细胞工程简介 — 动物细胞工程 生物组林婷婕

二、动 物 细 胞 工 程 本节聚焦: 动物细胞培养的过程、条件及应用 动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用 动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用 重点与难点： 动物细胞培养的过程及条件 单克隆抗体的制备和应用

第一课时 动物细胞培养能像植物组织培养那样最终培养成新个体吗 ？ 不 能 动物细胞培养只能使 细胞数目增多

（一）动物细胞培养 1. 发 展 简 史: 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。

2、动物细胞培养的概念： 从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 用培养的人细胞构建的人造皮肤 从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖.

3 动 物 细 胞 的 培 养 过程 ： 取材： 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 过程： 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系

相 关 概 念: 原代培养：第1代与传10代以内的细胞培养称为原代细胞培养，从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。 相 关 概 念: 原代培养：第1代与传10代以内的细胞培养称为原代细胞培养，从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。 传代培养： 将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 细胞株： 原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部 分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40-50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系： 细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。

动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础 动物细胞的培养过程 取动物器官 和组织 剪碎组织 幼龄动物 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础

为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理 ？ 可使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。

4. 动物细胞培养的条件: 无菌、无毒的环境: (2) 营 养: 促生长因子、葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、血清、血浆 (2) 营 养: 促生长因子、葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、血清、血浆 (3) 温 度 和 pH: 36-370C、7.2-7.4 (4) 气 体 环 境： CO2、 O2

5. 应 用 如：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 ( 2 )健康细胞培养 用于烧伤病人的皮肤移植 ( 3 ) 细胞的生理、药理、病理研究 5. 应 用 ( 1 ) 蛋白质生物制品的生产 如：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 ( 2 )健康细胞培养 用于烧伤病人的皮肤移植 ( 3 ) 细胞的生理、药理、病理研究 ( 4 ) 培养动物细胞检测有毒物质

6. 植物组织培养和动物细胞培养的比较 细胞的全能性 细胞增殖 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 固体培养基 6. 植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞增殖 培养基性质 固体培养基 液体培养基 培养基特有成分 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 培养结果 植物体 细胞株、细胞系 培养目的 快速繁殖、培育无病毒植株 获得细胞或细胞分泌蛋白

思 考 细胞生命力旺盛，分裂能力强 分散了做成细胞悬浮液利于培养 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等。 独特之处有： 1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 细胞生命力旺盛，分裂能力强 3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 分散了做成细胞悬浮液利于培养

( 二 ) 动物体细胞核移植技术和克隆动物 动物核移植 ： 是将动物的一个细胞的细胞核 , 移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中 , 使其重组并发育成一个新的胚胎 , 这个新的胚胎最终发育为动物个体

胚胎移植技术 基本程序（以牛胚胎移植为例）

体细胞核移植技术 1. 克隆羊培育过程 细 胞 核 移 植 重组细胞 电脉冲刺激 早期胚胎 胚 胎 移 植 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 黑 面 绵羊 去核卵细胞 白 面 绵羊 乳腺细胞核 1. 克隆羊培育过程 细 胞 核 移 植 重组细胞 电脉冲刺激 早期胚胎 胚 胎 移 植 另一头绵羊的子宫 妊娠、出生 克隆羊“多利”

①体积较大，便于操作；②为细胞核的全能性表达提供环境。 受体细胞用去核卵母细胞的原因： ①体积较大，便于操作；②为细胞核的全能性表达提供环境。

体 细 胞 核 移 植 技 术 的 应 用 前 景 体细胞核移植技术用于人类疾病治疗

体细胞核移植技术存在的问题

课堂训练 1. 动物细胞工程技术的基础是（　） 　 A．动物细胞融合 B．胚胎移植 C．动物细胞培养 D．核移植 Ｃ

2. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞 和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基 筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能 存活增殖的细胞是（ ） 2. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞 和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基 筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能 存活增殖的细胞是（ ） ①淋巴细胞　 ②小鼠骨髓瘤细胞　 ③B淋巴细胞自身融合细胞　 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞　 ⑤杂交瘤细胞 A． ②④ B．①③⑤ 　　 C． ①②③④ D．②③ C

3、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案 B 体外培养 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 足够数量的细胞群 注射到 小鼠腹腔 A C 制备单克隆抗体 (2)、该方案能达到预期效果吗？为什么？ (4)、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。 (1)、该实验方案的目的是__ ________ (3)、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______ (5)、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。 抗体 B细胞 细胞融合 灭活病毒 双亲细胞 分泌抗体 无限增殖 原代 传代 50

THE END