第十六章弯曲菌属 与螺杆菌属
第一节 弯曲菌属 是一类呈逗点状或s 形的G- 菌,广泛分布 于动物界,其中有些可引起动物与人类的 腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病。对人 第一节 弯曲菌属 是一类呈逗点状或s 形的G- 菌,广泛分布 于动物界,其中有些可引起动物与人类的 腹泻、胃肠炎和肠道外感染等疾病。对人 致病有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯 曲菌等,其中空肠弯曲菌是腹泻的常见病 原菌。
该菌借助于鞭毛和外膜蛋白与空肠上皮细胞结合,侵入生长繁殖,产生肠毒素、细胞毒素和内毒素等物质,引起肠炎和肠道外感染。 腹泻是空肠弯曲菌感染最常见的临床表现,转为粘液脓血样便,甚至血便。有发热腹痛、恶心不适等症状。可在1周内消退,20%患者症状可持续1-3周。
微生物特性 1.形态结构 G-菌体弯曲呈逗点。无芽孢有鞭 毛。运动活泼,呈投镖样为其特征。 2.基因组及抗原成分 基因组大小仅为大肠杆 2.基因组及抗原成分 基因组大小仅为大肠杆 菌的35%; DNA的G+C为30-38mol%。 按O抗原不同分为65个血清型。 3.培养特征 为微需氧菌,最佳气体环境通常 为含5%氧气、10%二氧化碳及85%氮气。 4.抵抗力不强,在室温下可迅速死亡。对热 敏感,标本在4℃冰箱可保存3周。
微生物检验 1.粪便直接镜检,G-呈弧形、呈投镖式运动。 2.核酸检测粪便弯曲菌flaA基因,体外扩增 空肠/大肠弯曲菌为1.3kb。 3.分离培养 粪便等标本可接种选择平板进行 分离,置微氧环境培养。空肠/大肠弯曲生 长温度为43℃,培养24h可观察为灰白湿润、 扁平边缘不整的蔓延生长的菌落。
鉴定要点 1.为氧化酶阳性,G-菌体弯曲或呈S型。 2.萘啶酸、头孢噻吩敏感试验:空肠弯曲菌 对萘啶酸敏感、噻吩耐药;胎儿弯曲菌对 萘啶酸耐药、对头孢噻吩敏感。
3.马尿酸盐试验:有助于鉴定空肠弯曲菌空 肠亚种,凡试验阳性、在42℃条件下生长, 氧化酶阳性且与镜检形态相符者,即可报 告为空肠弯曲菌空肠亚种。 4.醋酸吲哚水解试验:空肠弯曲菌为阳性, 胎儿弯曲菌为阴性。
5.用抗体包被的乳胶颗粒,遇到相应的弯曲菌时便可出现反应。可用于鉴定空肠/大肠弯曲菌,具有高度敏感性和特异性。 6.DNA探针:DNA-DNA杂交可以用于鉴别大肠弯曲菌与马尿酸水解阴性的空肠弯曲菌、区别空肠弯曲菌和其他的弯曲菌。
第二节 螺杆菌属 幽门螺杆菌与萎缩性胃炎、胃、十二指肠溃疡和胃癌等疾病相关。 HP感染非常普遍,平均世界人口的50%被感染。
三、微生物特性 1.G-,细长弯曲呈螺形。一端或两端有多根带鞘 鞭毛,运动活泼有动力。鞭毛在定居中起锚 住作用。 2.基因组较小,约1.67×106bp,DNAG+C百分含量为37mol%,较重要的基因有脲酶基因 urea、ureB、ureC,细胞毒素相关基因cagA, 空泡毒素基因vacA。脲酶基因定位在DNA的 4.2kb区段内。
3. HP菌株间具有共同抗原。与空肠弯曲菌菌体 外膜蛋白无交叉免疫反应,但其鞭毛蛋白具 有明显的交叉反应。
3.培养特性 1.HP为微需氧菌,在5%O2、10%C02、 85%N2的中生长良好。最适温度为 37℃, 25℃不生长,42℃少数生长, 此与弯曲菌属不同。
2.HP对湿度(85%以上)要求较高,营养要求较高需含血液才能生长,常用血琼脂培养基,需经72h才长出菌落,故在培养基中添加多粘菌素B(250U/ L)、万古霉素(6mg/L)、两性霉素(2mg/L)、TMP(5mg/L)等以抑制杂菌生长。 3.HP的菌落形态为圆形孤立的小菌落,无色半透明呈露滴状。
4.理化性状 HP生化反应不活跃,不能利用糖类。 HP具有大量高活力的胞外脲酶,故脲酶活性的测定可作为HP的快速诊断方法。 还能产生氧化酶、触酶、碱性磷酸酶、α-谷氨酰转肽酶、亮氨酸胺肽酶和DNA酶等。
四、微生物检验 1.分离培养 宜用选择培养基,需新鲜配制, 倾注平皿后应密封保存于一定湿度的容器一 周内用完。注意将标本的粘膜面在培养基上 1.分离培养 宜用选择培养基,需新鲜配制, 倾注平皿后应密封保存于一定湿度的容器一 周内用完。注意将标本的粘膜面在培养基上 反复涂擦接种。
2.培养在含有5%O2、10%C02、85%N2的微 需氧和98%以上湿度的环境培养。 3.鉴定 根据形态和染色性, 菌落特征; 37℃ 生长,43%、25%不生长;氧化酶和过氧化 氢酶均阳性、脲酶强阳性;对萘啶酸耐药、 头孢噻吩敏感;在1%甘油和1%胆盐中均不 生长。
4.快速脲酶试验 是—种简便实用、快速敏感、较为准确可靠的 诊断方法。脲酶试剂由尿素、基质、酚红指示 剂等组成, 将小块的活组织块放人装有尿素培 养基瓶内,如培养基由黄变为红色为阳性,提 示该菌脲酶已将尿素分解。
5.抗体检测 用血清学方法检测患者体内的抗HP抗体(IgG、 IgM和IgA)系最常用的无创伤性诊断HP感染的 方法。 目前已有补体结合试验、胶乳凝集试验及酶联 免疫吸附试验(ELISA)等,而以ELISA应用最 为广泛,现有商品化的试剂盒,可用于检测患 者血清中HP的菌体抗体或脲酶抗体。
6.13C或14C标记尿素呼吸试验 病人禁食一夜,进食用13c或14c标记的尿 素,HP产生的尿素酶分解脲素释放 CO2, 因此可测定病人呼吸中释放带有同位素 的CO2量,如CO2含量超过标准,提示有 HP存在。 该方法敏感性与特异性均好。