血站核酸检测问题分析 烟台 2015年4月16日

质量保证 质量控制 室间质评（分析中） 涉及多个部门 涉及实验室人员和献血者 涉及实验室 涉及实验室 结果报告解释及分析（分析后） 实验室建设 流程设计 样本采集（前期工作及分析前） 室内质控（分析中） 室间质评（分析中） 结果报告解释及分析（分析后） 涉及多个部门 涉及实验室人员和献血者 涉及实验室 质量控制 涉及实验室

实验的设计问题

实验的设计问题 产物分析区结果分析

工作流程 单人份检测工作流程 标本采集（核酸标本管采集量建议≥6ml) 酶免检测 联检模式：进行鉴别检测或重复进行联检 分项检测模式 ：重复检测 核酸检测 联检模式：不可以区分 项目 分项检测模式 ：可以直 接区分阳性项目 应明确反应性样本的确切结果，即HBV HCV HIV感染项目；如果血液已经报废，而不明确感染项目，应归为“不可重复的阳性反应” 对于HIV RNA和HCV RNA反应性的献血者随访，对HBV DNA反应性献血者进行随访和/或进行血清学补充实验

工作流程 混样检测工作流程 标本采集 混样混项模式：拆分 检测—核酸反应性 混样分项模式 ：拆分 检测—分项目反应性 核酸检测 混样混项模式：不可以 区分项目 混样分项模式 ：可以直 接区分阳性项目 应明确反应性样本的确切结果，即明确HBV HCV HIV感染项目；对于混样混项目反应性样本应进行补充实验或采用另一核酸检测试剂来确定 对于HIV RNA和HCV RNA反应性的献血者随访，对不能分项及HBV DNA反应性献血者进行随访和/或进行血清学补充实验

检测流程举例

样本采集、处理 采集后的样本宜在4小时内实施低温离心，分离红细胞和血浆。如不能按上述要求处理采集的样本，应对所采集的样本保存、处理（离心时间和条件）等条件进行保证弱阳性样本有效检出的确认。并进行质量监控。 样本在接收后应按系统确认的离心时间和离心力处理样本。 样本在检测前应保存在2-8℃条件下，并于采样后72小时内完成核酸检测。因特殊情况72小时以内不能完成检测的样本应在-20℃以下冻存。

室内质控

室内质量控制的评价 IQC不仅是对实验室一次测定的有效性的判断，也反应了实验室测定趋势的变化。 分析室内质控数据时应与IC数据一同分析。 对IQC应定期进行评价。

室内质控—结果报告 整体检测结果进行分析 具体要求 IC是否有效 观察扩展增曲线、数值 结果报告 分析批检测结果情况 对于可疑或无效结果按照检测程序核对实验样本位置及编号重新进行检测 分析批检测结果情况 观察扩增曲线形态、分析反应性样本和非反应性样本的检测值、数量 IC是否有效 对于PCR检测体系，IC应在一定的CT值范围内 观察扩展增曲线、数值 阴性对照、阳性对照、室内质控结果是否正常

室内质控—结果报告 检测结果 审核 检测前信息的确认： 包括样本、试剂、设备 出现不符情况的处理措施及记录 检测过程的监测： 设备运行状态，样本在 检测过程中的状态 检测前信息的确认： 包括样本、试剂、设备 结果有效性的判定： 包括内对照、阴阳性 对照和室内质控的情况 过程异常的处理记录 出现不符情况的处理措施及记录 批检测结果分析， 确认其无交叉污染可能 检测结果

室间质量评价 2015年重新完善—试剂方法代码 15

室间质量评价 2015年重新完善—结果回报 16

室间质量评价 2015年重新完善—结果评价 样本编号 得分（%） 你室结果 正确结果 阳性 100 阴性 成绩： 17   样本编号 HBV/HCV/HIV混样检测检测 HBV/HCV/HIV拆分检测 得分（%） 你室结果 正确结果 NAT 1511 阳性 100 NAT 1512 阴性 NAT 1513 NAT 1514 NAT 1515 NAT 1516 NAT 1517 NAT 1518 NAT 1519 NAT 1520 成绩： 17

