结题报告

研究课题名称 利用育英学校植被进行组织培养

成员：王歆妍、陈紫箫、方依琪、 田惠灵、路正佳、罗霄 学术导师：许晓滨 课题组 成员：王歆妍、陈紫箫、方依琪、 田惠灵、路正佳、罗霄 学术导师：许晓滨

研究背景 多种植物能够通过组织培养的方法获得了再生植株，植物组织培养已经变成了一种常规的实验技术，广泛应用于植物的脱毒、快繁、基因工程、细胞工程、遗传研究、工厂化育苗等多个方面。这项研究证明了植物的每一个生活细胞都含有一种植物的全部遗传信息，在一定的条件下可以发育成一个完整的植株。

研究目的意义 研究性学习培养我们的兴趣和合作能力，更重要的是让我们把自己所知道的理论知识和实践结合起来，从而提高我们的综合能力。让我们增长生物学科方面的知识，此研究可以让更多学生了解育校的植被的组培方法 ，通过实验直观的帮助育校丰富组织培养的研究资料与经验 ，令更多人能够找到参考资料与方法。

研究过程 11月10日-11日 合作完成开题报告，确定研究方案和方法，并熟悉组织培养的流程和注意事项，老师根据购物清单准备实验所需物品 11月8日 小组分工查询关于组织培养的资料，并列好购物清单 11月10日-11日 合作完成开题报告，确定研究方案和方法，并熟悉组织培养的流程和注意事项，老师根据购物清单准备实验所需物品 11月12日 展开开题报告并进行答辩，指导老师针对我们的计划方案和方向提出意见，我们及时调整和修改 研究过程

11月13日-14日 参观校园，观察校园中的植被并选择试验样本

②将器材清点完毕：长镊子、锥形瓶、塑料封口膜； ③将锥形瓶内注入少量蒸馏水，放入高压灭菌锅内，制作无菌水和无菌瓶 1月9日 进实验室，开始做正式接种前的准备工作： ①将培养基按比例调配好； ②将器材清点完毕：长镊子、锥形瓶、塑料封口膜； ③将锥形瓶内注入少量蒸馏水，放入高压灭菌锅内，制作无菌水和无菌瓶

1月10日 进实验室在超净工作台上步骤进行接种

将培养基倒在锥形瓶 约一小拇指高，静待凝固

将待栽培植物切成小块状， 放在培养皿中消毒

消毒ING

培养 用镊子将植物小块插进已凝固的培养基中，令其大部分陷入培养基，少部分露块状，放在培养皿中消毒

密封放进恒温箱培养

1月16日 观察实验成果，并针对出现的问题展开讨论和研究

数据分析和结论 这次组织培养的成果并不乐观，大多数的培养瓶中都繁殖了大量的细菌，导致样本无法正常生长，最终实验失败，没有培育出正常生长的植株。对这次失败，我们从多方面展开讨论与探讨，分析研究其中失败的原因。

我们从以下几个方面展开分析和讨论： 1.准备工作； 2.器材的杀菌消毒； 3.样本的杀菌消毒； 4.操作中的失误。

一、准备工作 配置培养基：配置培养基时最重要的是配置比例， 我们用电子秤精确地称量了41.74g培养 基粉与1kg水溶解。有同学提出可能是在 溶解过程中洒出了一小部分，所以有可 能浓度不够导致不能生长。我们讨论后 一致认为其中的影响微乎其微，所以这 不会是实验失败的关键因素。

二、材料、环境的杀菌消毒 培养基、无菌水、无菌瓶的杀菌消毒： 为了能更好的分析问题，我们在实验时保留了一个未接种的培养瓶（装有培养基），与我们接过种的培养瓶一同放入了恒温箱中。但只有接过种的培养瓶繁殖出了大量细菌，未接过种的的培养瓶内十分洁净，没有任何杂菌生长，因此我们认为并不是培养基、无菌水、无菌瓶消毒不到位

对比

三、样本的杀菌消毒 在视频资料中我们知道样品需要用75%酒精、5%次氯酸钠和大量无菌水冲洗2~3次才能达到灭菌的目的，但在实际操作中我们仅用酒精和大量无菌水冲洗了一次，所以对样本的消毒不够彻底，残留了细菌导致实验失败。我们认为这是实验失败的重要因素之一。

四.操作中的失误： 镊子、剪刀的使用： 在操作过程中，每次使用镊子、剪刀等器材前都应该用酒精灯炙烤消毒才能使用。而我们在操作时由于没有真正的操作经验，所以经常会忘记刚刚用完后放在工作台上的镊子还需要再次炙烤灭菌后才能使用，所以很可能导致样本被污染。我们讨论后一致认为这可能是导致实验失败的原因之一。

四.操作中的失误： 样本插入的深度 在插入样本时应该留出一部分在外面，否则植物无法获得氧气会死亡。但是少数同学忽略了这一点，将切好的叶片直接全部插入到了培养基中，导致实验失败。

在观察失败品时我们发现，大量的细菌都是围绕着植物体繁殖出来的，所以失败的原因一定在于关于植物体的各项操作上。再结合以上我们在对各方面的因素讨论之后我们有了初步的结论：在所有操作过程中，由于手、镊子、剪刀和植物体本身的消毒不到位导致了实验的失败。

失败案例 ！！！

我们根据成功案例 总结的注意事项

一、消毒要彻底 1、操作台药用酒精棉球擦一遍，并且手也要消毒 2、用酒精充分浸泡植物体 3、浸泡后对着酒精灯倒无菌水 4、要反复用无菌水冲洗三遍 5、所有操作都要对着酒精灯 6、所有用具用完后要及时盖上封口膜 二、培养基 1、按固定比例配制培养基 2、配置完进行杀菌后要测定培养基的ph值越准确越好 3、到培养基时要靠着酒精灯，要适量 4、待培养基凝固后才能插入植物体 三、植物体 1、植物体不能切太薄 2、插入培养基时不能全部插入

研究成果 通过实验与资料的研究我们发现，植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，植物组织会经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。

在实验中我们得出它一定是在一定特定的条件下进行的，即无菌条件、充足的养分和适合的生长环境，否则会引起细菌等大量繁殖、没有充分的营养吸收、在不符的生长环境下培育等问题导致植物细胞死亡、无法生长，最终组织培养失败。其中任意一项条件都是培养时的必要条件，缺一不可。

谢谢观看~