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同型半胱氨酸与高血压及脑卒中相 关性的研究 张伟毅博士 澳大利亚悉尼大学
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同型半胱氨酸代谢途径 同型半胱氨酸又称为高半胱氨酸 (Homocysteine,Hcy) ，是甲硫氨酸的中间代谢产物 ，在体内由甲硫氨酸转甲基后生成，有两种去路， 一是 Hcy 可在胱硫醚缩合酶 (CBS) 和胱硫醚酶的催化 下生成半胱氨酸，需要维生素 B6 的参与，或经巯基 氧化结合生成高胱氨酸，另外 Hcy 还可在叶酸和维 生素 B12 的辅助作用下再甲基化重新合成甲硫氨酸 ，此过程需甲硫氨酸合成酶 (MS) 的催化，并且必须 有 N5- 甲基四氢叶酸作为甲基的供体，后者是四氢 叶酸经 5 ， 10- 甲烯四氢叶酸还原酶 (MTHFR) 催化 而产生
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PCR for TNF-
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高同型半胱氨酸血症 相关疾病： 动脉粥样硬化 (1969) 心脏病 (1984) 脑卒中 (1991): 独立危险因素
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中国高血压现状 高血压发病人数 : 约 2 亿 同型半胱氨酸与高血压 : 原发性高血压伴高同型 半胱氨酸血症 ( 血浆中浓度 >15 umol/L) ： 1.5 亿 ( 占高血压病人 75%) 心脏病及脑卒中发病风险 : 28 倍 MTHFR 纯合突变型 (TT): 风险达到 40 倍
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国内脑卒中现状 2008 年在国内排名第一的死因为脑卒中 耗资 (RMB): 4 亿 / 年 病人 : 750 万
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MTHFR MTHFR: 亚甲基四氢叶酸还原酶 位置 : 1p36.3 （ 1 号染色体短臂 36.3 ） 基因多态性及突变 (43 个位点 ) 基因型及表型
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C677T MTHFR 1995 （第 677 号位点由 C 突变为 T ） – 不同基因型所保留的 MTHFR 活性 : – CC （野生型） – 100 – CT （ 杂合突变型） – 71 ( 国人突变频率为 35%) – TT （ 纯合突变型） – 34 ( 国人突变频率为 22%, 白 – 种人仅 10% ） A1298T MTHFR 2001 其它 7 个较常见易突变位点 34 个不常见突变位点 2003 MTHFR 多态性
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高同型半胱氨酸血症 心脏病 脑卒中 深部静脉血栓 外周神经障碍 胎盘血管问题 ( 死胎 ) 胎儿发育不良、唇裂、妊娠中毒症等, C677T 缺陷
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抑郁、焦虑 纤维肌痛 慢性疲劳 偏头痛 痴呆 神经痛 精神分裂症 帕金森氏综合征 A1298T 缺陷
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基因组 DNA 100ng 引物各 10 pmol 上游引物 : 5’-CAAAGGCCACCCCGAAGC-3’ 下游引物 : 5’-AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3’ 1 X Taq 酶缓冲液 (2 mM MgCl 2 ) Taq 酶 0.25 U 退火温度 : 68 0 C 产物片段长度 : 246 bp MTHFR C677T PCR 扩增
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限制性内切酶 : Hinf I, 5 U 条 件 : 37 0 C 过夜 基 因 型 :CC （野生型） - 246 bp TC （杂合突变型） - 246, 174, 72 bp TT ( 纯合突变型 ) - 174, 72 bp MTHFR C677T 的限制性片段长 度多态性检测
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CBS CBS: 胱硫醚合酶 位置 : 21q22.3 （ 21 号染色体长臂 22.3 ）
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目的基因 : CBS 844 位点插入了 68 个基因 上游引物 : 5’-TGCGAGGATGGACCCTTCGG-3’ 下游引物 : 5’-GCAGTTGTTAACGGCGGTAT-3’ 1 X Taq 酶缓冲液 (2 mM MgCl 2 ) Taq 酶 0.25 U 退火温度 : 55 0 C PCR for CBS
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基因型 : DD ( 野生型 )- 148 bp DI （ 杂合突变型） - 216, 148 bp II （纯合突变型） - 216 bp CBS 的基因型
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需检测人群 高危人群 1 、原发性高血压 2 、高同型半胱氨酸高血压 3 、高血压伴随高血脂、高血糖 4 、以前发生过血栓 5 、家族史
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预 防 叶酸 : 400ug/ 天 孕妇 MTHFR 纯合突变型 TT : 更多的叶酸 肝素 : 低分子量
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