室间质量评价 2015年重新完善—结果评价 检测方式b 给出的评价-HIV 样本编号 HIV混样检测检测 HIV拆分检测 得分（%）   样本编号 HIV混样检测检测 HIV拆分检测 得分（%） 你室结果 正确结果 NAT 1511 阳性 100 NAT 1512 阴性 NAT 1513 NAT 1514 NAT 1515 NAT 1516 NAT 1517 NAT 1518 NAT 1519 NAT 1520 成绩： 18

室间质量评价 2015年重新完善—结果评价 所用检测试剂结果汇总 样本编号 你室Ct值 除外3倍标准差 该试剂均值 SD 19   样本编号 HBV/HCV/HIV混样检测检测 HBV/HCV/HIV拆分检测 你室Ct值 除外3倍标准差 该试剂均值 SD NAT 1511 NAT 1512 NAT 1513 NAT 1514 NAT 1515 NAT 1516 NAT 1517 NAT 1518 NAT 1519 NAT 1520 19

室间质量评价 2015年重新完善—增加评价内容 信息不完整的实验室列表 要求： 实验室编码 试剂、方法、设备信息 检测结果信息 检测信号值   要求： 试剂、方法、设备代码应无空项，使用的试剂、方法或设备无代码的，必须按照注册证信息详细注明厂家名称。 检测结果信息不可空项 检测信号值不可空项 20

室间质量评价—调查性样本 1. 2015年血液检测中酶免检测项目增加10份样本，1-2次发放，检测要求及上报表与EQA相同，结果不计成绩，用于技术问题分析。 2. 2015年核酸检测项目增加10份样本，与第二次EQA样本一起发放，检测要求及上报表与EQA相同，结果不计成绩，用于技术问题分析。

实验室能力评估 室间质评 成绩 检测数据 评估 血清盘 现场考核 检测策略的转变 1遍血清学检测+核酸检测＞＝ 2遍血清学检测+核酸检测

数据分析与检测系统比对 样本 & 献血者 检测系统的改进、献血人群的风险评估 ELISA和核酸检测 作为血液筛查方法，给出的仅为反应性或非反应性结果 对于献血者：核酸检测、随访、补充和/或确认实验可以明确多数献血者的感染状况 样本 & 献血者 检测系统的改进、献血人群的风险评估

数据分析与检测系统比对

数据分析与检测系统比对

数据分析与检测系统比对 Table 3. Average and range of HBV-DNA levels at the HBsAg seroconversion point during the log-linear ramp up phase of viremia in early acute infection. Report study population n assay HBsAg seroconversion point estimated by regression analysis estimate* (range) Komiya25 3 chimps infected with HBV gt A 3 AxSYM 3327 (2960-3863) Koyima25 3 chimps infected with HBV gt C 28,430 (14,995-70,407) Yoshikawa24 Japanese blood donors infected with gt A, B, C 93 PRISM 2100 (~1000-100,000) Assal22 HBV gt A seroconversion panels 5 952 (336-1894) BioRad 1983 (1398-2462) *HBV-DNA level at HBsAg S/CO = 1 cutoff crossing point using the data of all 93 ramp up samples from Japanese blood donors24 in the regression analysis and geometric mean of HBV-levels at the HBsAg seroconversion points as estimated by regression analysis on the individual chimpanzee25 and blood donor seroconversion panels22

数据分析与检测系统比对 Table 1. Proportion of ELISA seronegative donations that were reactive in the Ultrio multiplex and in subsequent discriminatory (dHBV) test at ten blood centers Blood Center* Number of donations Ultrio + (%) dHBV + (%) BJ 407,994 673 (0.16) 195 (28.97) GZ 324,152 719 (0.22) 95 (13.21) KM 32,154 72 (0.22) 26 (36.11) NM 12,841 17 (0.13) 5 (29.41) QD 50,967 71 (0.14) 28 (39.44) SH 12,725 23 (0.18) 0 (0) SZ 116,117 180 (0.16) 62 (34.44) TJ 44,433 96 (0.22) 19 (19.79) TZ 6,232 4 (0.06) ZJ 198,181 178 (0.09) 132 (74.16) Total 1,205,796 2033 (0.17, 0.16†) 562 (27.64)

