第六章 含动物药、矿物药的 中药制剂分析 药物分析教研室.

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1 第六章 含动物药、矿物药的 中药制剂分析 药物分析教研室

2 第一节 含动物药制剂的分析 一、牛黄及其制剂分析
第一节 含动物药制剂的分析 一、牛黄及其制剂分析 牛黄（alculus Bovis）为牛科动物牛Bos taurus domesticus Gmelin.干燥的胆结石。甘、凉。归心、肝经。 人工牛黄：亦称人工合成牛黄。为牛胆汁或猪胆汁经人工提取制成的浅棕色或金黄色粉末。人工牛黄与天然牛黄的化学成分，差异较大，其疗效不及天然牛黄。 人工培育牛黄：就是在牛的腹部施胆囊手术，放进异物，注入经培养的大肠杆菌菌种，人为地造成胆结石，在牛体内埋植一年或更长时间，将核取出，凝集于核体表面的附着物。人工培育的牛黄和天然牛黄在成分、质量、药理作用等方面都基本一致。

3 （一）牛黄的化学成分 天然牛黄及人工培育牛黄中均含有胆色素、胆汁酸、脂类、肽类、氨基酸和无机元素。 （二）胆汁酸的化学反应 胆汁酸的主要成分是胆酸和去氧胆酸，较易溶于丙酮与乙醇中，其钠盐易溶于水。 1． Pettenkofer 反应 利用蔗糖经浓硫酸作用生成羟甲基糠醛，可与胆汁酸结合生成紫色。 2． Gregory Pascoe反应 此反应原理与上述Pettenkofer反应相似，胆酸存在的溶液显蓝色。此反应可作为胆酸的定量反应。 3． Hammarsten反应 20%铬酸溶液（20gCrO3在少量水中，加醋酸至100ml）溶解少量样品，温热，胆酸显紫色，鹅去氧胆酸不显色。

4 （三）胆红素的化学反应 胆红素不溶于水，溶于苯、氯仿、氯苯、二硫化碳及碱液中，微溶于乙醇、乙醚。其钠盐易溶于水，在碱液中或遇Fe3+后极不稳定，很快被氧化。 1． Gmelin反应 将浓硝酸数滴沿试管壁小心加入含有胆色素的样品中，注意观察接触处的绿、蓝、紫、红及黄等颜色环。 2． Van den Bergh反应（重氮化反应） 胆红素试剂与重氮化对氨基苯磺酸重氮盐偶合生成偶氮染料。由此产生的偶氮染料在强酸中呈蓝紫色，pH2.0～5.5时呈红色，pH5.5以上则呈绿色。

5 （四）定性鉴别 1.理化鉴别 取本品少许，加清水调和，涂于指甲上，能将指甲染成黄色，习称“挂甲”。
取牛黄粉末少许，加氯仿1ml，摇匀，再加硫酸与过氧化氢溶液（30%）各2滴，振摇，即显绿色（胆红素反应）。 取牛黄粉末0.1g，加60%醋酸4ml，研磨，滤过，取滤液1ml，加新制的糠醛（新蒸馏至几乎无色）溶液（1→100ml）1ml与硫酸液（硫酸5ml加水6.5ml混合）10ml，置70℃水浴中加热10分钟，即显兰紫色（胆酸反应）。 取牛黄少许，用水合氯醛试液装片，不加热，置显微镜下观察；不规则团块由多数黄棕色或棕红色小颗粒集成，遇水合氯醛液，色素迅速溶解，并显鲜明金黄色，久置后变绿色。

6 2．薄层色谱法 取牛黄粉末10mg，加氯仿20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取胆酸、去氧胆酸对照品，加乙醇制成每1ml各含2mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-醋酸乙酯-冰醋酸（15∶7∶5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的两个荧光斑点。

7 （五）含量测定 牛黄的含量测定，主要是以含量较高的胆红素、胆酸、去氧胆酸及人工牛黄中的猪去氧胆酸为测定指标。 1、胆酸的含量测定： 化学法测总胆酸的含量； 比色法测去氧胆酸的含量； 滴定法测猪去氧胆酸的含量； 薄层扫描法测胆酸的含量。 2、胆红的含量测定 分光光度法； 高效液相色谱法。

