用生物藥品檢驗標準

動物用藥品管理法 目的：改進藥品品質、維護動物健康，促進畜牧事業。 內容：共48條。 第1條至第11條 解釋藥品、偽、禁、劣藥及製造、販賣之定義。 第12條至第20條 規定製造或輸入藥品登記。 第21條至第24條 規定販賣業者之業務範圍及輸出藥品規定。 第25條至第29條 規定製造廠所檢查及藥品抽驗。 第30條至第45條 規定製造或販賣偽藥、禁藥或劣藥之罰責。

動物用藥品管理法 第十八條 動物用生物藥品，於製成或輸入報關完稅後，製造業者或輸入業者應逐批向直轄市或縣 (市) 主管機關申請抽樣檢驗，經該管主管機關派員抽取樣品，查驗合格並封緘後，始得出售。 前項查驗辦法，由中央主管機關定之。

動物用藥品管理法施行細則 目的：規定動物用藥品管理法執行方法 內容：本細則共57條。 第1~15條 解釋動物用藥品管理法之有關條文。 藥品檢驗登記及工廠登記應辦事項 第16~21條 規定生物藥品之查驗申請及抽樣與覆驗事項。 第22~40條 規定藥品販賣業者及營業場所、推銷員。 申請輸出藥品應辦事項。 第41~53條 規定抽查業者、藥品與取締偽、禁、劣藥。 規定收費標準之訂定等。

疫苗品質管制-源自法規要求 動物用藥品管理法 動物用藥品管理施行細則 動物用藥品製造場所設廠標準 優良藥品製造標準(GMP) 動物用生物藥品查驗辦法 動物用生物藥品檢驗標準

內容摘要 養殖,動物藥品,動物疫苗產業現況 疫苗品質管制 許可制, 法律規範, GMP ; QA,QC, 公告標準, 藥品逐批檢驗 安全,效力, in vitro/in vivo

Ex: 空氣清淨管理

Ex: 空氣清淨管理

GoodManufacturingPractice 優良藥品製造標準 事先制定標準作業程序 SOP:standard operation procedure SOI:standard operation instruction 依標準作業程序執行,及確認作業 完整資料記錄,可逐步回查錯誤發生點

cGMP Current Good Manufacturing Practices 藥品優良製造標準

確效Validation 係指有文件證明的行動， 能證實任何程序、製程、機械設備、 原料、物料或系統 確實持續穩定的導致預期之效果。

藥品優良製造確效作業 一.總則 二.設施,設備 三.人員確效 四.製程確效 五.分析確效 (一)設施與設備之確效 (二)設備清潔方法之確效 (三)純化水系統之確效 (四)空氣調節系統之確效 三.人員確效 四.製程確效 五.分析確效

設備清潔方法之確效 設備均有清潔、保養、維護SOP及記錄 經核准的確效計畫書,載有負責人員,判定標準及再確效日期 標的物:清潔劑,微生物 取樣方法:直接表面取樣法,洗滌取樣法 分析方法:專一性,靈敏性 確效後長期監控:On-line導電度計

設施與設備之確效 設計驗證（DQ） Design Qualification 安裝驗證（IQ） Installation Qualification 操作驗證（OQ） Operation Qualification 性能驗證（PQ） Performance Qualification

QA GMP QC

The Production Flow Product QA QA QA QA Processes People Raw Materials Equipment People Raw Materials QA Processes QA

PIC/S Goal Pharmaceutical inspection co-operation scheme 稽查品質 ㄧ致化 GMP標準 ㄧ致化

稽查品質ㄧ致化 稽查品質要求 稽查員教育訓練 Intra- and inter- tough easy Annual seminar（參加經驗） 每年針對不同主題小組，workshop，專門小組彙整結果，提交委員會討論是否需要增訂or修正相關GMP Guide與指導文件 2008 波蘭 GDP 2007 新加坡 固型製劑, 45, 130 2006 德國 ICH, 39,110 2005 羅馬尼亞 Packaging, Labeling 2004 西班牙API, 41,103 Joint Visits Program：3各來自不同國家的稽查員為一組，觀察各國家的稽查3 inspectors from 3 different countries, 1 inspection per year per country 􀁺 Benefits: - for training purposes - for uniform GMP interpretation - for uniform inspection procedures - for mutual confidence Expert Circle - GMP特別技術議題，討論與資訊交換 - Develop draft guidance documents - Training in specialized field Human Blood & Tissue(1994), Medicinal Gas(1997), Hospital Pharmacy(1999), Computerised System(2002), API(2005), QRM(2007) tough easy

