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核酸检测阳性结果的分析与追踪策略 山东省血液中心
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介绍内容 核酸检测概况 NAT检测情况分析 随访检测
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血站与医院临床核酸扩增检测的差异 血 站 临床实验室 目 的 缩短检测“窗口期” 感染性疾病的诊断和治疗监测 测定下限 定性测定，越低越好
血 站 临床实验室 目 的 缩短检测“窗口期” 感染性疾病的诊断和治疗监测 测定下限 定性测定，越低越好 定性或定量测定 测定策略 单人份或多人份混合 单人份 技 术 PCR和TMA PCR+产物分析（测序、杂交等） 对标本制备的要求 对标本必须进行核酸纯化，且必须自动化 对核酸纯化要求低，多为手工操作 对加样量和反应体积的要求 应尽可能大，决定了检测的敏感性 稍低些（相对于血站） 服务对象 受血者 被检者
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核酸检测工作概况 •检测样管：（5ml、8ml）EDTA-K2抗凝剂无RNA酶分离胶真空试管。
•标本离心时间：所有固定采血点（献血屋）配备水平离心机，2-4h内离心后2-8℃保存；流动采血车2～3h内取回站部检验科离心保存。 •检测模式： •NAT检测标本分配：
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进一步鉴别检测（ROCHE） 应采用具有相应检测下限的试剂，对不能鉴别HBV、HCV和HIV检测反应性样本进行鉴别检测。
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WB确证试验 献血日标本，无带型，结论为阴性。 •献血后第15天标本带型为gp160 p24
•第25天标本带型为gp160 gp120 p66 p55 gp41 p31 p24 p17，结论为HIV-1抗体阳性，证实为HIV感染者.
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乙型肝炎的感染进程
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HBsAg测定“阴性” 窗口期 隐匿性HBV感染：HBsAg检测为“阴性”,但在血循环或肝脏中可检出HBV DNA的HBV感染 12
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阳性（反应性）样本的确认程序 混合检测阳性（反应性）标本 乙肝”两对半” 追踪献血员(1-2月)可同时检测特异抗原 抗HBe和/或抗HBc+
再次检测核酸 阳性 送参比Lab验证 阴性 追踪献血员（1-2月后检测）“两对半”及核酸 确实不能追踪者 全阴 抗HBe和/或抗HBc+ HBV DNA HCV RNA HIV-1 RNA HBsAg+ 追踪献血员(1-2月)可同时检测特异抗原 乙肝”两对半” 混合检测阳性（反应性）标本 拆分阳性（反应性） 抗体（+） 仍全阴 抗体或抗原（—） 阳性（反应性）样本的确认程序 阳性 阴性 继续追踪献血员或送参比Lab验证 17
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核酸检测献血者追踪随访意义 核酸检测特点与需求 关爱献血者 输血安全研究 核酸检测阳性结果确认要求 窗口期病毒标识物 献血者有“知情权”；
及时提醒进行治疗 输血安全研究 窗口期 病毒感染标识物 方法评估
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追踪随访原则 知情同意与主动告知 NAT项目意义 检测结果解释 献血者隐私保密 个人信息、结果保密。 试验设计 规范管理
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阳性追踪流程： 核酸混样检测筛查出阳性 并经拆分试验阳性 电话通知献血者 电话通知被追踪者 检测结果 记录结果、分析结果 短信告知详细地址
被追踪者来到单位， 采集血液，临床咨询。 标本分别进行 NAT、EIA、ECLA
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核酸阳性追踪随访关键控制点 追踪时间 回访方式 样品采集 追踪试验 临床咨询与结果解释 数据分析
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追踪回访时间 NAT试验特点 是否有鉴别试验结果 不同病毒感染后标志物变化曲线 拆分试验阳性、尽快通知献血者， 3天、7天、14天、30天
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追踪回访时间 追踪时间：拆分试验阳性、尽快通知献血者，2～5天首次电话联系；15～30天再次联系，并通知追踪采样。
•追踪解释：对他感谢、目前国家规定方法检测合格、试点方法意义、试点方法结果、追踪随访意义，及时返回结果。
