第七章 寄生虫病诊断.

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1 第七章 寄生虫病诊断

2 第一节 病原学诊断方法

3 一、粪便虫卵检查法

4 1.直接涂片法 direct smear method 2.漂浮集卵法 flotation method 3.沉淀集卵法 sedimentation method 4.麦氏计数法 MacMaster method

5 5.毛蚴孵化法 是诊断日本血吸虫及 东毕吸虫的方法之一

6 取被检粪便30~100g(牛 100g)经沉淀集卵法处理， 将沉淀倒入500ml三角烧 瓶内，加温清水(自来水 需脱氯处理)至瓶口，置 22~26℃孵化，第1、3、 5h，用肉眼或放大镜观 察并记录一次。

7 如见水面下有白色点状物做 直线来往运动，即是毛蚴， 但需与水中一些原虫如草履虫、轮虫等相区别。必要时 吸出在显微镜下观察。气温 高时，毛蚴孵出迅速，因此，在沉淀处理时应严格掌握换 水时间，以免换水时倾去毛 蚴造成假阴性结果。

8 也可用1.0%~1.2%食盐水冲洗粪便,以防止毛蚴过早孵出，但孵化时应用清水

9 6. 粪便培养与幼虫分离法 圆线虫目所属线虫种类很 多，其虫卵在形态上非常 相似，很难区别。有时为 了区别这些线虫的种类， 常将含有虫卵的粪便加以 培养，待其中虫卵发育成 为幼虫时，再检查幼虫， 根据幼虫形态上的差异， 加以鉴别

10 有些寄生虫（如网尾科线 虫），其虫卵在新排出的 粪便中已变为幼虫；类圆 属线虫的卵随粪便排出后， 在外界温度较高时，经5- 12小时后，即孵出幼虫。 为了提高检出率，常将幼 虫从粪便中分离出来进行 检查

11 常用的方法为漏斗幼虫 分离法 亦称贝尔曼法 (Baermann's technique)

12 最常用的方法是在培养 皿底部加草纸或滤纸一 张，而后将欲培养的粪 便加水调成硬糊状，塑 成半球形，放于皿内的 纸上，并使半球形粪球 的顶部略高出平皿边沿， 使加盖时与皿盖相接触。

13 将此皿置25℃温箱中，注意 保持皿内湿度（应使底部的 垫纸保持潮湿状态）。经7 天后，多数虫卵即可发育成 第三期幼虫，并集中于皿盖 上的水滴中。将幼虫吸出置 载玻片上，放显微镜下检查

14 7. 测微技术 各种虫卵和幼虫，常有 恒定的大小，测量虫卵 或幼虫的大小，可作为 确定某一虫卵或幼虫的 依据。虫卵和幼虫的测 量需用测微器

15 二、体表虫体检查法

16 寄生于动物体表的寄生虫 主要有蜱、螨、虱等。对 于它们的检查，可采用肉 眼观察和显微镜观察相结 合的方法

17 蜱寄生于动物体表，个体 较大，通过肉眼观察即可 发现 螨和虱有些个体较小，常 需刮取皮屑，于微镜下寻 找虫体或卵

18 三、生殖道虫体检查

19 寄生于生殖道的虫体主要 有牛胎儿三毛滴虫和马媾 疫锥虫

20 牛胎儿毛滴虫存在于病 母牛的阴道与子宫的分 泌物、流产胎儿的羊水、 羊膜或其第四胃内容物 中，也存在于公牛的包 皮鞘内，应采取以上各 处的病料寻找虫体

21 由于虫体的检定，常以见 到运动活泼的虫体为准， 故在采集病料时必需尽可 能地避免污染，以免其它 鞭毛虫混入病料造成误诊。 采集用的器皿和冲洗液等 应加热使接近体温，否则 虫体骤然遇冷会失去活动 力或死亡。

22 冲洗液应采用以玻璃蒸馏装置制备的蒸馏水配制生理盐水，以保证冲洗液中不含金属离子，减少金属离子对虫体的影响。病料采集后应尽快地进行检查

23 由母畜采集病料，是取阴 道分泌的透明粘液，以直 接自阴道内采取为良好， 建议用一根长45厘米，直 径1.0厘米的玻璃管，在 距一端的12厘米处，弯成 150°角，而后消毒备用。