Virtually identical to EC GMP Guide PIC/S GMP Guide（PE 009-7, Sep. 2007 ） 內容 Part I：for medicinal products Part II：for APIs Annexes 1 to 19 （annex 16不採用） 公告之PIC/S GMP指導手冊（ PE 009-6, Apr. 2007 ） Recommendation & Guidance documents Virtually identical to EC GMP Guide

GMP標準ㄧ致化 PIC/S GMP Guide（PE 009-7, Sep. 2007 ） Recommendation & Guidance documents（25篇） Validation (master plan, IQ/OQ, process, cleaning) Validation of Aseptic Processes Sterility Testing Computerised Systems in Regulating GXP Environments SMF Aide-memoire – Inspection of Utilities Aide-memoire on the inspection of QC laboratories. Aide-memoire on the inspection of manufacturers of clinical trial products. Aide-memoire on the inspection of biotechnology manufacturers. ……

動物用藥廠優良藥品製造標準 追蹤檢查作業要點 目的：動物用製劑藥廠，定期或不定期的追蹤 檢查其執行優良藥品製造標準情形。 日期：民國85年4月30日由農業委員會訂定。 內容：本要點共6條。 第1條 檢查依據。 第2條 檢查頻率。定期及不定期 第3條 檢查方式及要領。 第4條 檢查重點。 第5條 檢查評級。P及F 第6條 檢查報告及處置。

內容摘要 養殖,動物藥品,動物疫苗產業現況 疫苗品質管制 許可制, 法律規範, GMP ; QA,QC, 公告標準, 藥品逐批檢驗 安全,效力, in vitro/in vivo

生物藥品檢驗

藥品檢驗目的 1.藥品的常規檢驗—— ① 成品檢驗(QC) ② 生產過程中品質控制(QA) ③ 儲藏過程中的品質控制 2. 提供品質管控及分析 3. 藥品品質標準化-國際化

藥品品質標準 為確保藥品的安全和有效,在藥品的研究、生產、及使用過程中均應進行品質監督和檢驗,這就需要有法定的的依據——藥品品質標準.

藥品品質標準 藥典 公告 企業 標準 國家 使用非法定方法 藥品標準 研究用標準(研究) 暫行標準(特定目的) 標準規格高于法定標準 EP,USP,CP

生物藥品品質管理 相關品質管理規範 《藥品實驗室研究管理》GLP 確保實驗數據的準確可靠 《藥品臨床試驗管理》 GCP 受試者的安全和權利 試驗资料的科學性、可靠性、再現性 《藥品生產管理》 GMP/cGMP/PICS 依GMP規定生產符合藥品標準的藥物 《藥品經營品質管理》 ISSO

第十四節　家禽霍亂菌苗檢驗標準   第四十九條　本標準適用於家禽霍亂菌 ( Pastuelea multocida ) 培養菌液，加適當防腐劑後製成製劑之檢定。 第 五十 條　被檢家禽霍亂菌苗須符合下列條件： 一、特性試驗：須具固有理學的性狀， p H 六．六至七．○，雖含有小量灰白色菌體沈澱，但不得含有異物及異常氣味。 二、無菌試驗：不得含有任何可能檢出之活菌，且本劑之塗抹檢查，不得含有家禽霍亂菌以外之細菌。 三、防腐劑含有量試驗：石碳酸及蟻醛之含有量各須為○．二％以下。 四、安全試驗：選體重一三至一五公克健康小白鼠五隻，各注射本劑○．五公撮於皮下，經二週觀察，須無任何不良反應而增重健存。 五、效力試驗：選體重一三至一五公克健康小白鼠一二隻，任取二隻為對照，其餘一○隻試驗小白鼠各注射本劑○．二公撮於皮下，經二週，以家禽霍亂菌一○ MLD 皮下注射攻擊，觀察二週，試驗組白鼠須六○％以上耐過而健存，對照小白鼠須全部發病斃死。 前項試驗確定困難時，應予複檢。

生物藥物與化學藥物的區别 生物藥物在結構上, 是 大分子藥物 化學結構不明確 分子量不是定值 b)生物藥物在檢查項目上, 重視 安全性的檢查 熱源檢查? 過敏實驗 異常毒性實驗 生物活性的檢查

內容摘要 養殖,動物藥品,動物疫苗產業現況 疫苗品質管制 許可制, 法律規範, GMP ; QA,QC, 公告標準, 藥品逐批檢驗 安全,效力, in vitro/in vivo

