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仪 器 分 析 实 验仪 器 分 析 实 验 主讲人：刘江涛 E-mail: peach2008@cqnu.edu.cn 重庆师范大学 化学学院
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目的要求： 1 、掌握荧光分析法的基本原理。 2 、了解 LS-55 荧光光谱仪的基本结构、 性能与操作方法。 3 、掌握维 B6 的含量测定方法。 分子荧光法测定维生素 B6 的含量
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一、分子荧光分析法简介
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9 二、维生素 B6 含量的测定
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实验步骤 （一）样品的制备 （二）维生素 B6 的荧光光谱测定 激发波长和发射波长的选择 1 、打开荧光光度计和计算机，预热，对荧光光度计 进行仪器初始化。 2 、选择测量参数，依次在不同的激发波长下扫描发 射光谱，通过叠加的谱图确定物质的荧光发射峰。最 后确定最大发射波长值。 3 、在确定的最大发射波长下扫描激发光谱，确定物 质的最大激发波长。
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（三）绘制标准曲线，测量维生素 B6 注射液中维 B6 的含量 1 、 分别取 1ml 、 3ml 、 5ml 、 7ml 标准维 B6 溶液于 25ml 容 量瓶中，定容。计算系列标准溶液的浓度，待用。 2 、将仪器软件界面选择到定量测定的状态下，根据测得的 维 B6 的最大发射波长和最大激发波长，设定定量测定的参 数。 3 、绘制标准曲线 4 、测定待测液浓度：在同样条件下，通过标准曲线得到待 测样的浓度 5 、保存数据。
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三、问题讨论 1 、从分析方法的原理及仪器的简单构造、结构方面 阐述分子荧光分析法的应用特点及范围； 2 、影响荧光定量分析准确性的因素有哪些？在分析 过程中应该注意哪些问题？ 3 、解释荧光分子的最大激发波长和最大发射波长的 相互关系。
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