微生物实验 电子科技大学生命科学与技术学院 郑雪莲

实验注意事项 无菌概念 预习 操作注意事项 实验环境、安全 领用登记 清洁 微生物实验

实验报告 实验原理：简明扼要，忌长篇抄写实验指导内容。 实验目的：1-2点即可 实验内容： 实验器材（设备、元器件）： 应包含试剂、药品和器材；但只写主要的。 实验步骤：只写主要步骤，简要 微生物实验

实验结果及数据分析：详细的、原始的实验结果记录，有图附图，有表附表；需要计算的给出计算过程。 实验结论：根据实验结果的图表及计算结果，给出的结论。一定要下结论。 总结及心得体会：要写，根据自己实验的效果分析实验成败的原因等。 建议：鼓励大家写，根据自己的体会去写，利于今后实验的改进。 微生物实验

实验一 培养基的配制和灭菌 实验目的 了解培养基的配制原理和过程，掌握其配制方法。 了解高压蒸汽灭菌的原理和方法，掌握操作步骤。 微生物实验

湿热灭菌： 高压蒸汽灭菌 干热灭菌 辐射灭菌 过滤灭菌 化学灭菌 渗透压灭菌 微生物实验

实验内容 配制三种培养基 牛肉膏蛋白胨培养基（LB培养基） 高氏一号培养基 马铃薯-蔗糖培养基（PDA培养基） 培养基灭菌 微生物实验

实验方法和步骤 计算 称量 溶解 定容 调节pH值 移入三角瓶，加入琼脂 高压灭菌 微生物实验

实验任务 配制三种培养基 每4-5人一组，每组配制： 牛肉膏蛋白胨培养基200-250ml，可倒8-10个平板 PDA培养基50ml ，可倒2个平板 微生物实验

注 意 事 项 配制培养基一般用常温的水，对于难以溶解的药品可用磁力加热搅拌器促溶。 需要调节pH的培养基，一定要调pH值。 琼脂粉末定容后加入灭菌的三角瓶即可，无需提前溶解。灭菌后需充分摇匀。 无需分装，灭菌后直接倒平板。 微生物实验

思 考 题 微生物培养基应具备哪些条件和成分？ 培养基中加入琼脂的作用是什么？ 培养基配制好后为什么必须立即灭菌？如果不能立即灭菌应怎么办？ 如何检查培养基灭菌是否彻底？ 微生物实验

实验二 环境微生物的检测 实验目的 了解周围环境中微生物的分布状况。 牢固树立“无菌”概念。 学会无菌操作倒平板培养基的方法。 微生物实验

实验内容 倒平板（LB、高氏一号、PDA平板） 微生物的接种 微生物实验

实验方法和步骤 倒平板 标记 土壤微生物的分离 微生物实验

环境或人体微生物的接种 或其他你感兴趣来源的微生物接种 接种后平板封口 倒置培养（28℃或37℃） 微生物实验

结 果 举 例 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 微生物实验

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实验任务 土壤微生物分离 每小组接种LB、PDA、高氏平板各2个，共计6个。 其他微生物检测 每小组接种2个LB平板，注意两个平板间的对照。 微生物实验

注 意 事 项 培养基温度降低到50℃左右才倒平板。 倾倒平板时培养基量要适中。 严格无菌操作。 微生物实验

思 考 题 为什么培养基要在50℃左右才能倒平板，不可太高也不可太低？ 为什么接种好的平板要倒置培养？ 通过本实验后，谈谈你对微生物分布及数量的认识。 微生物实验

实验三 最低抑菌浓度(MIC)的测定 实验目的 了解MIC测定的原理。 掌握滤纸片法的操作方法。 （K-B法或透明圈法） 微生物实验

实验内容 检测常见抗生素对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抗性。 微生物实验

实验方法和步骤 √ 微生物实验

将200ul菌液用涂布棒均匀的涂布在LB平板表面； 吹干，待表面无液体流动； 将镊子在酒精灯火焰上灼烧灭菌，冷却后夹取灭菌的滤纸圆片，放于平板表面的适宜位置； 用小枪头滴加5ul左右不同的抗生素及无菌水于滤纸片上，做好标记 平板封口，倒置培养。 微生物实验

