第七章 苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析 Phenethylamine

一、结构 (Structure) 拟肾上腺素类药物，分子结构中具有苯乙胺基本结构 R1 R2 R3 HX 肾上腺素 (adrenaline) 盐酸克伦特罗 (clenbuterol hydrochloride) 硫酸沙丁胺醇 (salbutamol sulfate) 盐酸麻黄碱 (ephedrine hydrochloride)

二、化学性质 (feature) 弱碱性：烃胺基侧链，仲胺氮－弱碱性 游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其盐可溶于水 酚羟基特性：邻苯二酚（或苯酚）结构，与金属离子络 合呈色；在空气中或遇光、热易氧化，色 泽变深；在碱性溶液中更易变色。 光学活性：手性碳原子，具有旋光性。 苯环取代基特性：如盐酸克伦特罗芳伯氨基； 紫外、红外吸收特性进行定性、定量分析。

三、鉴别试验 (identification) 1、与三氯化铁反应、与甲醛－硫酸反应 药物 三氯化铁 甲醛－硫酸 肾上腺素 Adrenaline 0.1mol/L盐酸液中显翠绿色，加氨试液显紫色，紫红色 红色 重酒石酸去甲肾上腺素 Noradrenaline bitartrate 翠绿色，加碳酸氢钠试液显蓝色，红色 淡红色 盐酸去氧肾上腺素 Phenylephrine hydrochloride 紫色 玫瑰红，橙红，深棕红 盐酸异丙肾上腺素 Isoprenaline hydrochloride 深绿色，滴加新制5%碳酸氢钠液，显蓝紫色，红色 棕色，暗紫色 盐酸多巴胺 Dopamine hydrochloride 墨绿色，滴加1%氨溶液，显紫红色

三、鉴别试验 (identification) 2、氧化反应（酚羟基，易被碘、过氧化氢、铁氰化钾氧化呈现不同颜色） 肾上腺素 盐酸异丙 重酒石酸 去甲肾上腺素 无色、微红色、 淡紫色 红棕色或紫色 酒石酸氢钾饱和液 pH 3.56 碘试液 放置5min 硫代硫酸钠 Notice : pH 6.5加碘，均被氧化为红色，无法区别三者

三、鉴别试验 (identification) 3、与亚硝基铁氰化钠反应(Rimini试验) 重酒石酸间羟胺的脂肪伯氨基 水 亚硝基铁氰化钠试液 重酒石酸间羟胺 红紫色 溶解 丙酮数滴，碳酸氢钠少量 △ 脂肪伯氨基的专属反应 丙酮不含有甲醛

三、鉴别试验 (identification) 4、双缩脲反应 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱，芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应。 例：Chp2005，鉴别盐酸麻黄碱 方法：取本品1%水溶液1ml，加硫酸铜试液2滴与20%氢氧化钠液1ml，即显蓝紫色，加乙醚1ml振摇、放置，乙醚层显紫红色，水层变为蓝色。

三、鉴别试验 (identification) 5、紫外特征吸收 药物 溶剂 浓度(mg/ml) λnm (nm) 吸收度 (A) 重酒石酸间羟胺 水 0.10 272 盐酸异丙肾上腺素 0.05 280 0.50 盐酸多巴胺 0.5%硫酸 0.03 盐酸芬氟拉明 0.1mol/L盐酸 0.25 263, 270 盐酸苯乙双胍 0.01 234 0.60 盐酸克伦特罗 243, 296 硫酸沙丁胺醇 0.08 274 盐酸伪麻黄碱 251, 257, 263 红外特征吸收：上述药物还可采用红外吸收光谱进行鉴别。

四、特殊杂质检查 (Detection of specific impurities) 1、酮体检查 生产工艺：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。 紫外分光光度法检查酮体的条件及要求 药物 检查的杂质 溶剂 样品浓度(mg/ml) 测定波长(nm) A 肾上腺素 肾上腺酮 HCl(9→2000) 2.0 310 不得过0.05 盐酸去氧肾上腺素 酮体 水 不得大于0.20 重酒石酸去甲肾上腺素 去甲肾上腺酮 不得大于0.05 盐酸异丙肾上腺素 不得大于0.15 盐酸甲氧明 酮胺 1.5 347 不得大于0.06

例：肾上腺素中肾上腺酮的检查 样品 供试品液(2.0mg/ml) A310nm 规定： A310nm≯0.05 盐酸溶液 (0.05mol/L) A310nm

四、特殊杂质检查 (Detection of specific impurities) 2、TLC法检查有关物质 例：盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇 检查方法：避光操作。取本品，加甲醇制成每1ml含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取上述溶液适量，加甲醇稀释成每1ml中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异丙醇－氯仿－浓氨溶液(80:5:15)为展开剂，展开后，晾干，喷以重氮苯磺酸试液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。