8 二、麝香及其制剂的分析 麝香为鹿科动物林麝Moschus berezovskii Flerov、马麝Moschus sifanicus Przewalski和原麝Moschus moschiferus linnaeus成熟雄体脐下腺香囊中的干燥分泌物。其功能为开窍醒神、活血通经、消肿止痛。用于热病神昏，中风痰厥，气郁暴厥，闭经，难产死胎，癥瘕，心腹暴痛，痈肿瘰疬，咽喉肿痛，跌打伤痛，痹痛麻木等症。

9 （一）麝香的化学成分及性质 天然麝香中的化学成分极为复杂； 主要有麝香酮等大环化合物、甾族化合物、胆固醇、脂和蜡、蛋白质、肽、氨基酸、无机盐及尿囊素、胆酸和胆红素样物质等其他成分。 麝香酮是麝香中香气的主要成分，一般含量为2%-4%.

10 （二）定性鉴别 1． 理化鉴别 取毛壳麝香用特制槽针从囊孔插入，转动槽针，撮取麝香仁，立即检视，槽内的麝香仁应有逐渐膨胀高出槽面的现象，习称“冒槽”。麝香仁油润，颗粒疏松，无锐角，香气浓烈。不应有纤维等异物或异常气味。 取麝香仁粉末少量，置手掌中，加水润湿，用手搓之能成团，再用手指轻揉即散，不应粘手、染手、顶指或结块。 取麝香仁少量，撒于炽热的坩埚中灼烧，初则迸裂，随即融化膨胀起泡似珠，香气浓烈四溢，应无毛、肉焦臭，无火焰或火星出现。灰化后，残渣呈白色或灰白色。 麝香仁粉末棕褐色或黄棕色。为无数不定形颗粒状物集成的半透明或透明团块，淡黄色或淡棕色；团块中包埋或散在有方形、柱状、八面体或不规则的晶体；并可见圆形油滴，偶见毛及内皮层膜组织。

11 2、气相色谱法因麝香具挥发性，故可用GC法进得鉴别
3、紫外光谱法根据麝香在不同溶剂中有不同最大吸收波长时行鉴别 4、薄层色谱法采用适当薄层条件对麝香供试品溶液进行色谱分离后，选用麝香中所含多种化学成分对其进行鉴别。

12 （三）含量测定 麝香的含量测定主要用色谱法，如气相色谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法等。 气相色谱法：常以麝香酮为对照品进行测定。 薄层扫描法：利用高效薄层扫描定量方法可测定麝香中8甾烷类化合物的含量。 高效液相色谱法：利用高效色相色谱法可对8种甾烷进行含量测定。

13 三、熊胆及其制剂分析 熊胆为熊科动物黑熊Selenarctos thibetanus Cuvier或棕熊Ursus arctos Linnaeus的干燥胆，熊胆是我国传统的名贵中药材。 （一）熊胆的化学成分及性质 熊胆中的主要化学成分为胆汁酸类（约占胆汁中的58～59%）成分，其中主要含牛磺熊去氧胆酸（TUDCA）， 胆汁酸通常与牛磺酸、甘氨酸结合，以钠盐或钙盐的形式存在。 熊胆中含有的胆色素以胆红素为主，尚有胆黄素、胆褐素。 还含有多种氨基酸、胆固醇、脂肪、磷脂及无机无素。

14 （二）定性鉴别 1．光谱鉴别 取胆仁少许，制成甲醇液，测定紫外吸收光谱，在273±2nm波长处有最大吸收（猪胆在270±1nm、415±2nm波长处有吸收，牛胆在265±1nm、413±1nm波长处有吸收，羊胆在405±3nm波长处有吸收）。 2．薄层层析法 常用的薄层色谱条件如下薄层板：110℃活化的硅胶G板，展开剂：异辛烷-醋酸乙酯-醋酸(5:5:1)。显色剂：喷30%硫酸乙醇溶液，于105℃加热10min,检测结果：可检出游离及结合的胆酸（黄色）、猪去氧胆酸（绿褐色）、熊去氧胆酸（绿褐色）、鹅去氧胆酸（绿褐色）、去氧胆酸（黄棕色）及石胆酸（紫色）。

