天然药物化学实验须知 （一）实验要求 （二）实验室规则 （三）实验室安全注意事项 （四）实验报告格式.

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1 天然药物化学实验须知 （一）实验要求 （二）实验室规则 （三）实验室安全注意事项 （四）实验报告格式

2 实验一 药用植物化学成分的提取 一 实验目的 1 了解天然药物成分的分析方法 2 掌握预实验的实验技术 二 实验原理：
实验一 药用植物化学成分的提取 一 实验目的 1 了解天然药物成分的分析方法 2 掌握预实验的实验技术 二 实验原理： 1 单项预试法：寻找特定成分。 2 系统预试法：在未知情况下对可能含有的各类成分进行全面检查。

3 三 实验步骤： 1 制备样品试液 （1）石油醚提取液 —— 挥发油、油脂、甾醇三萜
（1）石油醚提取液 —— 挥发油、油脂、甾醇三萜 （2）乙醇提取液 —— 黄酮内酯、生物碱、酚类香 醇、萜类内酯、强心苷、鞣质、有机酸 （3）水提取液 —— 氨基酸、多肽、蛋白质、糖类、皂苷有机酸 2 选择合适的展开系统 3 薄层层析 取长春花粉末20g,加70%乙醇150ml加热回流0.5h,抽滤，滤液减压浓缩至浸膏。 展开系统： 氯仿：甲醇=10：1

4 实验 二 薄层层析及中药成分预实验 一 实验目的： 1 了解薄层层析的原理及应用。 2 掌握薄层层析的实验技术。 二 实验原理
实验 二 薄层层析及中药成分预实验 一 实验目的： 1 了解薄层层析的原理及应用。 2 掌握薄层层析的实验技术。 二 实验原理 薄层色谱即TLC，属固液吸附色谱，利用吸附剂（硅胶）对不同组分吸附能力的差异，从而达到分离目的的方法。 三 TLC的应用 1 可用于判断两个化合物是否相同。 2 可用于确定混合物中含有的组分数。 3 可用于为柱色谱选择合适的展开剂。 4 可跟踪有机反应。

5 实验步骤 1 点样：画出起点线，即距离薄层板一端约1cm处。
2 展开：浸入深度0.5cm,待展开剂前沿离顶端1cm处，取出用铅笔画出展开剂前沿。 展开剂：氯仿：石油醚=5：1 显色：（1） 紫外灯；（2）碘缸；（3）5% 硫酸乙醇溶液 4 计算比移值 Rf = 原点距斑点中心距离/原点距展开剂前沿距离 思考题： 1、在混合物的薄层色谱中，如何判定各组分在薄层上的位置？ 2、展开剂的的高度若超过了点样线对实验结果有何影响？ 3、对一个未知混合物如何选择展开剂？

6 实验三 硅胶柱层析 一 实验目的 1、 了解硅胶柱层析的原理。 2 、掌握硅胶柱层析的技术。 二 实验原理
实验三 硅胶柱层析 一 实验目的 1、 了解硅胶柱层析的原理。 2 、掌握硅胶柱层析的技术。 二 实验原理 硅胶柱层析属吸附色谱，是利用吸附剂硅胶对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂洗脱，以使组分分离。

7 三 实验步骤 1 装柱 湿法：量取一定量体积的洗脱剂（V0），倒入色谱柱中，然后，将硅胶放置于烧杯中，加入一定量的洗脱剂搅拌至无气泡，加入柱内，并将活塞打开，一边沉降一边加，直到加完硅胶，仍使洗脱剂流滴一段时间，使色谱柱中高于硅胶的溶剂几乎全部留入接收瓶中，正确计量接收器中的溶剂量（V1），计算色谱柱的保留体积（V0-V1） 2 上样 干法： 称取一定量硅胶（色谱柱中硅胶量的10%），置于蒸发皿中，用滴管慢慢加入样品溶液，用滴管慢慢加入样品溶液，边加边搅拌，待硅胶已完全被样品溶液湿润时，在水浴锅上蒸除溶剂，蒸除溶剂后的吸附有样品的硅胶在1000C加热除去水分，

8 3 洗脱 样品加完后打开活塞放出液体至柱面相同时，加入洗脱剂至液面高出柱面约10cm,在柱面上加入一个小滤纸片，再加2cm厚的硅胶，再加一团脱脂棉。 洗脱剂：石油醚：乙酸乙脂：=3：1 洗脱收集：每份洗脱液按30ml收集 显色合并：

9 槐花米中芦丁的提取分离

10 实验目的 通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理与操作。 了解苷类结构研究的一般程序和方法
了解UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用