特殊杂质检查 (Detection of specific impurities) 3、盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查 有关双胍 取本品1.00g ，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法试验，精密吸取上述溶液0.2ml ，分别点于两张色谱滤纸条(7.5cm ×50cm) 上，并以甲醇作空白点于另一色谱滤纸条，样点直径均为0.5 ～1cm ；照下行法，将上述色谱滤纸条同置展开室内，以醋酸乙酯－乙醇－水(6:3:1) 为展开剂，展开至前沿距下端约7cm 处，取出，晾干，用显色剂（取10％铁氰化钾溶液1ml ，加10％ 亚硝基铁氰化钠溶液与10％氢氧化钠溶液各1ml ，摇匀，放置15min，加水10ml与丙酮 12ml，混匀）喷其中一张点样纸条（有关双胍显红色带，Rf值约为0.1 ），参照此色谱带，在另一张点样及空白纸条上，剪取其相应部分并向外延伸1cm ，并分剪成碎条，精 密吸取甲醇各20ml分别进行萃取后，照分光光度法（附录Ⅳ A），在232nm 的波长处测定吸收度，不得过0.48。

含量测定 (Assay) 制剂： 比色法 紫外分光光度法 高效液相色谱法 原料： 非水溶液滴定法 溴量法 亚硝酸钠法

含量测定 (Assay) 1、溴量法—盐酸去氧肾上腺素和重酒石酸间羟胺 基本原理： 测定方法：取本品约0.1g，精密称定，置碘瓶中，加水20ml使溶解，精密加溴 滴定液(0.1mol/L)50ml，再加盐酸5ml,立即密塞，放置15分钟并时时振摇，注意微开瓶 塞，加碘化钾试液10ml ，立即密塞，振摇后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至 近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml溴滴定液(0.1mol/L)相当于3.395mg 的C9H13NO2·HCl。

含量测定 (Assay) 2、比色法 测定原理： 注意：由于偶合剂（N-(1-萘基)-乙二胺）与亚硝酸也能显色干扰测定，所以在重氮化后，应加入氨基磺酸铵分解剩余的亚硝酸。

3、非水溶液滴定法 （一）背景知识 弱碱Kb≤10-8，水溶液中直接滴定没有明显的滴定突跃，终点难以判断。 非水的酸溶剂冰醋酸中，相对碱度显著增强，可用高氯酸的冰醋酸滴定液进行滴定。

（二）基本原理: BH+A- HClO4 BH+ClO4 HA 1、游离碱肾上腺素---酸碱反应 置换出的弱酸 游离碱类盐 HA酸性较强，反应不能定量完成，必须除去或降低HA的酸性，使反应顺利地完成。

（三）方法 HClO4滴定 供试品 冰醋酸 结 果 空白试验校正 指示剂 若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml-5ml + 指示剂 若供试品为氢卤酸盐再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml-5ml 10ml-30ml 碱性溶液pKb>10，冰醋酸中滴定突跃不明显，需加入醋酐，使碱性增强，突跃更明显

（四）问题讨论： 1.适用范围 主要用于Kb＜10-8的有机碱盐的含量测定。 碱性较弱的杂环类药物，采用合适的溶剂、滴定剂和终点指示的方法，可使pKb为8～13的弱碱性药物采用本法滴定。 Kb 溶剂 10-8～10-10 冰醋酸 10-10～10-12 冰醋酸与醋酐的混合溶液 ＜10-12 醋酐 冰醋酸中加入适量甲酸，也能使滴定突跃显著增大。

咖啡因(pKb=14.2)

高氯酸＞氢溴酸＞硫酸＞盐酸＞硝酸＞磷酸＞有机酸 2.酸根的影响 (1)、醋酸介质中各种酸酸性顺序： 高氯酸＞氢溴酸＞硫酸＞盐酸＞硝酸＞磷酸＞有机酸 (2)、滴定液：高氯酸的醋酸溶液 但滴定置换出的酸酸性较强（如氢卤酸），反应不能进行到底 (3)、消除HX干扰的方法：加Hg(Ac) 冰醋酸溶液，生成难解离卤化汞 2B·HX + Hg(Ac)2 → 2B·HAc + HgX2 不足：测定结果偏低 过量(1～3倍)不影响测定结果

3.滴定剂的稳定性 溶剂：醋酸 具有挥发性，膨胀系数较大 温度和储藏条件影响滴定剂的浓度。 4.终点指示方法---电位法和指示剂法 电位法：电位滴定 指示剂法：结晶紫、萘酚苯甲醇、喹哪啶红 终点颜色由电位滴定确定

硫酸盐类药物：硫酸为二元酸，但在非水介质中只发生一级解离，生成HSO4- ，只能滴定到硫氢酸盐。 （五）、应用实例 游离弱碱性药物：肾上腺素 结晶紫为指示剂，非水溶液直接滴定，终点颜色绿色～蓝绿色。 氢卤酸盐类药物： 加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，形成难电离的卤化汞，用高氯酸滴定，以结晶紫、橙黄Ⅳ为指示剂，或电位法指示终点。 硫酸盐类药物：硫酸为二元酸，但在非水介质中只发生一级解离，生成HSO4- ，只能滴定到硫氢酸盐。

硝酸盐类： 滴定反应完全，但硝酸由于氧化性破坏指示剂使其变色 使用电位滴定法指示终点。 磷酸盐类：冰醋酸中酸性极弱，直接滴定。