15 （三）含量测定 薄层色谱-比色法：取胆酸类样品的乙醇溶液，经色谱分离后，刮取胆酸、去氧胆酸及甘氨胆酸相应斑点，提取后在分光光度计上测定。
薄层扫描法：样品供试液经薄层色谱分离后，以熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸为对照品，采用薄层扫描仪扫描测定。 高效液相色谱法：样品经适当处理后，以牛磺去氧胆酸和牛磺鹅去氧胆酸为对照品，采用高效液相色谱法进行测定。 气相谱法：胆酸样品制成乙酰基衍生物的甲酯，以胆甾醇己酸酯为内标物，可测定石胆酸、猪去氧胆酸、熊去氧胆酸、去氧胆酸、鹅去氧胆酸及胆酸的含量。

16 四、蛇胆及其制剂分析 蛇胆汁为眼镜蛇科、游蛇科或蝰蛇科动物多种蛇的胆汁。味苦、寒，归肺、肝、胃经，具有行气化痰，祛风除湿，清肝明目，平肝息风，清热解毒等功效。常用于肝热目赤，肺热咳嗽，胃热疼痛，急性风湿性关节炎，痔疮，皮肤热毒等症。 （一）化学成分及性质 主要化学成分为胆法酸类，且多数以牛磺酸结合的结合型胆甾酸形式存在； 同时蛇胆中还有无机元素。

17 （二）定性鉴别 多以薄层色谱为主。 薄层板多用硅胶G薄层板， 展开系统常用的有： ①异戊醇-冰醋酸-水（18：10：6） ②甲苯-冰醋酸-水（10：10：1） ③异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水（10：5：5：3：1）等。 对照品：胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、熊去氧胆酸等。 显色条件：30%硫酸乙醇（V/V）,喷后在105℃烘烤10min，置紫外灯（254nm）下观察。

18 （三）含量测定 蛇胆中主要成分为胆汁酸类，所以对胆汁酸类成分分析的方法很多，如比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法，气相色谱法等。

19 性味辛、温。归心经。主要功能为解毒、止痛、开窍醒神。用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑吐泻，腹痛神昏，手术麻醉以及强心、升压、兴奋呼吸、抗肿瘤等。
五、蟾酥及其制剂分析 本品为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor.或黑眶蟾蜍Bufomelanostictus Schneider的干燥分泌物。 性味辛、温。归心经。主要功能为解毒、止痛、开窍醒神。用于痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑吐泻，腹痛神昏，手术麻醉以及强心、升压、兴奋呼吸、抗肿瘤等。 （一）化学成分及性质 化学成分复杂，主要含有蟾酥甾二烯类、强心甾烯蟾毒类和吲哚碱类。

20 （二）定性鉴别 1．显色反应 取本品粉末0.1g，加甲醇5ml，浸泡1小时，滤过，滤液加对二甲氨基苯甲醛固体少量，滴加硫酸数滴，即显蓝紫色。
往氯仿浸出液中慢慢加硫酸时，界面显鲜黄色，放置后界面变色，氯仿层显淡红色（胆汁酸的显色反应）。 取样品加酒石酸液，在水浴中加热之后，过滤，滤液加对二甲氨基苯甲醛，在水浴中加热，加水时，其液显蓝色（蟾酥碱，蟾酥甲碱等吲哚基的显色反应）。 本品氯仿浸出液加白糖溶液，激烈振摇，其后，慢慢加硫酸，界面显红色。纸色谱法、红外光谱法、薄层色谱法、紫外光谱法。

21 （三）含量测定 蟾酥及其制剂的含量测定方法很多，如分光光度法、薄层扫描法、差示光度法、高效液相色谱法和气相色谱法等。

22 六、斑蝥及其制剂分析 本品为芫青科昆虫南方大斑蝥Mylabris phalerata Pallas或黄黑小斑蝥Mylabris cichorii Linnaeus的干燥体，目前主要用于治疗各种癌症。

