实验二 药物的杂质检查

主要内容 1 实验目的 2 仪器与材料 实验原理和步骤 3 4 注意事项 思考题 5

重点难点 重点 一般杂质检查的项目 常见一般杂质检查的原理和方法 比色、比浊的操作要点 难点 比色、比浊操作 薄层色谱法的操作

1 实验目的 掌握一般杂质检查的项目 掌握常见一般杂质检查的原理和方法 掌握比色、比浊操作要点 熟悉某些药物中的特殊杂质及其检查方法 熟悉薄层色谱法操作要点

2 仪器与材料 仪器：具塞比色管、移液管 材料：葡萄糖、麻醉乙醚、肾上腺素、 布洛芬

3 实验原理和步骤 3.1 概述 杂质主要来源：生产和贮存 按存在特点：一般杂质和特殊杂质 一般杂质： 分布广泛，多种药物的生产或贮存中容易引入 的杂质 检查项目：酸、碱、水分、氯化物、铁盐、硫 酸盐、重金属、砷盐、铵盐、易炭化物、炽灼 残渣以及残留有机溶剂等 特殊杂质：因生产工艺或药物本身的性质可能引 入的杂质，如阿司匹林中的水杨酸

3 实验原理和步骤 3.2 酸度检查 用药典规定的方法对药物中的酸性或碱性杂质进行检查 检查时一般以新煮沸放冷的蒸馏水为溶剂 不溶于水的药物，可用中性乙醇等有机溶剂溶解

3 实验原理和步骤 3.2 酸度检查 葡萄糖2.0g+新煮沸放冷的蒸馏水20mL溶解后+酚酞指示液3滴+0.02M NaOH 0.2mL，观察现象并记录 葡萄糖的酸度检查

3 实验原理和步骤 3.3 氯化物检查 “ 平行操作原则” 氯化物在HNO3中与AgNO3作用，生成AgCl白色浑浊液，与一定量的标准NaCl溶液相比较 Cl－+AgNO3→AgCl ↓ “ 平行操作原则”

以黑色为背景，自上往下观察 葡萄糖的氯化物检查

3 实验原理和步骤 3.4 硫酸盐检查 硫酸盐与BaCl2在酸性溶液中作用生成BaSO4白色浑浊液，与一定量的标准K2SO4溶液相比较 SO42－ +BaCl2→ BaSO4↓

以黑色为背景，自上往下观察 葡萄糖的硫酸盐检查

3 实验原理和步骤 3.5 铁盐检查 Fe3+在酸性溶液中与硫氰酸盐生成红色可溶性的硫氰酸铁配离子，与一定量的标准Fe3+溶液相比较 Fe3++6SCN－→[Fe(SCN)6]3-

以白色为背景，自上往下观察 葡萄糖的铁盐检查

3 实验原理和步骤 3.6 重金属检查 重金属(以Pb为代表)在弱酸性（pH3-3.5）溶液中与CH3CSNH2作用，生成黄色-棕黑色的硫化物混悬液，与一定量的标准Pb溶液相比较 CH3CSNH2→CH3CONH2+H2S Pb2++H2S→PbS ↓

以白色为背景，自上往下观察 葡萄糖的重金属检查

3 实验原理和步骤 3.7 麻醉乙醚中过氧化物的检查 麻醉乙醚易氧化分解为有毒的过氧化物，过氧化物与碘化钾淀粉溶液反应，可显蓝色或紫色 C2H5OOC2H5+2KI+H2O→C2H5OC2H5+5KOH+I2 I2+支链淀粉→？ 自行设计方案，配制所需试剂，提供两个厂家生产的乙醚进行比较

3 实验原理和步骤 3.7 麻醉乙醚中过氧化物的检查 麻醉乙醚5mL+新制碘化钾淀粉溶液8mL，密塞，强力振摇1min，暗处放30min，观察现象并记录 左：国药试剂 右：普通厂家 麻醉乙醚5mL 新制的碘化钾 淀粉溶液8mL 现象 具塞 比色管 密塞 强力振摇1min 暗处 放置30min

3 实验原理和步骤 3.8 肾上腺素中酮体的检查 肾上腺素是由肾上腺素酮经氢化还原制成，若氢化不完全，可能引进酮体杂质 酮体杂质在310nm波长处有最大吸收，而肾上腺素药物本身在此波长处几乎没有吸收 肾上腺素100mg +HCl（9→2000）50mL（肾上腺素浓度2.0mg/mL），照紫外法，在310nm的波长处测定吸光度，吸光度不得过0.05