HBV-DNA viral load distribution in IU/mL 数据分析与检测系统比对 Table 2. Viral load distribution in seronegative donations that were reactive in the multiplex Ultrio assay with and without subsequent reactivity in the discriminatory HBV and supplemental HBsAg assays HBV reactivity n HBV-DNA viral load distribution in IU/mL n (%) qPCR+ Ultrio dHBV Suppl. HBsAg Negative < 20 20 -50 50 -200 200 -500 >500 + + or - 472 65 (13.77%) 256 (54.24%) 49 (10.38%) 55 (11.65%) 23 (4.87%) 24 (5.08%) 407 (86.2%) - 1046 889 (84.99%) 144 (13.77%) 6 (0.57%) 5 (0.48%) 2 (0.19%) 0 (0%) 157 (15.0%) 1518 954 (62.85%) 400 (26.35%) 55 (3.62%) 60 (3.95%) 25 (1.65%) 24 (1.58%) 564 (37.2%) 409 65 (15.89%) 223 (54.52%) 46 (11.25%) 48 (11.74%) 16 (3.91%) 11 (2.69%) 344 (86.4%) 1028 876 (85.21%) 139 (13.52%) 6 (0.58%) 5 (0.47%) 0 (0%) 152 (14.8%) 1437 941 (65.48%) 362 (25.19%) 52 (3.62%) 53 (3.69%) 18 (1.25%) 11 (0.77%) 486 (33.8%) 63 0 (0%) 33 (52.38%) 3 (4.76%) 7 (11.11%) 13 (20.63%) 63 (100%) 18 13 (72.22% 5 (27.78%) 5 (27.8%) 81 13 (16.05%) 38 (46.91%) 3 (3.70%) 7 (8.64%) 7 (8.54%) 68 (84.05%)

数据分析与检测系统比对 Table 3. Anti-HBc and anti-HBs prevalence in discriminated and nondiscriminated Ultrio reactive donations with and without supplemental HBsAg reactivity Category of donations Ultrio dHBV Suppl HBsAg n n (%) anti-HBc+ anti-HBs- n (%) anti-HBc+ anti-HBs+ n (%) anti-HBc- anti-HBs+ n (%) anti-HBc- anti-HBs- n (%) anti-HBc+ n (%) anti-HBs+ Median (interquartile range) of anti-HBs (IU/L) Supplemental HBsAg nonreactive    discriminated HBV-DNA+ + - 409 210 (51.34%)a 77 (18.83%)c 34 (8.31%) 88 (21.52%) 287 (70.17%) 111 (27.14%) 0 (0 - 9.55) nondiscrimated multiplex + 1028 320 (31.13%)b 383 (37.26%) 145 (14.11%)d 180 (17.51%) 703 (68.39%)e 528 (51.36%) 7.61 (0 - 51.96) total multiplex + neg + or - 1437 530 (36.88%) 460 (32.01%) 179 (12.46%) 268 (18.65%) 990 (68.89%) 639 (44.47%) 4.14 (0 - 35.92) Negative Controls NT* 4317 260 (6.02%) a ,b 1311 (30.37%) c 1090 (25.25%)d 1656 (38.36%) 1571 (36.39%)e 2401 (55.62%) 19.67 (2.00 - 221.60) % difference a 45.32% b 25.11% c 11.15% d 11.14% e 32.0% P values a <0.001 b <0.001 c <0.001 d <0.001 e <0.001 Supplemental HBsAg reactive discrimicated HBV-DNA+ 63 50 (79.37%)f 4 (6.35%)g 1 (1.59%)h 8 (12.70%) 54 (85.71%) 5 (7.94%)i 0 (0 - 0) 18 8 (44.44%)f 7 (38.89%)g 3 (16.67%)h 0 (0%) 15 (83.33%) 10 (55.56%)i 137.26 (0 - >1000) total multiplex + 81 58 (71.60%) 11 (13.58%) 4 (4.94%) 8 (9.88%) 69 (85.16%) 15 (18.52%) 0 (0 - 4.71) f 34.93% g 32.54% h 15.08% i 47.62% f <0.01 g <0.01 h <0.05 i <0.001