23 (一)化学成分及性质 含斑蝥素（斑蝥酸酐cantharidin）1% ～2%，脂肪12%，树脂、蚁酸、甲酸、色素、挥发油、甲壳质等，同时还含有多种无机元素。 1.理化鉴别 斑蝥素有升华作用，取样品粉末约0.15g，用微量升华法得白色升华物，在显微镜下为柱形、棱形结晶。升华物加硫酸（比重1.77）2～３滴，微热，溶解后转入试管中，加入间苯二酚粉末少许，小火加热至淋，溶液变红色，在紫外灯下观察，显绿色荧光（检查斑蝥素）。

24 2.纸色谱法 样品水提液点于新华层析滤纸； 展开剂：正丁醇-95%乙醇-冰醋酸-水（4:1:1:2）； 105℃烘干后，用0.5%茚三酮溶液喷雾，于105℃加热10分钟； 可见5个斑点，斑点显浅红色至蓝紫色。 3.薄层色谱法吸附剂： 硅胶G；展开剂:氯仿-丙酮（98：2）；显色剂：0.1%溴甲酚绿乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。

25 （三）含量测定 对于斑蝥素的含量测定，方法较多， 可用酸碱滴定法、 配位滴定法、 非水滴定法、 紫外分光光度法、 薄层扫描法、 气相色谱法等， 中国药典2005年版采用气相色谱法。

26 第二节 含矿物药中药制剂的分析 一、概述 矿物类药材为中药中植物、动物、矿物三大类药材之一，简称矿物药，其中包括天然矿物、生物化石、人类加工品及纯粹化学制品，主要为无机化合物，故又可称为无机类药材。 祖国医药学使用矿物药治疗疾病有着非常悠久的历史和丰富的经验。目前临床上较广泛应用的矿物药大约有60多个品种。

27 （一）矿物药的分类 《神农本草经》将矿物药分为上、中、下三品；明朝李时珍《本草纲目》将矿物药分别记述在火部、水部、土部、金石部、石部等。其中大部分矿物药列入金石部，金石部又分为“金、玉、石、卤”四类。后经历代的发展，从医药观点出发，目前，主要按其所含主要化学元素和化合物分类。

28 按所含主要化学元素分类，可将矿物药分为十类：
（1）含砷的矿物药：如雄黄、雌黄、信石、砒霜等。 （2）含汞的矿物药：如朱砂、灵砂、轻粉、红粉、白降丹等。 （3）含铅的矿物药：如红丹、铅粉、密陀僧、铅霜等。 （4）含铜的矿物药：如胆矾、铜绿、绿盐、扁青、曾青、空青等。 （5）含铁的矿物药：如赭石、磁石、禹余粮、皂矾、针砂、黄矾等。 （6）含钙的矿物药：如石膏、钟乳石、花蕊石、紫石英、寒水石、石灰华等。 （7）含硅的矿物药：如滑石、白石英、阳起石、青礞石、云母石、麦饭石等。 （8）含硫的矿物药：如芒硝、朴硝、玄明粉、硫黄等。 （9）含氯的矿物药；如大青盐、秋石、紫脑砂、白脑砂等。 （10）其他矿物药：白矾、炉甘石、无名异、卤碱、硼砂、硝石、琥珀等。

29 （二）矿物药的分析方法 常用的分解方法可分为：溶解法（湿法）和熔融法（干法）两种。 1、溶解法（湿法） ①将试样溶解在水、酸或其他溶剂中的分解方法。 ②通常采用水、稀酸、浓酸、混合酸的顺序进行处理。 2、熔融法（干法） ①将试样与固体熔剂混合，然后在高温下加热至全熔或半熔，使欲测组分转变为可溶于水或酸的化合物。 ②熔剂：碱性熔剂，如碳酸钠、氢氧化钠。 酸性熔剂，如硫酸氢钾、焦硫酸钾。 氧化性熔剂，如过氧化钠、碳酸钠加硝酸钾。 还原性熔剂，碳酸钠加硫等。