1：肾上腺素 2：酮体

3 实验原理和步骤 3.9 布洛芬中有关物质的检查 布洛芬中的降解产物具有毒性，中国药典采用TLC法，以自身稀释对照法检查布洛芬的有关物质 布洛芬100mg /CHCl31mL，作为供试品溶液 精密量取适量+CHCl3稀释成1mg /1mL，对照品溶液

3 实验原理和步骤 3.9 布洛芬中有关物质的检查 各吸取5μL，点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（15:5:1）为展开剂，展开，晾干，喷1%高锰酸钾的稀硫酸溶液，在120℃加热20min，至紫外灯（365nm）下检视 结果判断：供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深

供试品主斑点和对照品主斑点在一条线上，供试品除主斑点外无其他的杂质斑点 左：供试品斑点 右：对照品斑点 供试品主斑点和对照品主斑点在一条线上，供试品除主斑点外无其他的杂质斑点

TLC操作要点 市售薄层板临用前在110℃活化30分钟。 点样基线距底边1.5-2.0cm，样点直径为2-4mm，点间距离为1.0-2.0cm。点样时必须注意勿损伤薄层板表面。 浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5-1.0cm，切勿将样点浸入展开剂中。 待展开至适宜的展距（一般为10-15cm），取出薄层板，晾干。 可直接在日光下检视，也可用适宜显色剂显色，或加热显色。

4 注意事项 酸碱度检查时应加入新煮沸放冷的蒸馏水为溶剂。 比色或比浊操作，一般均应在比色管中进行。 比色、比浊前应使比色管内溶液充分混匀，然后将两管同置于黑色或白色背景上，自上往下观察。 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30分钟。除另有规定外，点样基线距底边1.5-2.0cm，样点直径为2-4mm，点间距离为1.0-2.0cm。

5 思考题 一般杂质检查的主要项目有哪些？ 比色、比浊操作应遵循的原则是什么？ 特殊杂质检查的常用方法有哪些？

麻醉乙醚5mL 新制的碘化钾 淀粉溶液8mL 具塞 比色管 现象 密塞 强力振摇1min 暗处 放置30min 1 .酸度检查 5 .重金属检查 葡萄糖2.0 g 新煮沸放冷 蒸馏水20mL 现象 酚酞3d NaOH 0.20mL 葡萄糖4.0g 至15mL 蒸馏水 调pH3.5 醋酸盐缓冲液2mL 标准Pb2+ 2.0mL 2. 氯化物检查 2.0mL 硫代乙酰胺 至25mL 蒸馏水 静置 摇匀 葡萄糖0.6g 标准NaCl 6.0mL 至25mL 蒸馏水 比浊 10mL 稀HNO3 1mL AgNO3 至50mL 暗处放置5min 摇匀 比色 6.麻醉乙醚中过氧化物的检查 麻醉乙醚5mL 新制的碘化钾 淀粉溶液8mL 具塞 比色管 现象 密塞 强力振摇1min 暗处 放置30min 3.硫酸盐检查 葡萄糖2.0g 标准K2SO4 2.0mL 至25mL 蒸馏水 比浊 2mL 稀HCl 5mL BaCl2 至50mL 暗处放置10min 摇匀 7.肾上腺素中酮体的检查 肾上腺素100mg 测吸光度 HCl(9→2000) 50mL 紫外 310nm 8.布洛芬中有关物质的检查 4.铁盐检查 100mg/mL供试品溶液 5 μL 吸取 同一薄层板 点样 1mg/mL对照品溶液 15:5:1 正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸 展开 晾干 120 ℃加热20min 1%高锰酸钾的稀硫酸液 365nm 紫外灯 检视 葡萄糖2.0g 标准Fe3+ 2.0mL 至25mL 蒸馏水 比色 3d 浓HNO3 放冷 煮沸5min 至50mL 静置 摇匀 3.0mL 硫氰酸铵

药品信息 葡萄糖： 麻醉乙醚： 厂家，武汉福星生物药业有限公司 规格，500ml含葡萄糖25g，氯化钠4.5g 生产批号140819522 生产日期20140819 有效期至20160818 麻醉乙醚： 生产厂家，国药集团化学试剂有限公司 规格，500ml含量99.7%以上 生产批号20141103 无有效期

药品信息 肾上腺素： 布洛芬： 厂家，武汉威龙化工仪器有限公司 规格，CP（化学纯） 生产日期201503 有效期至201802 生产厂家，武汉威龙化工仪器有限公司 规格， CP 生产批号201404 有效期至201703