结果分析 敏感 sensitive 抗性resistant 抑菌圈 inhibition 微生物实验

实验任务 每小组LB平板4-6个，大肠杆菌（E.coli），金黄色葡萄球菌（S.aure）各一管。 每小组抗生素一组，浓度均为2mg/ml，包括： 氨苄西林（Amp，Ampcillin） 头孢霉素（Cef， Cefotaxime ） 链霉素（Stm， Streptomycin ） 卡那霉素（Kan，Kanamycin） 青霉素（Pen，Penicillin） 每个人均需动手，选一个菌株做一个平板，每组至少做2个大肠杆菌、2个金黄色葡萄球菌。 微生物实验

注 意 事 项 涂布平板时，涂布棒灼烧灭菌后一定要自然冷却，以免烫死细菌。 药物必须混匀，否则将影响结果准确性。 滤纸片放入相应位置，做好标记，可用无菌水做对照。 微生物实验

思 考 题 用MIC法进行药敏实验时，培养基中菌细胞的量对结果有什么影响？ 课后了解MIC法的实际应用。 微生物实验

下次实验请带 实验服：避免染液污染衣物 直尺：用于这次实验结果的观察测量 拍照工具：相机、手机，用于结果记录 微生物实验

实验四 细菌的简单染色和 革兰氏染色 实验目的 掌握细菌涂片和简单染色的方法。 学习并掌握革兰氏染色的基本原理和制片技术。 微生物实验

实验内容 对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌进行简单染色和革兰氏染色观察，并记录结果。 微生物实验

实验方法和步骤 详见实验指导书 染液的量、染色时间均需要自行调节 固定、脱色 低倍镜下观察 高倍油镜下观察 微生物实验

实验任务 每组完成对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的染色观察 描述并绘制（拍摄）简单染色后，两种菌的颜色和形态 描述并绘制（拍摄）革兰氏染色后，两种菌的颜色，根据结果判定两种菌是革兰氏阳性还是阴性。 微生物实验

注 意 事 项 载玻片要洁净无油，否则菌液涂不开。 挑菌量宜少，涂片宜薄。 革兰氏染色成败的关键是脱色时间。注意随时调节脱色时间。 染色过程中勿使染色液干涸。 微生物实验

结 果 举 例 大肠杆菌简单染色结果 微生物实验

G- G+ 微生物实验

思 考 题 涂片为什么要固定？固定的目的之一是杀死菌体，这与用自然死亡的菌体进行染色有何不同？ 革兰氏染色的关键是哪一步？为什么？你如何控制这一步的？ 不经复染能否区别革兰氏阳性菌和阴性菌？ 微生物实验

实验五 微生物的显微镜 直接计数法 实验目的 掌握血球计数板进行微生物计数的方法。 微生物实验

实验任务 对给定的酵母菌液进行细胞计数 微生物实验

实验方法和步骤 微生物实验

计 算 公 式 细胞数/ml＝每小格细胞数×4000×1000×稀释倍数 25中格计数板： 16中格计数板： 细胞数/ml＝每中格细胞数×16×10×1000×稀释倍数 微生物实验

注 意 事 项 加菌液时，量不应过多，不能产生气泡。 由于酵母菌菌体无色透明，计数观察时应仔细调节光线。 为了减少误差，应避免重复和遗漏，对线上的菌体采取科学的方法计数。 微生物实验

思 考 题 为什么计数室不能有气泡？ 显微镜直接计数法有什么优缺点。 试分析本实验结果的误差来源，提出改进措施。 微生物实验

实验一：微生物的分离与检测 内容：3种培养基的配制、土壤微生物的分离、环境微生物的检测。 实验试剂、器材：包括培养基配方 结果： 记录本实验所配制培养基的名称和数量。 记录高压蒸汽灭菌的结果。 结合其他小组的情况，记录分离接种实验结果（表格见实验指导p9）。 结论：关于微生物的分布等 微生物实验

实验二：MIC测定 结果： 分别记录两个抑菌平板抑菌圈的大小（直径） 结论： 5种抗生素的抗性比较 两种细菌对不同抗生素敏感性的比较 微生物实验

实验三 染色 结果： 结论： 拍摄或者绘制两种细菌简单染色的结果，描述其形态和颜色 拍摄或者绘制两种细菌革兰氏染色的结果，描述其形态和颜色 两种细菌经简单染色后，观察到的差异 经革兰氏染色后，观察到的差异，及革兰氏阴性、阳性菌的判定。 微生物实验

实验四 计数 结果： 实验指导p16的计数原始记录表格 结论： 根据公式计算菌细胞数的过程及结果 重复实验的，取平均数 微生物实验

谢 谢 请将实验报告于6月30日前交至学习委员或周建平老师、陈苗苗老师处 微生物实验