30 （三）含量测定方法 1、化学分析法 （1）滴定分析法：常用氧化还原滴定和配位滴定， （2）重量法：常用沉淀重量法，如汞的定量分析 2、可见分光光度法：一些无机金属元素可与某些化合物形成有色配合物，可用分光光度法测定。如砷盐的检查。 3、原子吸收光谱法：该法能测定几乎全部金属元素和一些碱金属元素，广泛应用于中药原料其制剂中各种微量元素的分析。

31 二、含砷矿物药及其制剂分析 含砷的矿物药主要有：雄黄（主要成分为As2S2）、雌黄（主要成分为As2S3）、砒石（主要成分为As2O3）、砒霜（为砒石经升华而得的精制品）等，尤以雄黄应用最多。 (一）定性鉴别 利用其中所含元素砷或硫的理化性质进行鉴别。 1、取适量样品，加水湿润后，加饱和氯酸钾的硝酸溶液2ml，溶解后加入氯化钡，产生大量白色沉淀，放置后，倾出上层酸液，再加水2ml，振摇，沉淀不溶解。（检查硫）。 2、取本品0.2克置坩锅内，加热熔融，继续加热产生白色或黄白色火焰，并伴有白色浓烟，取玻片覆盖后，有白色冷凝物，刮取少许置试管内加水煮沸使溶解，必要时滤过，溶液加硫化氢试液数滴即显黄色，加稀盐酸后产生黄色絮状沉淀，再加碳酸铵试液后，沉淀复溶解。（检查砷）

32 （二）含量测定 1．碘量法 （1）直接碘量法： ①硫酸分解—直接碘量法 取试样用硫酸分解，使转变成亚砷酸。中和至pH=8，以淀粉作指示剂，用碘标准液滴至兰色。 ②碱熔分解—直接碘量法 试样采用碱熔分解后，以淀粉作指示剂，用碘标准液滴定。 （2）分光光度法：采用二乙基二硫代氨基甲酸银法测定样品中砷含量。

33 三、含汞矿物药及其制剂分析 含汞的矿物药主要有： 水银（主要成分Hg）、 朱砂（主要成分HgS）、 灵砂（主要成分HgS）、 银朱（主要成分HgS）、 升药（主要成分HgO）、 轻粉（主要成分Hg2Cl2）、 粉霜（主要成分Hg2Cl2）、 白降丹（主要成分Hg2Cl2与HgCl2）

34 （一）定性鉴别 1． 亚汞盐 （1）取供试品溶液，加氨试液或氢氧化钠试液，即变黑色。 （2）取供试品溶液，加碘化钾试液，振摇，即生成黄绿色沉淀，瞬即变为灰绿色，并逐渐变为灰黑色。 2． 汞盐（1）取供试品溶液，加氢氧化钠试液，即生成黄色沉淀。 Hg2++2OH-HgO↓+H20 （2）取供试品的中性溶液，加碘化钾试液，即生成猩红色沉淀，能在过量的碘化钾试液中溶解，再以氢氧化钠试液碱化，加铵盐即生成红棕色的沉淀。 Hg2++2I—HgI2↓ HgI2+2I—HgI42- ↓ （3）取不含过量硝酸的供试品溶液，涂于光亮的铜箔表面，擦试后即生成一层光亮似银的沉积物。

35 （二）含量测定 1．硫氰酸盐法 （1）硫氰酸盐容量法是测定含汞矿物中汞含量的最常用方法。 （2）在5～20%的硝酸溶液中，以硫酸铁铵或硝酸铁为指示剂，用硫氰酸铵或硫氰酸钾标准溶液滴定。滴定反应如下： Hg2++2SCN-—Hg（SCN）2↓（白色） 终点时：Fe3++SCN- — FeSCN2+（淡棕红色）

36 2. 分光光度法 用硝酸-硫酸-高氯酸对含汞试样进行消化，分解释放出Hg2+ 在pH1-2的溶液中，高价汞与双硫腙作用生成橙色配合物 用四氯化碳提取该配合物后进行分光光度法测定（λmax492nm） 3． 原子吸收分光光度法 冷原子吸收法测定 火焰原子化法测定 固体样品可用无火焰原子化法测定