11 实验原理 芦丁溶于热水，难溶于冷水，且分子具较多酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶，在酸中易析出沉淀，故可采用碱提酸沉法提取芦丁。

12 置1000ml烧杯中，加水600ml，搅拌下加入石灰乳，调pH8—9，加热至微沸，保持30分钟，趁热抽滤。
实验方法 1、芦丁的提取、精制 槐米粗粉（40g） 置1000ml烧杯中，加水600ml，搅拌下加入石灰乳，调pH8—9，加热至微沸，保持30分钟，趁热抽滤。 残渣 滤液 在60—70℃下用浓盐酸调 pH4—5，静置1小时，抽滤 沉淀（粗品芦丁） 滤液

13 将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15min，趁热 抽滤
粗品芦丁 将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15min，趁热 抽滤 残渣 滤液 在60—70℃下用浓盐酸调 pH4—5，静置1小时，抽滤 芦丁精品 注： ①加石灰乳时pH不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而不溶于水而析出； ②加热过程中须不断补充蒸发掉的水分，以保持pH8—9； ③pH过低会使芦丁形成盐而降低产率； ④可利用芦丁在冷热水中溶解度差别来达到结晶目的。得到的沉淀要粗称一下， 按芦丁在热水中1：200溶解度加蒸馏水进行重结晶。

14 2、芦丁的鉴定 （1）芦丁的定性反应： 取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使溶解，分成三份做下述试验。
颜色变化情况。 ② 取上述溶液1~2ml，然后加2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录 ③ 取上述溶液1~2ml， 加等体积的10%α—萘酚乙醇溶液，摇匀， 沿着管壁滴加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色变化

15 思考题 苷类结构的鉴定大体程序如何？ 怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O-上？ 怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖？

16 大黄中蒽醌类成分的提取分离

17 实验目的 1．掌握PH梯度萃取的原理及操作技术； 2．掌握蒽醌类化合物鉴定方法； 3.了解液液萃取法分离混合物的实验方法；

18 实验原理 利用乙醇为提取溶剂，可把不同类型性质互异的蒽醌类成分提取出来；
总蒽醌苷元在乙醚中有一定的溶解度，故回收乙醇后得总提取物可用乙醚提取总苷元； 根据蒽醌衍生物的酸性强弱，用不同的碱液进行萃取，最后得到不同的蒽醌苷元。

19 置1000ml 圆底烧瓶中，加入95%乙醇250ml，回流提取2hr，趁热抽滤
实验方法 1、大黄中总蒽醌成分的提取分离 大黄粗粉100g 置1000ml 圆底烧瓶中，加入95%乙醇250ml，回流提取2hr，趁热抽滤 醇液 药渣 加入95%乙醇200ml，回流提取1.5hr，趁热抽滤 醇液 药渣

20 放冷，加入乙醚60ml冷浸，振摇20′将乙醚液倾入500ml三角瓶中
乙醇提取液 静置冷却，抽滤 滤液 减压回收乙醇至糖浆状，将浓缩物转移至250ml三角瓶中 乙醇总提物 放冷，加入乙醚60ml冷浸，振摇20′将乙醚液倾入500ml三角瓶中 乙醚层 浸膏 40ml乙醚+16ml丙酮冷浸三次（每次15′） 乙醚层 浸膏 乙醚总提液

21 5%NaHCO3水溶液萃取3次，每次40、30、30ml，至水层颜色变浅
2、游离蒽醌的分离 乙醚总提液 5%NaHCO3水溶液萃取3次，每次40、30、30ml，至水层颜色变浅 乙醚层 碱水层 5%Na2CO3水溶液萃取3次，每次40、35、35ml 滴加HCl酸化，静置沉淀，抽滤，水洗至中性，干燥 沉淀I，大黄酸 碱水层 乙醚层 酸化，抽滤水洗，干燥 2%NaOH水溶液萃取3次，每次30ml， 沉淀Ⅱ 大黄素 乙醚层 碱水层 酸化，抽滤水洗，干燥 沉淀Ⅲ 大黄素甲醚、大黄酚

22 3、蒽醌类化合物的检识 （1）薄层鉴别 吸附剂：硅胶 展开剂：石油醚-正己烷-苯-甲酸乙酯-甲醇-水 （25：75：5：35：6：25）
显 色：紫外灯下观察，斑点为黄色 （2）呈色反应 ① 滴加2%NaOH水溶液，观察颜色变化 ② 滴加0.5%醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化 ③ 滴加浓硫酸数滴，观察颜色变化

23 思考题 PH梯度萃取的原理是什么？ 大黄中各蒽醌化合物的酸性及极性强弱顺序如何？
根据大黄中所含五种羟基蒽醌的结构，说明为什么它们可以分别被不同强度的碱性水溶液提取出来？