外周血淋巴细胞微核检测 佛山市中医院检验科 陈海生. 概念： 微核是位于细胞浆中独立于主核的核小体主 核完全脱离, 直径约为主核的 1 /20 ～ 1 /3 。形 态是较规整的圆形或椭圆形小体。染色质结 构与主核相似, 边缘光滑, 染色同染色质或稍淡, 无明显折光性。在生物、物理、化学等外界 因素作用下,

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1 外周血淋巴细胞微核检测 佛山市中医院检验科 陈海生

2 概念： 微核是位于细胞浆中独立于主核的核小体主 核完全脱离, 直径约为主核的 1 /20 ～ 1 /3 。形 态是较规整的圆形或椭圆形小体。染色质结 构与主核相似, 边缘光滑, 染色同染色质或稍淡, 无明显折光性。在生物、物理、化学等外界 因素作用下, 细胞染色体丢失或断裂, 在细胞分 裂后期, 这种染色体如果仍留在子细胞质内, 形 成一个或几个规则的次核, 即为微核 ( 卫星核 )

3 微核的形成  微核形成与染色体断裂、缺失, 以及染色体畸 变的发生高度相关, 检测微核可以间接反映染 色体受损情况。  通常检测微核反映机体所受环境诱变剂、致 癌剂、 X 射线及其他有害因素所引起的染色体 损伤程度

4 参数 ①微核人员检出率 : 检出淋巴细胞微核的人员占 该组总人数的百分率。 ②微核阳性检出率 : 超出微核正常值上限的人数 占该组总检出人数百分率 ③微核细胞率 : 每 1 000 个淋巴细胞中含微核的 淋巴细胞数量 ④微核率 : 每 1 000 个淋巴细胞的微核数量。 后两者均以千分率表示。

5 方法 一. 淋巴细胞普通培养法 二. 微量血直接推片法 三. 明胶制片法

6 方法  采取耳垂血 0.1ml, 肝素抗凝, 与 1/2 量的 3% 明胶放入离心管中, 加盖混匀, 垂直 至于 37oC 水浴箱中自然沉降 40 分钟左 右。吸取上清液，注入离心管中， 1000rpm/5 分钟，弃上清，取沉淀物推 片，干后，甲醇固定 1 分钟，瑞 - 姬氏染 色 1 0 分钟。

7  微核计数标准：在油镜下观察 1000 个淋巴细胞，按国家标准 确定微核，即微核大小为主核 的 1/20 ～ 1/3 ，与主核核膜完全 分离，形态较规正，圆形或椭 圆形，染色性与主核相似或稍 淡，无明显折光性。进行以下 指标的检测。

8 外周血淋巴细胞微核检测在良性、癌 前病变及恶性疾病中的意义 目前恶性肿瘤的发生率逐年升高。恶 性肿瘤是癌细胞的恶性克隆性异常, 其发 生与机体细胞内的遗传物质损伤有着密 切关系。由于微核与染色体畸变高度相 关, 近年来微核检测在恶性疾病研究方面 受到极大重视。

9 国外研究 - 微核与恶性疾病  国外新近研究显示：未经治疗白血病患 者的微核率明显高于正常对照组, 分别为 : 正常对照组 (0.187 ±0.175) ‰ 、急性淋 巴细胞白血病 (3.165±1.147) ‰ 、急性髓 系白血病 (3.155 ±1.124) ‰ 、慢性淋巴 细胞白血病 (3.103 ±1.105) ‰ 。

10 国外研究 - 微核与恶性疾病  据研究：提示白血病患者存在染色 体断裂、丢失等异常, 表现为染色体 不稳定性改变, 导致同位、临位原癌 基因激活, 抑癌基因失活, 而发生肿瘤。

11 国内研究 - 微核与恶性疾病  国内研究报道：一组恶性实体肿瘤患者 的淋巴细胞微核率明显增高, 超过正常对 照组 10 倍以上。有专家立项 “ 人类微核项 目 ”(HUMN) 的研究, 针对日本、意大利、 瑞典为主的实体肿瘤患者, 其中包括肺、 胃肠、肝胆、胰腺、乳腺肿瘤。结果显 示 : 高微核率与肿瘤发生高度相关, 膀胱 癌与肾癌的相对危险度 (RR) 可达 8.123 。

12 微核与恶性疾病  反复地或长期地处于致染色体突变环境 下的高危人群, 可发生染色体的异常。  微核可以反映染色体的损伤, 所以机体在 致癌环境下可首先表现为微核率增多, 这 种异常的累积导致染色体突变, 最终导致 恶性肿瘤的发生。

13 微核与恶性疾病  因此, 微核检测可提前告知染色体 可能发生畸变, 警戒高危人群, 脱 离高危环境, 防止继续处于高危状 态, 最终出现染色体异常, 导致肿 瘤发生。所以微核检测的意义重 在于预测和监测, 具有早期预测筛 查恶性疾病发生的重要意义。

14 微核与癌前病变  动物实验已经证实, 不论是成体或是胚胎 期在出现恶性肿瘤前首先在血细胞或其 他类型细胞中出现微核。微核先于癌前 出现, 更早于临床症状及体征。可以利用 微核作为人体早期致癌危险性的监测。 为癌症及时发现与诊断、积极实行早期 干预治疗提供依据。

15 微核与 MDS  骨髓异常增生综合征 (MDS) 是一组骨 髓造血干 / 祖细胞克隆性异常疾病, 临床 表现为一系或多系血细胞减少, 骨髓或外 周血细胞有病态造血, 表现为同时或先后 出现红系、粒系和巨核系发育异常。其 部分可以向白血病转化, 实际是血液系统 的癌前病变。因此, 骨髓异常增生综合征 的早期诊断及监测其转化具有重要意义。

16 微核与 MDS  染色体异常是导致造血细胞异常的直接 原因。 MDS 患者在诊断时, 40% ～ 60% 有染色体异常, 随着病程的进展可高达 80% 。总之, 染色体异常在 MDS 中的 RA 或 RARS 发生率相对较低 ( 15% ～ 30% ), 而且多为单一异常 ; 在 RAEB 或 RAEBT 的发生率高达 45% ～ 60%, 而且 多为复杂异常，并且随着病程进展, 可出 现异常克隆增多或出现新的异常。

17 微核与 MDS  骨髓造血干 / 祖细胞克隆性改变反映了病 程演变是一个伴随染色体异常的渐变过 程。微核是滞留在细胞质中的染色体断 片或染色单体。

18 微核与 MDS  因此, 微核是染色体畸变在细胞中的一种 表现形式, 它在一定程度上反映了机体染 色体的损伤程度。近年来微核检测在 MDS 方面的研究日益增多。

19 微核与 MDS  专家在对 MDS 患者中 RA 、 RAS 、 RAEB 和 RAEBT 各型的随访监测中, 发现 MDS 即将转 变为白血病时微核率及微核细胞率显著增高, 可达到白血病水平。表明微核率增高, 高度预 示 MDS 向白血病转化, 达到一定水平时, 可以 作为 MDS 转化为白血病诊断指标之一。

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