Isolation of bacterial pathogens from cattle and goats: 2006-2008 2006~2008年送檢牛羊病材分離之細菌性病原 Isolation of bacterial pathogens from cattle and goats: 2006-2008 黃春申 助理研究員 2008.7.2

Abstract A total of 83 bovine and caprine specimens were submitted. A total of 16 isolates including Arcanobacterium pyogenes, Streptococcus bovis II, Pasteurella multocida, Mannheimia haemolytica and Klebsiella pneumonia from 26 cases with pneumonia. Six strains of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis from 24 cases with diarrhea. Two strains of A. pyogenes from 22 cases with abortion or reproductive disorder.

Two strains of A. pyogenes and 1 strain of Fusobacterium necrophorum from 11 cases with hepatic lesions. Two strains of A. pyogenes and 1 strain of Corynebacterium pseudotuberculosis from 2 cases with lymphotitis. One strain of C. pseudotuberculosis from 1 case with spleen abscess. One strain of A. pyogenes from 1 case with peritonitis. One strain of A. pyogenes from 1 case with muscular abscess.

材料與方法 材料來源：各地防治所委託送檢之病材。 細菌分離：一般臟器表面殺菌處理後，以無菌剪刀剪開釣取內部細菌，若確定為無菌操作取得之病材，可省去殺菌步驟。若自糞材中分離特定細菌則須多加數種抗生素及操作手續，以抑制雜菌生長。 細菌純化：選取單一菌落純化，以利後續鑑定步驟。

4. 細菌鑑定：包括使用傳統生化反應鑑定法，市售很多商品化套組可供使用，花費時間1-2天；另有依據細菌對於各種碳源利用能力而分類的鑑定方法；並以PCR增幅16S rDNA區域，與基因資料庫進行比對，可當作輔助鑑定方法。

結果 2006年4月到2008年5月間取得牛羊病例83例，其中包括肺炎症狀26例(31.3%)、下痢症狀24例(28.9%)、流死產及生殖道病變22例(26.5%)、肝臟病變11例(13.2%) 、衰弱消瘦症狀4例(4.8%)、淋巴結炎3例(3.6%)、腎臟病變3例(3.6%)、神經症狀2例(2.4%)、關節炎2例(2.4%)、脾膿瘍1例(1.2%)、腹膜炎1例(1.2%)、肌肉化膿灶1例(1.2%)。

肺炎症狀26例中分離得16株病原菌包括Arcanobacterium pyogenes 7株(43 肺炎症狀26例中分離得16株病原菌包括Arcanobacterium pyogenes 7株(43.7%)、Streptococcus bovis II 4株(25%)、Pasteurella multocida 3株(18.7%)、Mannheimia haemolytica 1株(6.2%)、Klebsiella pneumonia 1株(6.2%)。 下痢症狀24例中分離得Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis 6株。 流死產及生殖道病變22例中分離得A. pyogenes 2株。

肝病變11例中分離得3株病原菌包括A. pyogenes 2株(66.7%)、Fusobacterium necrophorum 1株(33.3%)。 其他包括淋巴結炎3例中分離得3株病原菌包括A. pyogenes 2株(66.7%)、Corynebacterium pseudotuberculosis 1株(33.3%)。脾膿瘍1例中分離得C. pseudotuberculosis 1株。腹膜炎1例中分離得A. pyogenes 1株。肌肉化膿灶1例中分離得A. pyogenes 1株。

2006年到2007年間取得恆春畜產試驗所分所牛羊病例82例，以呼吸道症狀與其周邊淋巴結炎、以及多發性化膿病灶為主，共分離得病原菌41株，包括Str. bovis II 15株(36.6%)、Burkholderia pseudomallei 12株(29.3%)、C. pseudotuberculosis 7株(17%)、P. multocida 4株(9.7%)、M. haemolytica 2株(4.9%)、A. pyogenes 1株(2.4%)。

