生 物 碱 类 化 合 物 提 取 分 离

Ⅰ、 概 述 生物碱是指一类绝大多数具有显著活性的碱性、天然氮杂环化合物，但不包括氨基酸、蛋白质、核苷、卟啉、胆碱甲胺等开链的简单脂肪胺。它的氮原子常在环上。 生物碱广泛地分布在植物界，又称植物碱。表1。

一、结构与分类 生物碱的分类有三种分法，可按来源分、按化学结构分、按生源结合化学结构分。其中按化学结构分类在目前占主导地位，将具有同样骨架的生物碱归纳在一起，有利于结构的分析和研究。

按化学结构分类——根据生物碱具有的化学结构母核分类。 1、杂环衍生物类 异喹啉类生物碱、喹啉类生物碱、吡咯烷类生物碱、吲哚联啶类生物碱、哌啶和吡啶类生物碱、莨菪烷类生物碱、吲哚类生物碱 2、萜衍生物类 3、甾衍生物类 4、环肽生物碱类 5、有机胺类生物碱

二、生物碱的理化性质及检识 1、性质 除少数为液体（如烟碱、毒芹碱等），大都为结晶性物质，味苦，能溶于氯仿、丙酮、乙醇等有机溶剂中，不溶于碱水。酚性生物碱能溶于柯性碱溶液。 生物碱的碱性强弱有差别，一般能与无机酸或有机酸生成盐，大部分生物碱盐都能溶于水。但与某些特殊的酸生成的盐不溶于水，如无机酸中的硅钨酸和有机酸中的苦味酸。

2、生物碱的颜色反应 生物碱与不同的显色试剂反应，显示的颜色不同，可用来区别和判断生物碱。用于生物碱的显色试剂很多，常用试剂有： ⑴Mandelin试剂（1%钒酸胺的浓硫酸溶液）——阿托品显红色，奎宁显淡紫色，吗啡显蓝紫色，可待因显蓝色，土的宁显蓝紫色到红色。

⑵Marquis试剂（30%甲醛溶液0.2ml与10ml浓硫酸混合）——吗啡显橙色到紫色，可待因显洋红色至黄棕色，古柯碱和咖啡碱不显色。 ⑶浓硫酸——秋水仙碱显黄色，可待因显淡蓝色，小檗碱显绿色，阿托品、古柯碱、吗啡及土的宁等不显色。

⑷Fornde试剂（1%钼酸钠或5%钼酸铵的浓硫酸溶液）——乌头碱显黄棕色，吗啡显紫杉转棕色，可待因显暗绿色至淡黄色，黄连素显棕绿色，秋水仙碱显黄色，阿托品、土的宁不显色。

三、常见的提取方法 ◆水提取法 ◆酸性水溶液提取法：碱性较弱不能直接溶于水的生物碱 ◆碱性水溶液提取法：化学结构独特、化学性质与一般生物碱不同，且在酸性或中性条件下不稳定的生物碱。 ◆有机溶剂提取法：常用的是乙醇，相似相溶原理。可采用单一有机溶剂或混合溶剂提取。

四、分离和纯化 分离方法有很多， 经典方法：如溶剂萃取法、蒸馏法、沉淀法、盐析法、结晶法等； 较为现代、先进的分离方法：色谱分离法

实例一：长春花 　　【拉丁名】Herba Catharanthi rosei 　　【类别】全草类 　　【异名】雁来红、日日新，四时春、三万花 　　【来源】为夹竹桃科植物长春花的全草。 　　【采集】全年可采，晒干或鲜用。 　　【化学成份】含70种以上生物碱，主要有长春碱 、长春新碱、阿马里新等。

　 【性味归经】微苦，凉入肝、肾二经。 　 【功用主治】 ①广州部队《常用中草药手册》：“镇静安神， 平肝降压。治高血压。” 　 ②《常用中草药彩色图谱》：“治疗何杰金氏病 、恶性肿瘤。” 　③《广西药植名录》：“治白血病，肺癌，绒毛 膜上皮癌，淋巴肿瘤。”

1、长春碱和长春新碱的提取分离方法之一

实例二：黄连 毛茛科多年生草本植物。 【功能主治】清热燥湿，泻火解毒。用于湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢心烦不寐，血热吐衄，目赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮；外治湿疹，湿疮，耳道流脓。 化学成分主含小檗碱，还含黄连碱、甲基黄连碱等。