取樣 鑑别 檢查 含量測定 檢驗報告 作 業 程 序 生物藥品的檢驗

取樣原則 1 取 樣 取樣 1.科學性、真實性、代表性 2. 依據藥物性質、劑型，採用不同的取樣 方法及不同的取樣量. 3. 進行外觀檢查 包括：品名、劑型、批號、保存期限及 包裝情况等. 1 取 樣 均匀性 合理性 取樣原則

例: 固體劑型藥品 當n ≤ 3時，每件取樣； 當n ≤ 300 時,按 + 1 當n > 300時,按 /2 + 1 每增加 200, 增 1件

物理性狀檢查 2 鑑 别 1. 外觀檢查：製品外觀異常會涉及製品 的安全和效力 2. 真空度及溶解時間 凍乾製品真空封口，可保持製品的生 物活性和穩定性。有真空度瓶内放電 現象會出現藍紫色光 3. 防腐劑含量測定 4. 凍乾製劑水分含量測定 5. 鋁膠含量測定 2 鑑 别

真空試驗

生物性狀檢查 1.採用生物化學法及生物學方法 進行特定反應，判斷製劑內抗 原的真偽(是否為核准規範之物) 2 鑑 别 *活菌,活病毒 *不活化細菌或病毒 *次單位抗原 2. 生物法,免疫法,電泳法 . 2 鑑 别

Master seed bacteria satisfied the test for: Morphology : short rod, Gram’s staining : negative Absence of growth on MacConey agar Biochemical characteristics Indole (SIM) + Nitrate reduction + KCN + Ornithine decarboxylase + Catalase + Gelatin hydrolysis - VP - MR - Arginine decarboxylase - Lysine decarboxylase - Citrate - Malonate - Urease - Hemolysis(goat) -

檢驗標準-認定試驗 HCV(豬瘟弱病毒) 兔出血熱抗體陰性兔4隻，3隻為試驗組，分別靜脈注射1劑量。另1隻為對照組，靜脈注射稀釋液2ml。 注射後，觀察1週，試驗組須有2隻呈特殊熱型反應，照組須無任何不良反應而健存。

病毒含有量試驗-間接方法

500 bp 將痘病毒以特定引子作PCR分析，M為100bp DNA標記、S為高生穿刺用雞痘疫苗病毒株、a、b、c則為受篩選之鴿痘病毒株。PCR結果皆出現一段578bp大小的DNA片段，確認為禽類痘病毒。箭號所指DNA標記為500 bp。使用8%洋菜凝膠電泳分析。

藥物在不影響效力及安全的原則下,可以允許生產過程引入的微量雜質存在. 3雜 質 檢 查 藥物在不影響效力及安全的原則下,可以允許生產過程引入的微量雜質存在. 經由檢查判斷藥品純度是否符合限量規定的要求.

臟器疫苗

同樣是政府檢驗合格 組織培養疫苗 沒有以下的風險 1. 過敏的風險 2. 病毒迷入的風險 3. 10無害菌/劑 的風險 4. 抗生素的風險 5. 保存性的風險 6. 品質穩定的風險 7. 效力的風險 cn\cn-econ

生物藥物安全性要求 4安全性 檢查 (1).毒性試驗：高劑量的藥物依指定方法, 給予規定體重的試驗動物，觀察其毒性 反應。以試驗動物的死亡與否為指標。 (2).無菌檢查：確認沒有本菌或雜菌。 (3).熱源檢查：將一定劑量的樣品，静脈注 入家兔體内，以其體温升高的程度，判 定樣品中所含熱源是否符合規定。

無菌試驗 SDA TSA TGC Mycoplasma

豬瘟活毒疫苗豬隻安全試驗 選18-25公斤 8週齡 SPF豬 5頭， 1隻為對照，試驗豬 4頭， 皮下注射100及1/100劑量各2頭， 14日觀察均須無任何不良反應而健存

1. 藥品通過鑑别、安全合格後進行效力測定. 5 效力檢查 2. 生物製品是具有生物活性的製劑，它的效 力一般是利用生物體來測定樣品的效價 3. 效力以生物體對樣品的反應為基礎 4. 以生物統計為工具 5. 特定的實驗設計 6. 比較樣品和對照品在一定條件下所產生的 差異來測定樣品的效價。 5 效力檢查

