第三章 消毒与灭菌

消毒灭菌有关概念  1 消毒：指杀死病原菌，但不包括芽胞。用以消 毒的化学药物称为消毒剂。 2 灭菌：是指杀灭物体上所有微生物 3 无菌：物品中没有活的微生物存在，称无菌。 4 防腐：是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。 同一种化学药品在高浓度时为消毒剂， 低浓度为防腐剂

第一节 物理消毒灭菌法

消毒、灭菌的方法一般可分为： 热力灭菌法 辐射杀菌法 物理学方法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥和低温抑菌法等 化学方法

一 热力灭菌法 分类：干热和湿热灭菌法两类 1 干热灭菌法 A 焚烧： B 烧灼： C 干烤： D 红外线：

2.湿热灭菌法 A 巴氏消毒法：61.1-62.8℃经30min，或 71.7℃经15-30秒钟，常用于 消毒牛乳和酒类等 B 煮沸法：水温100C经5min能杀死一般细菌 的繁殖体。芽胞要煮沸1-2h。 C 流通蒸气法：10OC，蒸15-30min，可杀死 细菌的繁殖体，但不能杀死芽胞

D 间歇灭菌法：10OC，蒸15-30min，或75-80℃ 30-60min，每日一次，连续三日， 也可达到灭菌的目的 E 高压蒸气灭菌法:是最有效的灭菌法。通常在 1.05kg／cm锅内温度可达121．3C， 维持15-30min，即可达灭菌目的

湿热与干热灭菌效果的比较 热型 温度（℃）时间 布层内的温度（℃）灭菌效果 （h） 20层 40层 100层 热型 温度（℃）时间 布层内的温度（℃）灭菌效果 （h） 20层 40层 100层 湿热 90-105.3 3 101 101 101.5 完 全 干热 130-140 4 86 72 70.5 不 完 全

湿热比干热灭菌好的原因： 1 细菌蛋白质在有水的情况下易于 凝固变性 2 湿热穿透力强 3 湿热蒸气有潜热存在，水蒸气凝固 成水释放潜热，迅速提高被灭菌物 体的温度

二辐射杀菌法  1 紫外线： 机理：其波长在200-300nm有杀菌作用，其中以265-266nm最强，这与细菌 DNA吸收光谱一致。细菌DNA吸收紫外线后，使一DNA条链上两个相邻胸腺嘧啶共价结合成二聚体，改变了DNA的分子构型，干扰了DNA的复制和转录，导致细菌变异或死亡 作用：用于不耐热物体表面和空气消毒。对人体皮肤、眼睛有损伤作用，使用时应注意防护

2 电离辐射：包括X射线和γ射线 机制：这些射线可将原子或分子放出电 子变成离子。如水分子电离可产生H+和OH－， 这些离子有很强的还原与氧化作用，能直接 杀伤细菌；也可与液体中的氧分子结合形 成H2O2，从而使细菌损伤或死亡 用途：一次性塑料制品消毒；食品消毒， 不破坏营养成分

3 滤过除菌法 机制：是用滤菌器机械过滤的方法将液 体中或空气中的细菌除去 作用：主要用于一些不耐热的血清、毒 素、抗生素，以及空气的除菌

4 超声波杀菌法 超声波：是不被人耳感受高于20千周/秒的声 波 作用：可裂解多细菌，尤其对G+更敏感 目前主要用于粉碎细胞，提取细胞组 分或制备抗原等

5 干燥与低温抑菌法 作用：干燥法常用于保存食物，浓盐或糖渍食品可使细菌脱水，造成生理干燥，使细菌生命活动停止。 低温可使细菌新陈代谢减慢，故常用于保存细菌菌种。

第二节 化学消毒灭菌法

化学消毒灭菌法： 定义：是用化学药品进行消毒的方法。 作用机制； ①使菌体蛋白质变性或凝固， ②破坏细菌的酶系统 ③改变细菌细胞壁或胞浆 膜的通 透性，导致细菌死亡。

一．消毒剂的主要种类、浓度及用途 1 酚类： 作用：高浓度使菌体蛋白凝固，低浓度破坏 细菌的细胞膜，使胞质内容物渗出 浓度：石炭酸为2%-5 % 、来苏为2% 用途：地面、器具表面和皮肤的消毒