1、盐酸小檗碱的提取分离

2、小檗碱、甲基黄连碱的提取分离

实例三：麻黄

1、提取分离方法一

2、提取分离方法二

黄 酮 类 化 合 物 提 取 分 离

黄酮类化合物广泛存在于植物界，（如， 大蓟、车前子、陈皮、苦参、金银花、野菊 花、甘草、红花等等都含有黄酮类化合物成 分）是一类重要的天然有机化合物。常以游 离态或与糖结合成苷的形式存在。

黄酮类化合物生理活性多种多样，据不完全统计， ①对心血管系统的作用；②抗肝脏毒作用； ③抗炎作用； ④雌性激素样作用； ⑤抗菌及抗病毒作用； ③泻下作用。

截止到1974年，国内外报道发现的黄酮类化合物共1674个（主要是天然黄酮类，也有少部分为合成品，其中苷元902个，苷722个），并以黄酮醇类最多；约占总数的三分之一，其次为黄酮类，占总数的四分之一以上，其余则较少。至于双黄酮类多局限分布于裸子植物，尤其松柏纲、银杏纲和凤尾纲等植物中。 截止到1993年统计，黄酮类化合物总数已超过4000个。

一、结构与分类 分类： 1、黄酮和黄酮醇 2、二氢黄酮和二氢黄酮醇 3、查耳酮 4、双黄酮 5、异黄酮和二氢异黄酮 6、黄酮苷

二、理化性质及检识 1、性质 黄酮游离的苷元一般不溶或难溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂；黄酮苷一般能溶于水、稀乙醇、甲醇和乙酸乙酯等极性溶剂。 由于结构中存在酚羟基，能溶于吡啶、二甲基酰胺等碱性溶剂中，可利用此性质对黄酮类化合物进行重结晶。

2、黄酮类化合物的颜色反应 ⑴三氯化铝反应——将样品溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液， 3-羟基黄酮（黄酮醇）和5-羟基黄酮的因与铝产生螯合物而呈鲜黄色。 ⑵盐酸-镁还原反应和钠汞齐还原反应——将样品溶于热甲醇（或乙醇）中，加镁粉（或锌粉），再加浓盐酸后，黄酮、黄酮醇、或双庆黄酮醇呈橙黄至紫红色。但查耳酮、异黄酮不变化。少量异黄酮的样品与钠汞齐一起倒在水中，煮沸片刻，过滤，滤液用盐酸酸化析出沉淀，沉淀转溶于乙醇后呈鲜黄至红紫色。

三、常见的提取方法 1、溶剂提取法：有机溶剂 2、碱提酸析法 黄酮类物质虽然有一定极性，但在水中较难溶解，大多具有酚羟基，因此可用碱性水或碱性稀醇浸出，经酸化后得出黄酮类物质。常用稀氢氧化钠和石灰水（氢氧化钙水溶液）。根据提取物性质不同选择不同的碱液。 注意：应用此法提取时，温度和碱度不宜过高，以免黄酮类化合物母核发生裂解。

3、超声波法 用超声波提取黄酮类物质是近几年新发展的方法。原理：超声的空化作用对细胞膜的破坏有助于黄酮类化合物的释放与溶出，超声波使提取液不断震荡，有助于溶质的扩散，同时由于超声波的热效应使水温基本在57℃，对原料有水浴作用。 因此，大大缩短了提取时间，提高了有效成分的提出率及原料的利用率。

四、分离纯化方法 1、硅胶柱层析法 主要用于分离极性较低的黄酮类物质如异黄酮、黄烷醇类和高度甲基化的黄酮和黄酮醇。分离前应先用浓盐酸除去供试硅胶中混存的微量金属离子。

硅胶柱上各种溶剂的洗脱能力依次为： 石油醚＜四氯化碳＜苯＜氯仿（不含乙醇） ＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜正丙醇＜乙醇＜甲醇＜水 该法为分离纯化黄酮类化合物的常用方法，化合物按照极性大小由小到大依次被洗脱下柱。

2、梯度pH萃取法 根据黄酮酚羟基数目及位置不同，其酸碱性强弱不同，将酸性不同的混合物溶解于有机溶剂中，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、5%NaOH水溶液萃取。 一般，分离的次序为：一羧基＞7，4’-二羟基（溶于5%NaHCO3）＞7-羟基或4-羟基（溶于5%Na2CO3）＞一般羟基＞5-羟基（溶于5%NaOH ）

实例一：槐花

1、方法一：酸碱法

2、方法二：醇提法

3、方法三

实例二：银杏

2、银杏叶中黄酮类化合物的提取与分离

3、银杏叶中双黄酮的提取分离

4、银杏叶中黄酮醇苷的提取分离

实例三、菊花