方法 1 1、動物保護力試驗 疫苗免疫動物后，再用同種的活菌、 活毒攻擊，從而判定製品的保護力。 （1）定量免疫定量攻擊法 （2）變量免疫定量攻擊法—— 50%有效免疫劑量 PD50 的測定 （3）定量免疫變量攻擊法——保護指 数測定 PI index 5 效力檢查

方法 2 5 效力檢查 2、活疫苗的效力測定 （1）活菌數測定 （2）活病毒滴度測定 3、血清內抗體測定 主要測定抗體水平用於推斷抗原活性。 常用包括凝集法，間接血凝抑制法、 中和法等。 4、電泳法 5 效力檢查

重點: 30 colonies -- 300 colonies 是最適當的計算菌斑 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1 2 3 1 2 9ml 9ml original 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml A B C D E F 1 2 3 original 1ml 99 ml A B 0.1ml 99 ml 99 ml C 99ml 99ml

Hemagglutination (紅血球凝集)測定: 方法 1:8 1:2 1:2 1:2 1:2 1:2 virus 系列稀釋 8 16 32 64 128 256 與紅血球混合 側視 頂視 病毒力價 = 32 HA units/ml

NDV+ NDV- HA test

病毒含有量試驗-間接方法

病毒含有量試驗-直接方法 gE- gE-/TK- TNL

豬瘟活毒疫苗 豬隻效力試驗 將前項安全試驗豬4頭，於疫苗接種後第14日，皮下注射豬瘟強毒ALD株10,000 MLD攻擊， 觀察2週，均須無不良反應而耐過健存，但對照豬須於2週內呈典型急性豬瘟病症而斃死。

檢驗標準-病毒迷入試驗 1劑量與具有1000倍以上血清等量混合，37度感作1小時。 分別接種豬腎、兔腎等株化細胞及兔出血熱抗體陰性之兔5隻。 細胞培養者經培養5日，須無細胞變性效應，並經次代同源細胞繼代培養7日，亦須無細胞變性效應。

檢驗標準-病毒迷入試驗 以天竺鼠、鵝及雞紅血球分別進行吸附試驗，均須呈陰性反應。 家兔接種者，觀察2週，均須無 40.5度以上之熱反應而健存。

6記錄及報告 (1)原始記錄 記錄完整、無缺頁；内容簡明； 宜用原子筆書寫；字跡清晰、不得塗改 （寫錯時,劃線後在旁邊改正重寫,並簽名） (2) 報告内容 a 樣品名稱、批號、規格、數量、来源； 取樣方法、日期；外觀性狀、包裝. b 檢驗目的、方法與依據；檢驗數据. c 結論及處理意見； d 檢驗者、覆核者簽名 6記錄及報告

動物用生物藥品檢驗標準 活(菌毒)成品品管規範 一、特性試驗： 二、無菌試驗：Bact., Fungi, Myco 三、真空,含濕度試驗：Live 四、抗原含有量試驗：Direct or indirect 五、認定試驗：Unique ID test 六、病毒迷入試驗： Ag-Ab test or PCR 七、安全效力試驗： Target animal or other, Challenge, Efficacy or PI, PD50 八、抗體力價, 發痘 九、福馬林殘留量

IT’S A FINE BALANCE 安全 效力

疫苗產製-品管檢驗 細菌,病毒 次單位 DNA 研發品管 效力 安全 活體, 細胞, 發酵 半成品品管 GMP管理 品質 均一性 成品 活體, 細胞, 發酵 半成品品管 GMP管理 品質 均一性 成品 成品品管 自家 國家 安全 效力 滅活 減毒 單價, 混合, 多價 水,油質 凍乾

移行抗體 母豬初乳 分娩後初乳抗體大幅提高 32x  (512x) 8192x~2048x 移行抗體力價高低 初乳抗體力價 小豬體積成長 中和病原耗損 蛋白質自然半衰期 高, 無法啟動免疫 低, 病毒入侵 影響 免疫

512x 超高移行抗體 抗體陽轉 中高移行抗體 低移行抗體 抗體陽轉 32x 抗體陽轉 100%保護 16x 8x 4x 注射免疫 3~4週 0週 13週

黏膜免疫 疫苗免疫途徑可影響免疫反應的發生 疫苗主要經由皮下或肌肉注射, 不活化疫苗主要產生體液免疫 活疫苗主要產生細胞免疫 大部分的病原經過黏膜進入體內致病 黏膜免疫可引局部發黏膜 (IgA)及 全身免疫反應(IgG)