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追踪回访方式 追踪方式 第一时间通知献血者 联系方法 电话回访 短信、QQ、 私密性咨询、解释 追踪检测结果反馈
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样品采集 样品采集要求 编码规则： 带分离胶EDTA抗凝真空采血管（2管8ml、2管5ml） 记录采集日期、样品编码等信息
由于追踪标本无法按照中心无偿献血的条码进行编号，特制定编码规则； 具体规则为：献血者最近一次的献血码的后八位前加上0和月日， 例如：献血码后八位为1000XXXX，追踪标本采集日期为 ，则编码为： XXXX，以进行下面的实验。
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追踪试验 试验项目 EIA：实验室常规检测HBsAg、anti-HCV、anti-HIV
ECA：电化学发光检测乙肝“两对半”，anti-HCV、anti-HIV NAT：混样或者单检模式检测HBV、HCV、HIV核酸 生化项目：检测追踪样本ALT。
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临床咨询与结果解释 电话通知时的咨询服务 首次追踪回访时咨询服务 追踪试验结果的反馈与解释
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电话通知时的咨询服务 根据献血登记信息，电话联系。 电话告知内容 短信 言简意赅 我们的身份 检测结果 追踪目的、意义 提出要求 表示感谢
具体地址 办公电话
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首次追踪回访时咨询服务 解释结果的意义 请献血员阅读《知情同意书》 被追踪者及采血者签字 注意交谈的语气、措辞 回答尽量明确、实事求是
告知献血者注意事项。
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规范化管理 操作规程 制定《NAT阳性追踪操作规程》
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图1. 《山东省血液中心核酸检测（NAT）阳性无偿献血者血样采集知情同意书》
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图2. 《NAT阳性献血者采血纪录》
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追踪实例 首次检测结果： 首次检测HBV、HCV、HIV，通过两遍酶免及电化学发光方法检测均显示正常，但核酸检测混样及拆分结果均为阳性，提示为明显的“窗口期”。
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追踪实例 第一次追踪实验结果： 一周后，第一次追踪实验结果显示：单检模式联合检测HBV、HCV、HIV核酸，Ct值为30.1＜首次核酸检测阳性时单检的Ct值32.7，说明病毒拷贝数增多；电化学发光检测乙肝五项、anti-HCV、anti-HIV均为阴性。
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追踪实例 第二次追踪实验结果： 第五周时，第二次追踪实验结果显示：混样模式联合检测HBV、HCV、HIV核酸，Ct值为23.4＜首次核酸检测阳性时单检的Ct值32.7，且小于第一次追踪时单检的Ct值30.1，更加说明病毒拷贝数增多；电化学发光检测发现HBsAg、HBeAg为阳性，提示为早期乙肝感染或者慢性乙肝病毒携带者，类似“大三阳”传染性强。 但此时酶免结果仍为阴性，说明酶免的灵敏度较电化学发光低。
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追踪实例 第三次追踪实验结果： 第十二周时，第三次追踪实验结果显示：混样模式联合检测HBV、HCV、HIV核酸，Ct值为29.2＜首次核酸检测阳性时单检的Ct值32.7，且小于第一次追踪时单检的Ct值30.1，但大于第二次追踪时混样的Ct值23.4，说明病毒拷贝数较上次降低，但仍维持在较高水平；电化学发光检测发现只有HBeAb为阳性，提示乙肝病毒复制不活跃，传染性低或很少，是乙型肝炎病毒感染时间较长久的标志。若其长期存在，提示HBV-DNA和宿主DNA整合。但如果同时检出HBV-DNA阳性，说明血中仍存在乙肝病毒或病毒已变异，不仅具有传染性，而且对机体的危害可能更大。
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小结 HBV NAT 无疑为血液安全提供了更好地保障 •血清学检测 和NAT 互补，不可互相替代 •依然有可能漏检
•导致OBI产生是多原因的，情况各不同 阳性追踪是核酸检测工作中重点 咨询服务与结果解释是追踪回访的关键
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