Arcanobacterium pyogenes 病原菌簡介 Arcanobacterium pyogenes 舊名Corynebacterium pyogenes, Actinomyces pyogenes等等。 革蘭氏陽性短桿菌，細小溶血性菌落，無氧狀態生長比有氧狀態佳，需培養48小時才有足夠菌量做生化試驗。 感染途徑主要為傷口感染，可感染多種動物，造成多臟器多發性化膿病變。 抗生素治療效果不佳。

Streptococcus bovis II D族鏈球菌，革蘭氏陽性球桿或是短桿菌，兼性厭氧，普遍存在反芻動物之呼吸道黏膜表面，為機緣性細菌。 可引起人類心內膜炎。

Pasteurella multocida 革蘭氏陰性桿菌，兩極濃染為特徵，氧化酶陽性，巴斯德桿菌在生化反應測試上幾乎不利用醣類。 培養基上生長成白灰色菌落。 呼吸道常在菌，為重要之肺炎病原菌。 感染禽類及各種哺乳動物，在哺乳動物的症狀特徵是爆發性出血性敗血症。

Mannheimia haemolytica 舊稱Pasteurella haemolytica，革蘭氏陰性桿菌，特性與巴斯德桿菌類似。 培養基上生長成白色溶血性菌落。 在寒冷或運輸等緊迫因子下產生致害，主要症狀為纖維素性肺炎，為重要之反芻動物肺炎病原菌。

Klebsiella pneumonia 屬腸內菌科，革蘭氏陰性桿菌。 培養基上生長成黏性透明菌落。 機緣性細菌，會造成動物之肺炎，在人則是院內感染及傷口感染常見之細菌。

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis 分支桿菌屬，現分類於鳥型分支桿菌內，可引起Johne’s disease。 使用添加Mycobactin J之蛋黃培養基分離，生長需2個月或更久。 感染途徑為由口食入，引起慢性消耗性肉芽腫性腸炎，有冰山效應。 可能與人類之Crohn’s disease相關。

Fusobacterium necrophorum 絕對厭氧菌，革蘭氏陰性長絲狀菌。 會造成牛羊的喉炎氣管炎(仔牛白喉)、腐蹄及壞死性肝炎，感染部位膿腫惡臭。 也可能感染其他哺乳動物，常為二次性感染。

Corynebacterium pseudotuberculosis 革蘭氏陽性桿菌，觸媒反應陽性，乾躁菌落型態，需48小時培養。 羊隻由皮膚傷口、剪毛等傷口感染，引起局部乾酪性淋巴腺炎、膿血症或全身性多發性膿疱。

討論 無法從樣本分離到病原菌之最大原因為雜菌汙染(尤其是變形菌汙染)，當污染嚴重時，便無法分離到正確之病原菌，汙染原因包括保存運送錯誤造成樣本腐壞、各臟器混雜保存、採樣時候污染等。 其他影響分離因素包括採集之樣本品過小、樣本未採取到病灶處及分離時候操作錯誤等等。 此外，養殖戶私用各種抗生素治療也對病原菌之分離有很大之影響。

目前鑑定之方法仍以傳統之生化反應為主，可是市售套組常常無法正確鑑定出菌別，因此常會配合碳源利用法及16S序列比對之方式輔助鑑定。 所有送檢病例中(不包含恆春試驗所)前三名症狀為肺炎症狀26例(31.3%)、下痢症狀24例(28.9%)、流死產及生殖道病變22例(26.5%)。

所有細菌分離結果中以造成化膿病灶之A. pyogenes比例最高(15/33, 45 據其他國家報告，反芻動物肺炎前3名應為M. haemolytica、P. multocida、Histophilus somni。

反芻動物下痢依分離結果，以副結核分支桿菌最主，依照此菌特性，必然養殖場中有很大比例之次臨床期動物未被發現。 可能引起流產之細菌性病原包括布氏桿菌、彎曲菌等，本次結果中皆未分離到。 恆春試驗所牛羊的分離結果，除去常在菌Str. bovis II 後，前3名為B. pseudomallei 、C. pseudotuberculosis、P. multocida，可提供正確細菌性病原之參考資料。

謝謝聆聽