24 使用时将管的“短臂”插入受检畜的阴道，另端接一橡皮管并抽吸，少量阴道粘液即可吸入管内。取出玻管，两端塞以棉球，带回实验室检查

25 收集公牛包皮冲洗液，应 先准备100—150毫升加温 到30—35℃的生理盐水， 用针筒注入包皮腔。用手 指将包皮口捏紧，用另一 手按摩包皮后部，而后放 松手指，将液体收集于广 口瓶中待查

26 流产胎儿，可取其第四 胃内容物，胸水或腹水 检查

27 检查时应将收集到的病料， 立即放于载玻片上，并防 止材料干燥。对浓稠的阴 道粘液，检查前最好以生 理盐水稀释2-3倍，羊水或 包皮洗涤物最好先以每分 钟2000转的速度离心沉淀 5分钟，而后以沉淀物制片 检查。

28 未染色的标本主要检查活动的虫体，在显微镜下可见其长度略大于一般的白细胞，能清楚地见到波动膜，有时尚可见到鞭毛，在虫体内部可见含有一个圆形或椭圆形的有强折光性的核。

29 波动膜的发现，常作为本虫与其它一些非致病性鞭毛虫和纤毛虫在形态上相区别的依据。也可将标本固定，用姬氏染液或苏木素染色后检查

30 马媾疫锥虫在末梢血液中 很少出现，因此血液学检 查在马媾疫诊断上的用处 不大。检查材料主要应采 取浮肿部皮肤或丘疹的抽 出液，尿道及阴道的粘膜 刮取物，特别在粘膜刮取 物中最易发现虫体

31 采取病料时，浮肿液和皮 肤丘疹液用消毒的注射器 抽取，为了防止吸入血液 发生凝固，可于注射器内 先吸入适量的 2% 柠檬酸 钠生理盐水。

32 马阴道粘膜刮取物的采取，先用阴道扩张器扩张阴道，再用长柄锐匙在其粘膜有
炎症的部位刮取，刮时应 稍用力，使刮取物微带血液，则其中容易检到锥虫。

33 采取公马尿道刮取物时，应先将马保定，左手伸入包皮内，以食指插入龟头窝中，徐徐用力以牵出阴茎，用消毒的长柄锐匙插入尿道内，刮取病料

34 以上所采的病料，均可加 适当量的生理盐水，置载 玻片上，覆以盖玻片，制 成压滴标本检查；也可制 成抹片，用姬氏液染色后 检查

35 也可用灭菌纱布，以生理 盐水浸湿，用敷料钳夹持， 插入公马尿道或母马阴道， 擦洗后，取出纱布，洗入 无菌生理盐水中，将盐水 离心沉淀，取沉淀物检查， 方法同上

36 四、血液和组织内虫体 检查法

37 1. 鲜血压滴标本检查 2. 涂片染色标本检查 3. 虫体浓集法

38 涂片法虽然可以查到血液 中的原虫，但血液中的虫 体较少时，则不易查出虫 体。为此，常先进行集虫， 再制片检查。其操作过程 是采病畜抗凝血6-7毫升， 以每分钟500转的速度，离 心5分钟，使其中大部分红 细胞沉降；

39 而后将含有少量红细胞，白细胞和虫体的上层血浆移入另一离心管中，补加一些生理盐水，以每分钟2500转的速度离心10分钟。取沉淀物制成抹片，按上述染色法染色检查。此法适用于伊氏锥虫病和梨形虫病。

40 其原理是锥虫和感染有梨 形虫的红细胞较正常红细 胞的比重为轻，所以在第 一次沉淀时，正常红细胞 下降，而锥虫和感染有梨 形虫的红细胞尚悬浮在血 浆中。第二次离心沉淀时，则将其浓集于管底。

41 对于血液中的微丝蚴，也可用虫体浓集法。方法是采血于离心管中。加入5%醋酸溶液以溶血。待溶血完成后，离心并吸取沉淀检查

42 4. 组织内虫体检查法 有些原虫可以在动物身体的 不同组织内寄生。一般在死 后剖检时，取一小块组织， 以其切面在载玻片上做成抹 片、触片，或将小块组织固 定后制成组织切片，染色检 查。抹片或触片可用瑞氏染 色法或姬氏染液染色

