神经母细胞瘤组织MYCN扩增水平 与Ki-67 LI等生物学指标的关系 王会娟 王焕民 宫丽平 伏利兵 秦红 吕蓓蓓

神经母细胞瘤(NB) 儿童最常见的颅外实体恶性肿瘤 具有自然消退和快速进展两种截然不 同的生物学特点

为NB危险度的评估、治疗方案的选择、预后的判断提供分子学依据 N-Myc基因 N-Myc基因扩增主要发生于进展期NB中，与肿瘤的侵袭行为和不良预后密切相关 为NB危险度的评估、治疗方案的选择、预后的判断提供分子学依据

Ki-67抗原 是一种具有代表性的细胞增殖标记， Ki-67 LI定量地反映肿瘤的增殖情况。 Ki-67标记指数( Labeling Index, LI)： 指肿瘤细胞中Ki-67阳性细胞所占的百分比。

N-Myc 扩增与Ki-67 LI和NB的临床病理因 素间分别有何关系？

研究对象 2008.9至2009.3 30例石蜡包埋组织标本 神经母细胞瘤（NB） 节细胞性神经母细胞瘤(GNB)

研究对象 年龄：2月～9岁6月 ＜18个月 13例， ≥18个月 17例 原发部位：肾上腺 23例， 非肾上腺 7例 性别：男：19例，女：11例； 年龄：2月～9岁6月 ＜18个月 13例， ≥18个月 17例 原发部位：肾上腺 23例， 非肾上腺 7例

研究对象 病理分型： NB： 分化型 8例，分化差型 7例， 未分化型 1例，不明确型 7例 . GNB: 7例 临床参照INSS系统分期： 未分化型 1例，不明确型 7例 . GNB: 7例 临床参照INSS系统分期： 1期 5例， 2期 4例， 3期 6例， 4期 11例， 4S期 4例

研究内容 N-Myc 扩增与Ki-67 LI分别与 NB的临床病 理因素(性别 、年龄、原发部位、分期、分 型、NSE、VMA)间的关系。

实验方法 N-Myc基因的检测：FISH N-Myc基因 获得：拷贝数4～9个； 扩增：拷贝数≥10个。 探针：位点特异性 N-myc/CEP2双色探针 N-Myc基因 获得：拷贝数4～9个； 扩增：拷贝数≥10个。

抗体:鼠抗人Ki-67抗原免疫组化单克隆抗体 阳性细胞是指细胞核内出现棕黄色颗粒 <10% （－） 10%～30% ( + ) 实验方法 Ki-67 LI: 免疫组化二步法 抗体:鼠抗人Ki-67抗原免疫组化单克隆抗体 阳性细胞是指细胞核内出现棕黄色颗粒 <10% （－） 10%～30% ( + ) ≥30% (++)

统计学分析 SPSS 11.5软件 确切概率法。 秩和检验(Mann-Whitney U test， Kruskal–Wallis test)。 P＜0.05认为有统计学意义。

FISH检测N-Myc拷贝数的结果 扩增率 3、4期 17.65%（3/17） 病理诊断: NB 均为男性，就诊时年龄均＞18个月 1.1 5例出现扩增（拷贝数≥10个），扩增率为16.67% 扩增率 1、2、4S期 15.38%（2/13） 3、4期 17.65%（3/17） P＞0.05 病理诊断: NB 均为男性，就诊时年龄均＞18个月 3例为进展期，2例为早期分化差型

FISH检测N-Myc拷贝数的结果 1 表1.5例扩增病例的临床资料 例数/ 诊断 性别/ 年龄 原发部位 INSS分期 病理分型 Ki-67 LI MYCN 拷贝数 术前 化疗 1/NB M/6岁4月 左肾上腺 3 分化型 阴性 >25 是 2/NB M/3岁 未分化型 80% >15 3/NB M/21月 1 分化差型 50% 否 4/NB M/28月 右肾上腺 不明确 >50 5/NB M/5岁 2 分化差