2 醇类 ： 作用机制：损伤细胞膜，使菌体蛋白变性， 灭活酶类 浓度：乙醇70%-75% 用途：主要用于皮肤的消毒和体温计等的 浸泡

3 重金属盐类： 作用机制： （1）使细菌发生变性和沉淀 （2）使细菌的酶活性丧失 种类、浓度与用途： （1）1%硝酸银新生儿滴眼，预防淋球菌感染 （2）2%红汞用于皮肤、粘膜和小创伤的消毒 （3）0.05-0.01%升汞，非金属器皿的消毒

4 氧化剂： 机制 ： （1）靠氧化作用，灭活酶类 （2）使蛋白质变性 种类和用途： （1）0.1%高锰酸钾，皮肤、尿道、水果等 （2）3%过氧化氢，创伤、皮肤粘膜消毒 （3）2%-2.5%碘酒, 皮肤消毒 （4）0.2ppm-0.5ppm氯，饮水和游泳池消毒 （5）10%-20%漂白粉，地面、厕所与排泄物 消毒

5表面活性剂 ： 机制： （1）损伤细胞 （2）灭活酶类 （3）蛋白质沉淀 种类和用途： （1）0.05%-0.1%新洁尔灭，皮肤粘膜消毒、 浸泡手术器械 （2） 0.05%-0.1%杜灭芬，伤口冲洗，金属 器械、塑料、橡皮类消毒

6 烷化剂： 机制： 使菌体蛋白和核酸的烷基化 种类、浓度及作用： （1）10%甲醛，物品表面、空气消毒 （2） 2%戊二醛 ，精密仪器、内窥镜等消毒 缺点：对人体有一定的毒性，且有的有致癌 作用，如β-内脂

二 消毒剂的应用 1病人的排泄物：等量的20%漂白粉、5%石 炭酸或2%来苏、搅拌均匀，作用2小时 2皮肤：2.5%碘酒、70%酒精、2%红汞 3粘膜：1%硝酸银、3%过氧化氢、0.1% 高锰酸钾等 4饮水: 氯气、漂白粉 5厕所：生石灰 6空气：甲醛熏蒸 7手：2%来苏、2%碘酊、70%酒精

第三节 影响消毒灭菌的因素 消毒剂的性质、浓度与作用时间 微生物的种类与数量 温度 酸碱度 有机物

第四章 噬菌体

第一节 噬菌体的生物学性状

概念：噬菌体是感染细菌、真菌、放线 菌或螺旋体的病毒 特点： （1）个体微小、可通过细滤菌器 （2）结构简单，由蛋白质和核酸组成 （3）专性细胞内寄生 （4）复制的方式繁殖 （5）分布广泛

一 形态与结构 1形态基本有三种 蝌蚪形 微球形 丝形 2结构 头部： 尾部包括尾髓、 尾板、尾鞘、尾刺和尾丝

二 化学组成 1核酸：为DNA或RNA，DNA多 为双链的，RNA多为单链 作用：噬菌体的遗传物质 2蛋白质：构成头部的衣壳和尾部 作用：保护核酸 构成衣壳和尾部 决定外型和表面特性

三 抗原性 噬菌体具有抗原性，可刺激机体产生抗体， 此抗体能抑制感染，但对以进入细菌内的噬 菌体无效 四 抵抗力 比一般细菌繁殖体强，加热75℃30 分 灭活，耐低温和冰冻，对紫外线和射线敏感

第 二节 毒性噬菌体 1概念：能在宿主菌细胞内复制增殖，产 生许多子代噬菌体，并最终将细菌 裂解的噬菌体称毒性噬菌体

概念：从噬菌吸附至细菌上，到细菌溶 解，释放出子代噬菌体的过程 2 噬菌体的复制周期（溶菌周期） 概念：从噬菌吸附至细菌上，到细菌溶 解，释放出子代噬菌体的过程 过程：分四个阶段 （1）吸附 （2）穿入 （3）生物合成 （4）成熟与释放

第三节 温和噬菌体 概念： （1）温和噬菌体（溶原性噬菌体） （2）前噬菌体 （3）溶原性细菌 （4）溶原性转换

2 温和噬菌体的三种可能存在状态 （1）游离的具有感染性的噬菌体颗粒 （2）宿主菌胞质内类似质粒形式的噬菌 体核酸 （3）前噬菌体 另外，温和噬菌体可有溶原性周期和溶 菌性周期，毒性噬菌体只有一个溶菌性周期

第四节 噬菌体的应用 一 细菌的鉴定与分型 二 分子生物学研究的重要工具 三 细菌感染的诊断与治疗