43 泰勒虫的病畜，常呈现局 部体表淋巴结肿大，取淋 巴结穿刺物，进行显微镜 检查以寻找病原体，对本 病的早期诊断很有帮助。 其方法是，首先将病畜保 定，用右手将肿大的淋巴 结稍向上方推移，并用左 手固定淋巴结；

44 局部剪毛，消毒，以10毫 升注射器和较粗的针头刺 入淋巴结，抽取淋巴组织；拔出针头，将针头内容物 推挤到载玻片上，涂成抹片，固定，染色，镜检， 可以找到柯赫氏蓝体

45 家畜患弓浆虫病时，除死 后可在一些组织中找到包 囊和速殖子外，生前诊断 可取腹水，检查其中滋养 体的存在。收集腹水，猪 只可采取侧卧保定，穿刺 部在白线下侧脐的后方 （公畜）或前方（母畜） 1-2厘米处。

46 穿刺时先局部消毒，将皮肤推向一侧，针头以略倾斜的方向向下刺入，深度约2-4厘米，针头刺入腹腔后会感到阻力骤减，而后有腹水流出。取得的腹水可在载玻片上抹片，以瑞氏液或姬氏液染色后检查

47 旋毛虫的幼虫寄生于横纹 肌中 肌肉中旋毛虫的检查，是 肉品卫生检验的重要项目， 世界各国使用的方法大同 小异。传统的方法为镜检 法，但目前欧、美等国多 用消化法

48 镜检法为取隔肌肉样0.5~ 1g剪成3×10mm的小块， 用厚玻片压紧，放显微 镜下检查或投放到屏幕 上观察

49 消化法为取100g肉样，搅碎 或剪碎，放入3L的烧瓶内。 加入10g胃蛋白酶，溶于2L 自来水。加入16ml盐酸 （25%），放入一磁力搅拌 棒。置于可加热的磁力搅拌 器上，设温于44~46℃。

50 30min后, 将消化液用180μm的滤筛滤入一2L的分离漏斗, 静置30min, 放出40ml液体于一50ml的量筒内, 静置10min, 吸去30ml上清夜。

51 加入30ml水，摇匀。10min后，再吸去30ml上清液。剩下的液体到入一带有格线的平皿内，用20-50X显微镜观察

52 五、动物接种法

53 伊氏锥虫 试验动物可用小鼠、大鼠、 豚鼠、兔或犬。其中尤以小 鼠最适用。接种材料用可疑 病畜的抗凝血液，血液采取 后应在2-4小时内接种完毕。 接种量 毫升，可接种 于腹腔或皮下。

54 接种后的动物应隔离并经常检查。当病料中含虫较多时，小鼠在接种后1-3日即可在其外周血液中查到锥虫，当病料内含虫量少时，发病时间可能延长，

55 因此接种后至少观察一个月，也可于接种的第3天
采接种小鼠的血液0.5~1.0 毫升，接种于另一只小鼠，如此盲传3代，即可在接种 小鼠外周血内发现虫体

56 2.马媾疫 马媾疫锥虫不能接种于多数实验动物，但可将病畜的阴道或尿道刮取物与无菌生理盐水混合，接种于公家兔的睾丸实质中，每个睾丸的接种量为0.2 毫升。

57 如有媾疫锥虫存在，经1-2 周后，即可见家兔的阴囊、阴茎、睾丸以及耳、唇周 围的皮肤发生水肿，并可 在水肿液内检出虫体

58 3.胎儿毛滴虫 取病牛阴道分泌物或包皮冲洗液为病料，接种于妊娠豚鼠的腹腔内，在接种后1-20天可以使妊娠豚鼠发生流产，在其流产胎儿的消化道和胎盘里可查出大量的毛滴虫

59 4.弓形虫 弓形虫是多宿主病原原虫，多种家畜和实验动物均具有 易感性，但小鼠对之特别敏感，常常仅数十个虫体即可 使小鼠感染发病。

60 一般取急性死亡的可疑动物 的肺、淋巴结、脾、肝或脑 组织，以1∶5的比例加入生 理盐水，制成乳剂，并加少 量青霉素和链霉素以控制杂 菌感染。

61 吸取乳剂0.2毫升接种于小鼠腹腔，一般急性者在4-5天后发病，病鼠被毛粗乱，食欲消失，腹部膨大，有大量腹水，病程4-5天，最后死亡。抽取病鼠或病死鼠的腹水作涂片，染色检查，可见大量游离的滋养体