N-Myc拷贝数水平与临床病理因素的关系 2 N-Myc拷贝数水平与临床病理因素的关系 表2. N-Myc P值 扩增（≥10） 获得（4～9） 无异常 INSS分期 1+2+4S 13 2 5 6 Pa=0.222 3+4 17 3 1 Pb=0.021 Pc=0.025 组织学分型 NB 23 15 Pa=0.081 GNB 7 4 Pb=0.066 Pc=0.033 病例数 Pa ：N-Myc扩增组和N-Myc无异常组之间的P值 ; Pb : N-Myc获得组和N-Myc无异常组之间的P值 ; Pc : N-Myc增多组（获得组+扩增组）与无异常组之间的P值。

N-Myc拷贝数水平与NB临床病理因素的关系 2 N-Myc拷贝数水平与NB临床病理因素的关系 2.1 N-Myc扩增水平在另外6组（包括患者性别、年 龄、肿瘤原发部位、是否接受化疗以及血清 NSE、24小时尿VMA水平）中的差异均无统计 学意义（P＞0.05）。

附图 N-Myc无异常，40×100 绿色信号代表N-Myc基因

N-Myc扩增 40x100 绿色信号代表N-Myc基因

Ki-67 LI 与NB其它临床因素间的关系 3 表3. Ki-67 标记指数与肿瘤组织学类型之间的关系 例数 Ki-67 LI P值 平均秩次 P值 ― + ++ NB 23 4 5 14 18.13 0.003 GNB 7 5 2 0 6.86 P<0.05，说明两组的Ki-67 LI有显著差异。由于NB组的平均秩次是18.13大于GNB组的平均秩次6.86，故NB组的Ki-67 LI明显大于GNB组。

Ki-67 LI 与NB其它临床因素间的关系 3 表4. Ki-67 LI与NB病理类型之间的关系 平均秩次 例数 Ki-67 LI P值 ― + ++ 病理分型 分化型 8 1 3 4 5.88 0.026 未分化+分化差型 7 1 0 7 11.13 P<0.05，说明两组的Ki-67 LI有显著差异。由于未分化+分化差型组的平均秩次是5.88，大于组分化型组的平均秩次11.13，故Ki-67在未分化型和分化差型中的表达明显高于分化型

Ki-67 LI 与NB其它临床因素间的关系 3 表5. Ki-67 LI与化疗的关系 平均秩次 例数 Ki-67 LI P值 ― + ++ ― + ++ 术前化疗 是 13 6 1 6 8.93 0.013 否 10 0 3 7 16 P<0.05，说明两组的Ki-67 LI有显著差异。由于化疗组的平均秩次是8.93，小于未化疗组的平均秩次16，故化疗组Ki-67表达低于未接受化疗组。

Ki-67 LI 在年龄、性别、肿瘤的分期各组中的 差异无统计学意义 3 Ki-67 LI 与NB其它临床因素间的关系 Ki-67 LI 在年龄、性别、肿瘤的分期各组中的 差异无统计学意义

附图 Ki-67 （－） 4x10

Ki-67 LI （+） 10x10

Ki-67 LI （++） 10x10

Ki-67 LI >50% 10x10

MYCN扩增水平与Ki-67 LI 之间的关系 4 例数 Ki-67 LI Mean rank P值 ― + ++ MYCN ① 扩增 5 ― + ++ MYCN ① 扩增 5 1 0 4 23.00 0.092 获得 18 5 7 6 14.67 无异常 7 3 1 3 12.29 ② 扩增 0.036 非扩增 25 8 8 7 14.00 ③ 获得+扩增 23 6 7 10 16.48 0.267 3 1 3

总之，N-Myc扩增与Ki-67 LI在NB分期、分型中的意义并不是完全一致的。

Ki-67 LI在N-Myc基因扩增组明显高于非扩增组。 结 论 N-Myc基因拷贝数增多在NB中较GNB中多见，在进展期（3、4期）NB中较早期（1、2、4S期）NB中多见。 1 Ki-67 LI在NB中明显高于GNB，在NB分化差型中的表 达明显高于分化型；化疗影响Ki-67的表达。 2 3 Ki-67 LI在N-Myc基因扩增组明显高于非扩增组。

N-Myc基因拷贝数水平与Ki-67 LI两者结合分析、评估NB的侵袭行为和恶性度更加合理。 4 应该将N-Myc、Ki-67 LI的检测作为NB的常 规检查。 5

感谢聆听 敬请指导