数据分析与检测系统比对 Table 4. Proportion of confirmed HBV-NAT yield cases classified in different infection stages according to qPCR and supplementary serologic test results in 1503 of 2019 (74.4%) Ultrio initial reactive donations. [In 515 of 2033 (25.33%) donations sample volume was insufficient for further testing and 14 donations were excluded from the NAT yield rate analysis because of dHIV and dHCV reactivity]. Ultrio dHBV qPCR HBsAg anti-HBc anti-HBs n % of Ultrio reactives % of HBV-NAT yields Yield rate 1:xa classifications infection + - 83 5,5% 9,8% 10 815 WP 16 1,1% 1,9% 56 102 8 0,5% 0,9% 112 204 WP/early HBsAg seroconversion 5 0,3% 0,6% 179 526 possible WP   112 7,5% 13,2% 8 015 total WP 28 3,3% 32 058 anti-HBs breakthrough or OBI 6 0,4% 0,7% 149 605 7 0,8% 128 233 41 2,7% 4,8% 21 893 total anti-HBs breakthrough or OBI +b 180 12,0% 21,3% 4 987 OBI/2nd WP 30 2,0% 3,5% 29 921 100 6,7% 11,8% 8 976 +c 53 6,3% 16 936 29 3,4% 30 953 220 14,6% 26,0% 4 080 probable OBI/2nd WP d 24 1,6% 2,8% 37 401 probable OBI/2nd WP 50 5,9% 17 953 OBI/2nd WP/low HBsAg carrier 4 224 407 694 46,2% 81,9% 1 293 total OBI or 2nd WP 588 39,1% 69,4% 1 527 total anti-HBs negative OBI or 2nd WP 847 56,4% 100,0% 1 060 total HBV NAT yields 354 23,6% 2 536 probable false reactive e 164 10,9% 5 473 probable false reactive 138 9,2% 6 505 656 43,6% 1 368 total probable false reactive

数据分析与检测系统比对 Table 5. Comparison of anti-HBc prevalence and qPCR confirmed HBV-NAT yield rates in the present Ultrio ID-NAT study and in the recently published TaqScreen MP6 evaluation report of Wang et alref in ELISA seronegative blood donations from Chinese blood donors. TaqScreen MP6 NAT study Ultrio ID-NAT study NAT screening result % anti-HBc+ anti-HBc+/ anti-HBs- MP- 598/1605 (37.3%) 98/1605 (6.1%) ID- 1571/4317 (36.4%) 260/4317 (6.0%) MP+/ID- 61/127 (48.0%) 13/127 (10.2%) ID+/dHBV- 718/1046 (68.6%) 328/1046 (31.3%) MP+/ID+ 504/619 (81.4%) 334/619 (54.0%) ID+/dHBV+ 341/472 (72.3%) 460/472 (55.1%)   ELISA seronegative donations tested 826044 1205796 MP+/ID+ donations 839 ID+/dHXV+ donations 562 ID+ NAT yield rate 1:985 # dHXV+ NAT yield rate 1:2145 # fraction MP+/ID+ tested for VL 667/839 (79.5%) fraction ID+/dHXV+ tested for VL 472/562 (84.0%) corrected no donations (for not tested VL) 656700 1012697 proportion of ID+ also qPCR+ 413/667 (61.9%) proportion of dHXV+ also qPCR+ 407/472 (86.2%) qPCR confirmed HBV-NAT yield rate 1:1590 § 1:2488 §

数据分析与检测系统比对 相关结果比对分析 献血人群风险因素 补充实验、确认实验 因假阳性报废 随访献血者 疾病传播风险

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