62 六、动物剖检法

63 1.全身剖检法 在动物死亡（或捕杀）后， 首先制作血片，染色检查， 观察血液中有无寄生虫， 而后仔细检查体表，观察 有无体表寄生虫

64 而后剥皮，观察皮下组织 中有无虫体寄生

65 将各内部脏器依次取出， 先收集胸水，腹水，沉 淀后观察其中有无寄生 虫。而后取出全部消化 器官及其所附的肝、胰 等腺体。取出呼吸系统、 泌尿系统和生殖系统、 心脏和大的动脉和静脉 血管，分别进行检查

66 消化系统 先将附着其上的肝、胰取下，再将食道，胃（反刍兽应将四个胃分开）、小肠、大肠、盲肠分别结扎后分离

67 呼吸器官 用剪刀将鼻、喉、气管、支气管切开，寻找虫体。 用小刀刮气管粘膜，刮下 物在解剖镜下检查。肺组 织按肝脏处理方法

68 泌尿器官 切开肾，先对肾盂作肉眼 检查，再刮取肾盂粘膜检查。最后将肾实质切成薄片，压 于两玻片间，在放大镜或解 剖镜下检查。剪开输尿管， 膀胱和尿道，检查其粘膜， 并注意粘膜下有无包囊。收 集尿液，用反复沉淀法处理

69 生殖器官 切开并刮下粘膜，压片检查。怀疑为马媾疫和牛胎儿毛滴虫病时，应涂片染色后油镜检查

70 脑 先肉眼检查有无多头蚴，再切成薄片，压片检查 眼 结膜和结膜腔以括搔法 处理检查。剖开眼球，将 前房水收集于皿中，在放 大镜下检查

71 心和主要血管 剖开将内容物洗于生理盐水中，反复用沉淀法检查（对血管内分体吸虫的收集见后） 膈脚 特别是猪，应用镜检法和消化法进行检查

72 2.个别器官和个别寄生虫 剖检法

73 有时为了特定的目的，仅对 某一器官或某一器官中的某 种寄生虫进行检查，如调查 某一地某一器官中寄生虫寄 生的情况，或调查某一地区 某种寄生虫的流行情况，或 考核某一药品对某种寄生虫 的驱虫效果。

74 其剖检方法同全身剖检法。但日本分体吸虫的
剖检需采用专门的方法，介绍如下

75 动物经宰杀停止挣扎后，为防止发生血液凝固，影
响虫体收集，应有四个人 分别从四条腿开始从速进 和剥皮。事毕，将牛头弯 转至牛体左侧，使牛仰卧 呈偏左倾斜姿势，剖开胸 腔及腹腔，除去胸骨。

76 首先分开左右肺找出暗红 色的后腔静脉进行结扎。 接着，在胸腔紧靠脊柱的 部位找到白色的胸主动脉，术者左手将其托起，右手 用尖头剪刀取与血管平行 的方向剪一开口，

77 然后将带有橡皮管的玻璃 管以离心方向插入，并以 棉线结扎固定。橡皮管的 一端与压缩式喷雾器相接，以备进水。

78 第三，从肾脏后方紧贴 脊柱处，同时结扎并列 的腹主动脉与后腔静脉，以避免冲洗液流向后躯 其它部分。

79 第四，在胆囊附近，肝门淋巴结背面，分离出门静脉，向肝的一端紧靠肝脏处先用棉线扎紧，离肝的一端取与血管平行的方向剪一开口（应尽可能靠近肝脏，以免接管进入门静脉的肠支，而影响胃支中虫体的收集），插入带有橡皮管的玻璃接管，并固定之。

80 橡皮管的一端接以铜丝筛，以备出水收集虫体。手术结束后，即可启动喷雾器注入0.9%加温至37—40℃的食盐
水进行冲洗，虫体即随血水落入铜丝筛中，直至水液变清无虫体冲出为止